第一章 光、荧光和荧光色素 1
一、光和发光 1
二、荧光 1
三、荧光色素 4
(一)荧光染色液的pH值 5
(二)荧光染色液的浓度 6
(三)荧光染色液的温度 7
第二章 荧光显微镜 9
一、光源 10
二、滤片系统 11
(一)Reichert荧光显微镜中的各型滤片 11
(二)Nibon荧光显微镜中的各型滤片 14
三、显微镜 17
第三章 动物组织的自发性荧光和续发性荧光 21
一、组织细胞的自发性荧光 21
(一)显示肾上腺髓质细胞中去甲肾上腺素的荧光方法 23
(二)显示神经纤维和肥大细胞中单胺成分的荧光方法 23
(三)显示肾上腺素能神经纤维的改良法 24
(四)显示脑干单胺神经元或消化道粘膜内分泌细胞的荧光方法 24
二、组织细胞的续发性荧光 25
(一)吖啶橙(简称AO)活细胞荧光染色法 25
1.培养细胞AO荧光染色法 25
2.末梢血细胞AO荧光染色法 26
3.肥大细胞AO荧光染色法 27
4.精子AO荧光染色法 27
5.各种寄生虫和虫卵AO荧光染色法 27
(二)7690-Xu活细胞荧光染色法 29
1.淋巴细胞7690-Xu荧光染色法 29
2.巨噬细胞7690-Xu荧光染色法 34
3.尿液中癌细胞7690-Xu荧光染色法 36
4.骨髓穿刺液骨髓瘤细胞7690-Xu荧光染色法 37
5.胸腹水癌细胞7690-Xu荧光染色法 38
(三)固定细胞荧光染色法 38
1.显示细胞内DNA和RNA的AO荧光染色法 38
2.检测疟原虫血涂片AO荧光染色法 40
3.改进的AO荧光快速染色法 41
4.显示细胞核DNA荧光Feulgen反应法 44
5.显示粘蛋白的荧光PAS反应法 45
6.显示酸性粘多糖的荧光染色法 46
7.显示淀粉样物质(amyloid)荧光染色法 46
8.显示类脂质的磷化氢3R荧光染色法 47
9.显示类脂质的3，4-苯并芘(3，4-benzopyrene)荧光染色法 47
10.同时显示两种核酸和类脂质的荧光染色法 48
11.显示Y染色体的荧光染色法 48
12.显示姊妹染色单体的荧光染色法 49
13.荧光氨诱发细胞内一级氨基方法 51
14.显示钙和铝的荧光染色法 51
(四)病原微生物的荧光染色法 52
1.抗酸杆菌金胺-罗达明荧光染色法 52
2.抗酸杆菌金胺荧光染色法 53
3.白喉杆菌荧光染色法 53
4.球菌荧光染色法 54
5.螺旋体荧光染色法 54
6.立克次体荧光染色法 54
第四章 免疫荧光技术 56
一、荧光抗体染色方法的基本原理 56
(一)直接法 57
(二)间接法 57
1.抗原间接显示法(双层法) 57
2.细胞内抗体间接显示法(夹层法) 58
(三)补体法 58
二、荧光抗体的制备和染色方法 59
(一)抗原(免疫原) 59
(二)制备免疫血清 60
1.制备高效价免疫血清的条件 60
2.制备免疫血清的方法 61
(三)提取免疫球蛋白 62
(四)制备荧光抗体 64
1.荧光色素 64
2.标记方法 64
3.标记抗体的提纯 66
(五)荧光抗体染色方法 72
1.直接染色法 72
2.间接染色法 72
3.补体染色法 73
4.双重染色法 73
(六)染色标本的保存和封片介质的制备 74
1.染色标本的保存 74
2.封片介质的制备 74
三、免疫荧光技术在医学中的应用 74
(一)荧光抗体染色方法在组织细胞学研究方面的应用 74
1.激素和酶的定位 74
2.组织和细胞内抗原性物质的示踪 75
3.细胞膜抗原和膜受体的观察 77
4.有关免疫细胞学研究 79
(二)荧光抗体染色方法在细菌学和病毒学中的应用 80
(三)荧光抗体染色方法在自身免疫病研究与诊断中的应用 82
1.肾脏疾病 84
2.肝脏疾病 85
3.重症肌无力 85
4.系统性红斑狼疮 86
5.类风湿性关节炎 87
6.各种皮肤病 87
(四)荧光抗体染色方法在寄生虫学中的应用 88
1.阿米巴病 90
2.锥虫病 90
3.疟疾 91
4.弓浆虫病 92
5.丝虫病 92
6.旋毛虫病 93
7.血吸虫病 93
8.棘球蚴病 94
9.其他原虫病 95
10.其他蠕虫病 97
第五章 荧光和免疫荧光染色在流式细胞术中的应用 101
一、流式细胞仪的基本结构和主要原理 101
(一)基本结构 101
(二)主要原理 102
二、光信号及意义 103
(一)前向散射光 103
(二)侧向散射光 103
(三)荧光讯号 103
三、数据显示及分析 104
(一)直方图 104
(二)二维点图 104
(三)三维图 105
四、流式细胞术可测量的主要参数 106
(一)结构性参数 106
(二)功能性参数 106
五、样本准备 106
(一)单细胞悬液制备 107
1.脱落细胞等标本 107
2.单层培养细胞标本 107
3.实体组织标本 108
4.石蜡包埋标本 109
(二)染色方法 109
1.溴化乙啶或碘化丙啶荧光染色法 110
2.哌若宁Y荧光染色法 110
3.吖啶橙荧光染色法 111
4.异硫氰酸荧光素免疫荧光染色法 112
六、流式细胞术的主要应用 112
(一)细胞周期和DNA倍体分析 112
(二)染色体分析 115
(三)细胞表面标志的检测 115
(四)细胞分选 116
第六章 荧光显微摄影方法 118
一、自动摄影装置的组成部件 118
(一)目镜取景器 118
(二)聚焦望远镜 119
(三)自动摄影装置的快门箱和曝光表 120
(四)自动摄影装置暗盒 120
(五)自动摄影装置的控制箱 120
二、显微摄影方法和步骤 122
(一)自动曝光方法 122
(二)手控曝光方法 123
三、显微摄影过程中易发生的问题和纠正方法 124
(一)影像模糊 124
(二)影像亮度不均匀 124
(三)影像明暗反差小 124
(四)影像画面中出现阴影 125
(五)影像色调失真 125
四、常用黑白和彩色正负片及彩色相纸冲洗过程和配方 125
(一)冲洗印放黑白片常用配方 126
(二)冲洗印放彩色片常用配方和冲洗过程 127
五、冲洗彩色正负片和彩色相纸时的注意事项 135
参考文献 137