目录 1
1．绪论 1
1.1分子生物学与基因工程一瞥 1
1.1.1Watson和Crick的DNA模板学说 1
1.1.2Monod和Jacob的操纵子学说 4
1.1.3基因工程的工具酶和载体 5
1.1.4基因工程的基本程序 6
1.2基因工程与分子生物学进展一览 7
1.2.1基因工程的研究成就 7
1.2.2分子生物学的研究成就 26
1.3基因工程与分子生物学的发展趋势及展望 40
1.3.1蛋白质工程：改造基因、改造蛋白质、改造生命 40
1.3.2分子生物电子学的兴起以及不同学科的相互渗透 41
1.3.3走向海洋，走向宇宙空间 42
1.3.4大规模深入研究的重大战略部署 43
1.4不结束语 44
2．分子生物学实验室常规仪器设备 46
2.1实验室的基本要求 46
2.2.2水的净化装置 47
2.2实验室的常规仪器及设施 47
2.2.1温度控制系统 47
2.2.3消毒设备 48
2.2.4计量系统 48
2.2.5其它设备 49
2.3离心机室的装备 50
2.4分析仪器室的设置 50
2.4.1电泳装置 50
2.4.2层析装置 52
2.4.5DNA合成仪 54
2.4.6DNA测定仪 54
2.4.3光密度仪 54
2.4.4真空印迹系统 54
2.4.7PCR仪 55
2.5核素实验室 56
2.5.1放射性核素操作实验室 56
2.5.2放射性核素测定室 57
2.6细胞培养室 57
2.6.2温育和贮存区 58
2.6.1无菌操作设施 58
2.6.3观察和研究室 59
2.6.4清洗和消毒 59
2.7暗室 59
2.8冷室 60
3．分子生物学实验室常用技术 61
3.1核酸的纯化 61
3.1.1酚／氯仿抽提核酸溶液的制备 61
3.1.2酚的重蒸馏与水饱和 62
3.2.2丁醇抽提浓缩法 63
3.2核酸的浓缩 63
3.2.1固体聚乙二醇（PEG）吸水浓缩法 63
3.3核酸的沉淀 64
3.3.1核酸沉淀的盐类及浓度 64
3.3.2核酸沉淀的温度与时间 65
3.3.3离心力与离心时间 66
3.3.4有机沉淀剂 66
3.3.5核酸沉淀的操作方法 66
3.4.2荧光分光光度法测定核酸浓度 69
3.4.1分光光度法测定核酸的浓度 69
3.4核酸的定量 69
3.5核酸的贮存 70
3.6限制性内切酶及其应用 71
3.6.1限制性内切酶的功能、分类及命名 71
3.6.2限制性内切酶的数量单位及质量控制 72
3.6.3限制性内切酶酶解体系的建立 73
3.6.4限制性内切酶酶解中常见的问题和解决措施 75
3.6.5限制性内切酶的星号活力 77
3.6.6限制性内切酶的底物位点优势效应 77
3.6.7琼脂糖包埋完整染色体DNA的内切酶酶解 78
3.6.8限制性内切酶对单链DNA的切割 79
3.6.9限制性内切酶位点上的甲基化 79
3.7电泳 80
3.7.1原理 80
3.7.2影响电泳动率的四大因素 80
3.7.3核酸电泳的指示剂与染色剂 83
3.7.4电泳装置 85
3.7.5聚丙烯酰胺凝胶电泳 85
3.7.6琼脂糖凝胶电泳 88
3.7.7脉冲场凝胶电泳 92
3.7.8双相电泳 93
3.8超速离心分离技术 94
3.8.1离心分离物质的原理 94
3.8.2超速离心的分类 95
3.8.3超速离心在核酸分离中的应用 96
3.9柱层析 97
3.9.1排阻层析 98
3.9.3羟基磷灰石柱层析 99
3.9.4离子交换层析 99
3.9.2亲和层析 99
3.9.5反相层析 100
4．核酸的分离与纯化 101
4.1核酸分离提取的原则 101
4.2真核细胞染色体DNA的制备 102
4.3质粒和噬菌体DNA的提取与纯化 109
4.3.1质粒DNA的提取与纯化 109
4.3.2质粒DNA的小量制备 111
4.3.3质粒DNA的大量制备 115
4.3.4质粒DNA的纯化 117
4.3.5噬菌体DNA的提取与纯化 121
4.4DNA片段的分离及纯化 126
