第一章 核酸的结构及性质 1
本章大纲 1
一、核酸 1
二、核糖及碱基 2
三、核苷 2
四、核苷酸 3
五、DNA与RNA的结构 4
六、DNA与RNA的物理性质 6
本章总结 8
试题范例 8
参考文献 10
第二章 复制、转录及翻译 11
本章大纲 11
一、简介 11
二、DNA复制 11
三、转录 12
四、pre-mRNA的加帽 13
五、pre-mRNA的剪接 14
六、pre-mRNA 3'端的改造 17
七、翻译 18
八、翻译的调控 20
九、核糖体 22
十、原核细胞的翻译 23
十一、真核细胞的翻译起始 25
十二、内部核糖体进入位点 27
本章总结 27
试题范例 29
参考文献 30
第三章 DNA与RNA的分离与纯化 33
本章大纲 33
一、质粒DNA的分离 33
二、染色体DNA的分离 36
三、DNA的定性及定量 36
四、RNA的分离 37
五、poly-A＋ mRNA的萃取 38
本章总结 38
试题范例 39
参考文献 40
第四章 酶 41
本章大纲 41
一、酶的种类 41
二、限制性内切酶的发现 42
三、限制性内切酶的分类 42
四、限制性内切酶的命名 43
五、经限制性内切酶切割后的DNA末端 44
六、影响限制性内切酶活性的因素 44
七、常用的限制性内切酶 45
八、同切酶 46
九、甲基化酶 48
十、作用于甲基化DNA的限制性内切酶 48
十一、其他降解酶 49
十二、RNA聚合酶 50
十三、DNA聚合酶 50
十四、修饰酶 51
本章总结 52
试题范例 53
参考文献 55
第五章 启动子及操纵子 56
本章大纲 56
一、启动子 56
二、转录终止子的特性 58
三、真核基因的转录 59
四、影响转录的要素 60
五、操纵子 61
六、乳糖操纵子 61
七、乳糖操纵子的抑制 61
八、乳糖操纵子的活化 63
本章总结 64
试题范例 65
参考文献 66
第六章 电泳 68
本章大纲 68
一、电泳的种类及应用 68
二、RNA电泳 68
三、电泳胶的分辨率 69
四、脉冲电泳法 69
五、脉冲电泳所用DNA的制备 70
六、影响脉冲电泳的因素 70
本章总结 70
试题范例 71
参考文献 72
第七章 基因克隆 73
本章大纲 73
一、克隆载体的必要条件 73
二、pBR322及pUC19载体 74
三、DNA片段及载体的制备 75
四、DNA的定量与定性 76
五、DNA片段与载体的比例 76
六、离心透析法 77
七、转化作用 77
八、转化体的筛选 78
九、DNA片段与载体的连接 79
十、避免载体自接的方法 82
十一、加尾、连接物及连接头的应用 82
十二、大肠杆菌的基因型 83
本章总结 85
试题范例 87
参考文献 88
第八章 DNA交互配对反应 90
本章大纲 90
一、DNA交互配对的定义与应用 90
二、Southern转移印迹法 91
三、探针的标记 92
四、RNA探针的制备 93
五、非放射性探针 94
六、交互配对反应的前处理 98
七、交互配对的困难度 98
八、Northern转移印迹法 99
九、探针的来源 99
本章总结 100
试题范例 102
参考文献 103
第九章 基因文库 104
本章大纲 104
一、基因文库的定义及种类 104
二、λ噬菌体的生活史 105
三、λ载体的种类 106
四、λ噬菌体基因转录的调控机制 108
五、λ溶原菌的诱导 109
六、决定λ进入溶菌状态或潜伏状态的因素 110
七、产生透明噬菌斑的λ变种 110
八、λgt10的特性及应用 111
九、λgt11的特性及应用 111
十、一般性及特定性的转导媒介 112
十一、自cDNA文库分离特定的基因 112
十二、cDNA的合成 113
十三、单一方向cDNA的克隆 115
十四、λ噬菌体的组装 116
十五、试管内λ噬菌体的组装 118
十六、选择性cDNA文库的建立 118
十七、cDNA文库内特定基因的筛选 118
本章总结 119
试题范例 120
参考文献 121
第十章 限制性内切酶切点定位 123
本章大纲 123