4.4.1从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的原则 126
4.4.2DEAE纤维素纸插片电泳法 127
4.4.3电泳洗脱法 128
4.4.4低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法 132
4.4.5玻璃粉末洗脱法 133
4.4.6琼脂糖凝胶中回收DNA片段的纯化 134
4.4.7聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段 135
4.5RNA的分离与纯化（真核细胞RNA的制备） 136
4.4.8蔗糖梯度超速离心分离DNA片段 136
4.5.1创造一个无RNase的环境 137
4.5.2RNA的提取方法 139
4.5.3mRNA的分离与纯化 149
5．核酸分子探针的标记 155
5.1概述 155
5.1.1探针的种类及其选择 155
5.1.2各种标记物及其选择 159
5.1.3放射性核素的探测 161
5.1.5各种标记方法及其选择 162
5.1.4放射性核素的卫生防护 162
5.2.1切口平移法 163
5.2探针的放射性核素标记法 163
5.2.2随机引物法 166
5.2.3单链DNA探针的标记 169
5.2.4cDNA探针的标记 171
5.2.5RNA探针的制备与标记 173
5.2.6DNA探针的末端标记 176
5.2.7寡核苷酸探针的标记 185
5.3非放射性标记法 186
5.2.8碘放射性核素标记法 186
5.3.1酶促标记法 187
5.3.2化学标记法 187
5.4探针的纯化 191
5.4.1凝胶过滤柱层析法 191
5.4.2反相柱层析法 192
5.4.3乙醇沉淀法 193
5.5探针比放射活性的测定 193
5.5.1三氯乙酸沉淀法 193
5.5.2DE-81滤膜吸咐法 194
6．核酸分子杂交 195
6.1膜上印迹杂交 195
6.1.1印迹技术 195
6.1.2固-液相杂交技术 207
6.1.3杂交信号的检测 213
6.1.4滤膜的重复使用 217
6.2液相杂交技术 217
6.2.1核酸酶S1保护分析法 217
6.2.2RNA酶保护分析法 219
6.3核酸原位杂交及其应用 220
6.3.1核酸原位杂交的基本原理 220
6.3.2核酸原位杂交的基本操作方法 224
6.4新技术简介 230
6.4.1亲和捕捉法 230
6.4.2夹心杂交法 230
6.4.3链取代法 231
7．基因克隆技术 233
7.1基因工程诞生的历史背景 233
7.2.1通过建立基因库分离靶基因 234
7.2基因克隆的策略与技术路线 234
7.2.2通过载体在适当宿主中扩增 235
7.3目的基因的来源与产生 235
7.4基因克隆的载体 236
7.4.1质粒载体 236
7.4.2λ噬菌体载体 241
7.4.3粘粒 245
7.4.4丝状噬菌体载体 249
7.4.5真核细胞的克隆载体 251
7.5DNA分子的体外连接 256
7.5.1DNA连接酶及连接机制 256
7.5.2DNA浓度对连接产物构型的影响 259
7.5.3DNA分子连接的策略与方案 262
7.5.4一种快速DNA连接技术 276
7.6重组子导入受体细胞 277
7.6.1概述 277
7.6.2转化方法 278
7.7.1针对遗传表型改变筛选法 282
7.7重组子的筛选与鉴定 282
7.7.2分析重组子结构特征的筛选法 284
7.8亚克隆技术 287
7.9高效率感受态细胞的制备 290
7.9.1感受态细胞制备的影响因素 291
7.9.2高效率感受态细胞制备方法 292
8．基因组文库 295
8.1构建基因组文库的载体 295
8.2.2几种λ噬菌体载体 296
8.2.1应用λ噬菌体构建基因组文库的基本步骤 296
8.2λ噬菌体载体 296
8.3载体DNA的制备 302
8.3.1载体DNA的酶解 302
8.3.2酶切后载体的再连接及包装后的滴度检测 303
8.3.3载体臂的纯化 303
8.3.4载体的脱磷处理 305
8.3.5LamdaGEMll／LamdaGEM12BamHI．XhoI酶切后载体臂的部分填充 305
8.4真核细胞DNA的制备 306
8.4.1几种染色体DNA的提取方法 306
8.4.2限制性内切酶部分酶解高分子量真核DNA 308
8.5.1连接浓度 310
8.5连接和包装 310
8.5.2连接条件的确定 312
8.5.3包装抽提物的制备和体外包装 313
8.6基因组文库的保存和扩增 316
8.7粘性质粒为载体的基因组文库 317
9．cDNA文库 319
9.1概述 319
9.1.1mRNA的分离 319
9.1.4cDNA与载体连接 320
9.1.2cDNA第一链的合成 320
9.1.3cDNA第二链的合成 320
9.1.5噬菌体的包装、转染及质粒DNA的转化 322
9.2cDNA库的构建 323
9.2.1mRNA分离 323
9.2.2第一链的合成 324
9.2.3第二链的合成 324
9.2.4cDNA的甲基化 325
9.2.5cDNA与连接子的连接 325
9.2.7cDNA的克隆 326
9.2.6cDNA的分部分离 326
9.2.8计算克隆效率 327
9.2.9cDNA库的扩增 327
10．DNA序列测定 329
10.1概述 329
10.1.1末端终止法 329
10.1.2化学裂解法 331
10.2末端终止法测定DNA核苷酸序列 331
10.2.1末端终止法所需的关键试剂 331
10.2.3大片段待测DNA片段的定向连续次级克隆 332
10.2.2末端终止法测定DNA序列方法的选择 332
10.2.4用噬菌体M13克隆待测DNA片段 337
10.2.5双脱氧末端终止法 339
10.2.6变性聚丙烯酰胺凝胶制备 343
10.2.7测序产物的凝胶电泳 344
10.2.8TaqDNA聚合酶催化的测序反应及凝胶的银染色法 344
10.3Maxam-Gilbert化学法测定DNA序列 347
10.3.1待测DNA的纯化 347
10.3.2碱基的特异性修饰及裂解 348
10.3.3测序图谱的识读 350
11.2.1ALFexpressTM全自动激光荧光核酸测序仪 352
11.2自动测序仪及操作原理 352
11．DNA序列的自动测定 352
11.1概述 352
11.2.2ABI最新型全自动DNA测序仪 354
11.2.3ABIPRISM310型全自动DNA测序仪（遗传分析仪） 354
11.3自动测序操作程序 354
11.3.1载体系统 354
11.3.2模板DNA的制备 359
11.3.3测序胶的制备 362
11.3.4测序模板DNA聚合酶延伸反应 363
11.3.6核苷酸顺序的阅读 364
11.3.5样品上样和电泳 364
11.3.7测序全程常见问题和解决办法 365
12．外源基因在原核细胞中的表达 367
12.1原核生物基因表达的特点 367
12.2外源基因在原核细胞中表达的重要调控元件 368
12.2.1启动子 368
12.2.2SD序列 371
12.2.3终止子 371
12.3.1非融合型表达蛋白载体pKK223-3 372
12.3几种类型的原核表达载体 372
12.3.2分泌型克隆表达载体PINⅢ系统 373
12.3.3融合蛋白表达载体pGEX系统 373
12.4用于原核细胞表达的外源基因 374
12.5提高外源基因表达水平的措施 375
12.5.1提高翻译水平 376
12.5.2减轻细胞的代谢负荷，提高外源基因的表达水平 376
12.5.3提高表达蛋白的稳定性，防止其降解 377
12.6关于包涵体 378
12.7有关的实验 379
12.7.1外源基因的诱导表达 379
12.7.2细菌的裂解 380
12.7.3包涵体的分离 381
12.7.4包涵体的溶解和复性 381
12.8蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 382
12.9表达产物的免疫学及生物活性的检测 386