一、重组载体的检定 123
二、限制性内切酶切点定位 124
本章总结 126
试题范例 126
第十一章 DNA定序 127
本章大纲 127
一、DNA定序的原理 127
二、Maxam and Gilbert定序法 128
三、Sanger定序法 129
四、Sanger定序法新合成DNA的标记 131
五、M13噬菌体的特性 132
六、M13载体的发展史 133
七、噬菌粒的发展史 135
八、定序常遇到的问题 137
九、循环定序法 137
十、自动定序法 138
十一、焦磷酸测序 138
十二、活体内切出系统 140
本章总结 141
试题范例 142
参考文献 143
第十二章 克隆载体 145
本章大纲 145
一、载体携带DNA片段的限度 145
二、EMBL3及EMBL4载体 145
三、黏粒载体 147
四、酵母菌人工染色体载体 148
五、细菌人工染色体载体 153
六、P1噬菌体载体 154
本章总结 155
试题范例 157
参考文献 157
第十三章 聚合酶链反应 159
本章大纲 159
一、PCR的发明及其原理 159
二、PCR引物的设计 160
三、PCR的种类 163
四、PCR反应的污染问题 166
五、PCR反应的对照组 167
六、避免非特异性PCR反应的方法 167
七、PCR的应用 168
八、PCR产物的克隆 170
九、PCR适用的DNA聚合酶 172
十、其他的扩增方法 172
本章总结 177
试题范例 180
参考文献 181
第十四章 蛋白质的表达 182
本章大纲 182
一、利用大肠杆菌制造外来蛋白质的优点与难处 182
二、可被诱导的启动子 182
三、融合蛋白质 183
四、重组蛋白质的纯化 184
五、附加部分的切除 185
六、翻译框架的维持 185
七、表达质粒的制作 186
八、基因表达的测定 188
九、利用噬菌体展示制造抗体 189
十、真核基因表达系统 193
十一、在哺乳类细胞表达蛋白质的调控 198
十二、重组载体送入细胞的方法 200
十三、Gateway克隆系统 201
本章总结 203
试题范例 205
参考文献 206
第十五章 基因突变、转基因动物和RNA的干扰作用 208
本章大纲 208
一、基因突变的方法 208
二、以限制性内切酶进行基因突变 208
三、单个碱基的突变 209
四、以PCR方法改变基因 210
五、改良的PCR基因突变法 213
六、同源重组 215
七、利用同源重组插入一段DNA以破坏基因 216
八、单端及双端的同源重组 217
九、利用同源重组删除一段DNA以破坏基因 218
十、利用同源重组进行基因替换 219
十一、转基因动物 219
十二、RNA的干扰作用 221
本章总结 222
试题范例 224
参考文献 224
第十六章 病毒载体 226
本章大纲 226
一、构成病毒载体的必要条件 226
二、逆转录病毒载体 227
三、腺病毒载体 231
四、腺病毒附属病毒载体 233
五、单纯疱疹病毒载体 234
本章总结 235
试题范例 237
参考文献 237
第十七章 常用的尖端技术 239
本章大纲 239
一、核连缀分析 239
二、报道基因实验 240
三、电泳迁移率转变试验 240
四、DNaseⅠ足迹法 240
五、染色体免疫沉淀法 241
六、双杂交系统 242
七、三杂交系统 244
八、转录起始点的判定 245
九、S1核酸酶分析 246
十、核糖核酸酶A保护试验 247
十一、单链构象多态性 247
十二、异源双链体分析 247
十三、变性梯度凝胶电泳 247
十四、随机扩增多态DNA或任意引物聚合酶链反应 248
十五、增值性断片长度多态现象 248
十六、mRNA分化显示 250
十七、DNA微阵列 250
十八、基因表达系列分析 250
十九、大规模平行信号测序系统 252
二十、寡核苷酸链接和检测定序 256
二十一、全基因表达分析 261
二十二、代表性差别筛选法 262
本章总结 263
试题范例 263
参考文献 265
各章试题答案 267
英中文对照表 269