13.1.1胸苷激酶基因（tk）选择系统 388
13.1.2二氢叶酸还原酶基因（dhfr）选择系统 388
13.1哺乳动物基因转移的遗传选择标记 388
13．外源基因在真核细胞中的表达 388
13.1.3新霉素抗性选择系统 389
13.1.4氯霉素乙酰转移酶基因检测系统 389
13.2外源基因导入哺乳动物细胞的载体 389
13.2.1SV40载体 389
13.2.2其它病毒载体 391
13.3.1磷酸钙转染技术 392
13.3外源DNA导入哺乳动物细胞的方法 392
13.3.2电穿孔转染技术 394
13.3.3基因显微注射技术 395
13.3.4脂质体载体法 395
13.3.5DEAE-葡聚糖转染技术 396
13.4基因表达产物的检测 397
13.4.1免疫荧光抗体法检测表达蛋白 397
13.4.2免疫沉淀法检测表达蛋白 398
13.4.3Western印迹检测表达蛋白质 400
14.1.2甘油冻存法 404
14.1.1固体斜面法 404
14.1菌种保藏 404
14．基因工程菌的大规模培养 404
14.1.3冷冻干燥法 405
14.2工程菌培养 405
14.2.1影响工程菌生长和产物合成的因素 405
14.2.2工程菌培养方法 408
14.2.3参数检测与控制 408
14.2.4工程菌培养设备—发酵罐及其控制系统 409
14.2.5工程菌培养过程 410
14.3.1菌密度的测定 413
14.3工程菌培养中的主要分析方法 413
14.3.2发酵液中葡萄糖浓度的测定 414
14.3.3发酵液乙酸浓度的测定 415
15．工程菌生产的蛋白的复性与纯化 417
15.1包涵体的制备和溶解 417
15.2变性蛋白的纯化 418
15.3蛋白复性 418
15.3.1影响蛋白复性的因素 418
15.3.2蛋白复性方法 419
15.4蛋白复性的检测方法 420
15.4.2凝胶高压液相色谱法 421
15.4.1反相高压液相色谱法 421
15.4.3细胞测活法 422
15.5蛋白纯化 423
15.5.1蛋白纯化的方法 423
15.5.2蛋白纯化的操作方法 425
15.5.3层析柱的清洗 427
15.6蛋白含量测定 427
15.6.2Lowry法 428
15.6.3BCA法 428
15.6.1紫外分光光度法 428
16．动物细胞的大规模培养 430
16.1培养细胞的特性 430
16.1.1培养细胞的生长方式及类型 430
16.1.2培养细胞的生长特点 430
16.1.3培养细胞的生长过程 431
16.2培养细胞生长的条件 433
16.2.1细胞的营养需要 433
16.2.2细胞的生存环境 434
16.3.2培基的配制 435
16.3.1细胞培基和血清的选择 435
16.2.3无污染及无毒 435
16.3细胞培养的基本技术 435
16.3.3其他常用液体的配制 437
16.3.4原代培养 439
16.3.5传代培养和细胞系的维持 440
16.3.6细胞克隆 441
16.3.7细胞计数 443
16.3.8细胞的冻存与复苏 444
16.3.9细胞培养的污染及检测 446
16.4.1细胞培养规模的放大 451
16.4动物细胞大规模培养 451
16.4.2动物细胞培养生物反应器 452
16.4.3动物细胞微载体培养 452
16.4.4生物反应器的操作 454
17．多聚酶链式反应（PCR）技术 458
17.1PCR技术的原理 458
17.2PCR反应的成分和作用 459
17.2.1PCR反应的缓冲液 459
17.2.2底物（脱氧核糖核苷三磷酸，dNTPs）浓度 459
17.2.6PCR反应的产物积累规律 460
17.2.5PCR反应条件的选择 460
17.2.3PCR反应的酶及其浓度 460
17.2.4引物 460
17.3PCR反应的自动化 461
17.4PCR反应引物设计 461
17.5耐热DNA聚和酶 462
17.6PCR反应模板的准备 464
17.7几种特殊的PCR 465
17.7.1锚定PCR 465
17.7.4多重PCR 466
17.7.3反向PCR 466
17.7.2不对称PCR 466
17.7.5着色互补PCR 467
17.8PCR技术的应用 467
17.8.1遗传性疾病的基因诊断 467
17.8.2PCR反应在检测艾滋病中的应用 471
17.8.3检测癌基因 473
17.8.4PCR在法医学上的应用 475
17.8.5PCR技术在分子生物学中的其它应用 477
18．DNA的化学合成 483
18.1DNA化学合成原理 485
18.2DNA的合成、纯化及鉴定 486
18.2.1DNA合成仪的操作 486
18.2.2DNA的切落及去保护 487
18.2.3寡核苷酸片段的纯化 487
18.2.4寡核苷酸片段的鉴定 488
18.2.5合成产物中DNA含量的测定 488
18.3DNA化学合成的应用 488
18.3.1DNA合成在基因工程和分子生物学研究中的应用 489
18.3.2DNA合成在基因表达和调控方面的应用 490
18.3.3合成基因在医学中的应用 491
19．多肽的固相合成 493
19.1多肽合成原理 493
19.1.1液相多肽合成的简介 493
19.1.2固相多肽合成的简介 494
19.2固相多肽合成 495
19.2.1固相多肽合成的策略 495
19.2.2缩合反应 501
19.2.3反应的监测 502
19.2.4脱保护 503
19.2.5合成中应注意的问题 504
19.2.6肽从树脂上的裂解 505
19.2.7粗肽的纯化 506
19.3环肽的简介 506
19.4固相多肽合成 507
19.4.1实验材料 507
19.4.2第一个氨基酸与树脂的连接 507
19.4.3肽在树脂上的合成 509
19.4.4肽从树脂上的裂解 515
19.4.5脱盐 520
19.4.6纯化 520
19.4.7分析技术 521
19.5结束语 524
20．蛋白质氨基酸组成及序列测定 525
20.1蛋白质及肽的氨基酸组成分析 525
20.1.1实验前的准备：蛋白质水解 525
20.1.2氨基酸的测定 526
20.2.1蛋白质（肽链）的选择性裂解 528
20.2蛋白质N末端氨基酸序列测定 528
20.2.2肽段的分离、纯化 529
20.2.3肽段氨基酸顺序测定 529
21．真核基因表达调控 533
21.1真核基因表达调控基本理论 533
21.1.1真核基因结构功能特点 533
21.1.2真核基因表达调控的策略 534
21.1.3转录前的表达调控 534
21.1.4转录水平的调控 538
21.1.5转录后水平的调控 547
21.1.6翻译水平的调控 549
21.1.7翻译后水平的调控 550
21.2基因表达调控研究方法 550
21.2.1DNaseⅠ超敏感性分析 551
21.2.2DNA甲基化分析 551
21.2.3转录起始位点的测定（引物延伸法） 553
21.2.4体外转录 554
21.2.5进行中的核转录分析 557
21.2.6差示文库 558
21.2.7氯霉素乙酰转移酶分析 560
21.2.8凝胶滞留法 563
21.2.9滤膜结合法 566
21.2.10Southwestern印迹 567
21.2.11足纹法 572
21.2.12蛋白-核酸紫外交联法 588
21.2.13DNA结合蛋白的分离纯化 590
21.2.14编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的筛选 592
22．转基因动物 597
22.1转基因方法 597
22.2.1DNA影响基因转移的因素 598
22.2显微注射DNA的制备与纯化 598
22.2.2显微注射DNA样品的制备 599
22.3鼠的种类与饲养 600
22.3.1鼠的种类 600
22.3.2鼠的安置与饲养 601
22.4超排卵与取卵 601
22.4.1超排卵 601
22.4.2取卵 602
22.5.1制备持卵管与注射针 604
22.5显微注射 604
22.5.2显微注射操作 605
22.6卵的转移 607
22.6.1输卵管转移 607
22.6.2子宫移卵 608
22.7转基因鼠系的建立 609
22.7.1取鼠胚胎 609
22.7.3转基因鼠中外源DNA的分析 610
22.7.4转基因鼠系 610
22.7.2从胎鼠肌肉或幼鼠尾巴提取大分子量DNA 610
22.8卵培养液的配制与保存 611
22.8.1配制M2与M16的培养液的贮存液 611
22.8.2由贮存液配制M2 612
22.8.3由贮存液配制M16 612
22.9转基因动物的应用 612
22.9.1基因表达调控 612
22.9.2转基因动物模型 616
22.9.3用转基因动物生产生物活性物质与药物 617
23.1.1植物转基因基本技术 618
23.1转基因植物的基本技术与方法 618
23．转基因植物 618
23.1.2植物转基因方法 619
23.1.3根癌农杆菌Ti质粒表达载体 619
23.1.4植物组织培养和培养基 619
23.2.2原生质体的制备 622
23.2.3原生质体的转染 622
23.2.4报告基因产物的分析 622
23.2.1烟草悬浮细胞的培养 622
23.2PEG介导的原生质体转染 622
23.3根癌农杆菌介导的叶盘转化法 623
23.3.1烟草无菌苗的培养 623
23.3.2根癌农杆菌感受态的制备及其转化 623
23.3.3烟草叶盘共培养 624
23.3.4转化植株的筛选 624
23.3.5转化植株的田间移栽 624
23.4基因枪法转化愈伤组织 624
23.4.5水稻转化细胞的筛选 625
23.4.4轰击 625
23.4.6植株再生 625
23.4.2金粉制备 625
23.4.3微弹（microcarrier）制备 625
23.4.1水稻愈伤组织的诱导与培养 625
23.5病毒载体表达系统 626
23.5.1病毒cDNA的克隆和外源基因的插入 628
23.5.2体外转录 629
23.5.3重组病毒的小量制备 629
23.5.4病毒的大量繁殖和提纯 629
23.6转基因植株的分析 629
24．人类基因治疗 631
24.1基因治疗概述 631
24.2基因转移系统 632
24.2.1反转录病毒 632
24.2.2腺病毒 633
24.2.3腺病毒伴随病毒 634
24.2.4单纯疱疹病毒 634
24.3.1造血细胞 635
24.3受体细胞与转移基因的表达 635
24.2.5脂质体 635
24.2.6受体介导的蛋白 635
24.3.2肌肉细胞 636
24.3.3成纤维细胞 636
24.3.4肝细胞 637
24.3.5其它细胞 637
24.4人类基因治疗的审批程序 638
24.5基因标记与基因治疗 638
24.6.1腺苷脱氨酶缺陷 639
24.6遗传病基因治疗 639
24.6.2血友病 640
24.7肿瘤基因治疗 641
24.8伦理学安全性与社会效应 641
24.9问题与展望 642
25．体内外基因转移方法 645
25.1体内外基因转移方法概述 645
25.2体内外基因转移方法实例 645
26.1.2穿刺方法 650
26.1.1粒子轰击（基因枪）-RNA疫苗 650
26．非病毒载体基因治疗 650
26.1完全非病毒的基因转移方式 650
26.1.3超声介导的转染方法 651
26.1.4脂质体介导的大脑内连续转移基因 651
26.1.5DNA-合成蛋白（肽）复合物 651
26.1.6哺乳动物人工染色体 652
26.1.7厌氧细菌-梭状芽胞杆菌在癌症基因治疗中的应用 652
26.1.8抗体作为酶或基因的载体 652
26.2.2多瘤病毒的假衣壳作为载体 653
26.2.3噬菌体显示肽定向转移基因 653
26.2.1腺病毒的核内体溶解 653
26.2病毒增强的基因转移方式 653
27．细胞凋亡的研究方法 656
27.1细胞凋亡的形态学检测方法 656
27.1.1凋亡细胞的显微镜观察 656
27.1.2凋亡细胞的姬姆萨染色 656
27.1.3凋亡细胞的电子显微镜观察 657
27.1.4凋亡细胞的碘化丙啶（PI）排斥分析法 657
27.1.5双苯并咪唑染料（Hoechest33342）活细胞吸收分析法 658
27.1.6凋亡细胞对胰蛋白酶和脱氧核糖核酸酶敏感性分析法 659
27.2.1细胞群染色体DNA断裂的测定Ⅰ 660
27.2细胞凋亡的生物化学研究方法 660
27.2.2染色体DNA断裂的测定Ⅱ 661
27.2.3同时分析凋亡细胞染色体DNA断裂及其细胞形态法 661
27.2.4大分子染色体DNA断裂的测定 663
27.2.5细胞凋亡时钙离子浓度的测定 664
27.3细胞凋亡的免疫化学分析方法 666
27.4细胞凋亡的分子生物学研究方法 668
27.4.1过氧化物酶标记测定法 668
27.4.2荧光素标记测定法 670
27.4.3生物素-dUTP／酶标亲和素测定法 672
27.4.4Cy5-dCTP直接荧光标记法 673
28．微卫星技术 677
28.1微卫星技术概述 677
28.1.1概念 677
28.1.2微卫星技术基本特征 677
28.1.3微卫星产生机制 677
28.1.4微卫星标记的筛选 677
28.2.1扩增片段长度多态性 678
28.2微卫星多态标记检测技术 678
28.2.2荧光标记PCR法-采用373ADNA序列荧光标记自动分析仪 680
38.3统计分析 681
28.3.1不同人群之间等位基因频率计算 681
28.3.2人群中Hardy-Weinberg平衡推算 681
28.3.3推算突变率 681
29．cDNA末端快速扩增技术 683
29.1RACE的原理 683
29.2RACE的方法 684
29.3RACE的改良和优化 687
29.3.1反转录 688
29.3.2加尾反应 688
29.3.3PCR扩增和PCR产物的克隆 691
29.4RACE的其它应用及其前景 692
30．mRNA差异显示法 694
30.1mRNA差异显示法原理 694
30.2mRNA差异显示技术 694
31．DNA芯片技术 698
31.1DNA芯片的制作原理 698
31.2.1基因诊断 699
31.2.2应用DNA芯片技术分析基因组及发现新基因 699
31.2DNA芯片的应用 699
31.2.3DNA芯片用于基因表达的研究 700
31.2.4利用DNA芯片进行DNA序列分析 700
31.2.5利用DNA芯片技术进行后基因组研究 700
32．常用遗传统计分析方法 702
32.1Hardy-Weinberg定律 702
32.1.1常染色体基因的Hardy-Weinberg定律 702
32.1.2X-连锁基因的H-W定律 702
32.1.3近亲婚配和Hardy-Weinberg定律 703
32.2.1遗传多态性 704
32.2多态性 704
32.2.2基因频率 707
32.2.3样本取样随机性的验证 707
32.2.4多态性信息量计算 707
32.3多态性连锁分析 708
32.3.1连锁分析 708
32.3.2连锁相-单体型与重组 709
32.3.3连锁不平衡 711
32.4优势对数计分法与计算机程序 711
32.5关联分析 715
32.6传递不平衡检验 716
32.6.1只有一个孩子受累的家庭 716
32.6.2有两个孩子患病的家庭 717
32.6.3有两个以上受累同胞的家庭 717
32.7等位基因共享分析 718
32.7.1受累同胞对分析 719
32.7.2不一致同胞对 720
32.7.3受累亲属对分析 720
1．常用限制性内切酶酶切位点 722
附录 722
2．放射性核素数据 725
3．离心机转速与离心力的换算 726
4．核酸及蛋白质数据 727
5．分子克隆中使用的试剂与常用缓冲液的配制 733
6．常用贮存液的配制 740
7．常用酶的配制 745
8．常用层析数据 747
9．细菌培养基、抗生素和菌株 750
英汉分子生物学词汇 761
索引 801