第1章 绪论 1
1.1 定量细胞学和细胞化学技术发展概况 2
1.2 定量技术简介 3
第2章 图象分析仪在定量技术中的应用 5
2.1 图象分析仪的结构 6
2.1.1 图象的数字化 6
2.1.2 图象分析仪组成 9
2.1.3 彩色图象分析仪构成 12
2.2 图象处理的基本方法 14
2.2.1 图象预处理 14
2.2.4 图象增强 15
2.2.2 图象变换 15
2.2.3 图象平滑 15
2.2.5 图象分割 16
2.2.6 图象识别 16
2.2.7 伪彩色和彩色图象处理 16
2.2.8 图象分析 16
2.2.9 三维形态特征提取 17
2.3 图象分析仪定量测定方法 17
2.3.1 二维几何参数的测定 17
2.3.2 灰度参数测量 25
2.3.4 纹理参数测定 30
2.3.3 色度参数测量 30
2.3.5 扫描电镜图象分析 31
第3章 细胞形态计量学 35
3.1 细胞形态计量的基本方法 36
3.1.1 二维图象与三维结构关系 36
3.1.2 细胞群体和抽样测量 38
3.2 细胞形态参数测量和计算 39
3.2.1 测试系统 39
3.2.2 面积、周长和点计数法 41
3.2.3 体密度的形态测量 44
3.2.4 核质比的形态测量 45
3.2.5 偏性抽样误差时核体密度的校正 46
3.2.6 面密度的形态测量 47
3.2.7 比表面的形态测量 49
3.2.8 平均截距与比表面 50
3.2.9 比膜面与面密度 50
3.2.10 长度密度的形态测量 51
3.2.11 数密度和面数密度的形态测量 52
3.2.12 轴比的形态测量 56
3.2.13 平均直径的形态测量 57
3.2.14 平均体积的形态测量 59
3.2.15 平均表面积的形态测量 59
3.2.16 圆偏度和圆球度的形态测量 60
3.3 误差的计算 61
3.4 图象分析中的体视学测量公式 65
3.5 微血管内皮细胞的图象分析和体视学测量 69
第4章 定量细胞化学技术及应用 75
4.1 细胞化学反应的图象定量分析和体视学测量 77
4.1.1 细胞学反应的图象定量测定 77
4.1.2 细胞化学反应的体视学测量 80
4.2 细胞光度测量在定量技术中的应用 82
4.2.1 吸收光度测量和显微分光光度计 83
4.2.3 显微荧光测量 84
4.2.3 流式细胞光度计的原理及应用 85
4.3 X射线微区元素分析在定量细胞化学中的应用 96
4.3.1 X射线微区分析的基本原理 97
4.3.2 X射线微区分析的基本方法 98
4.3.3 X射线微区分析的一般操作步骤 99
4.3.4 细胞化学的X射线微区元素分析 101
4.4 细胞化学反应的其它定量方法 104
4.4.1 显微偏光光度测量 104
4.4.2 相差和干涉显微测量 105
4.4.3 激光扫描显微镜测量 105
4.4.4 扫描隧道显微镜测量 106
4.4.5 积分微显象测密术 106
5.1 酶细胞化学定义 108
第5章 酶细胞化学技术 108
5.2 酶细胞化学基本原理 109
5.2.1 铅法 110
5.2.2 偶联偶氮法 110
5.2.3 铁氰化钾还原法 111
5.2.4 四唑盐法 111
5.2.5 DAB法 112
5.2.6 铈法 112
5.3 酶细胞化学的一般操作步骤 112
5.3.1 影响酶反应的一些因素 114
5.3.2 取材和固定 115
5.3.3 切片 119
5.3.4 孵育 122
5.3.5 后固定 124
5.3.6 脱水、包埋、超薄切片 124
5.3.7 人为产物 126
5.3.8 对照实验 126
5.4 水解酶的细胞化学方法 127
5.4.1 碱性磷酸酶(ALP) 128
5.4.2 酸性磷酸酶(AcP) 131
5.4.3 非溶酶体酸性磷酸酶 133
5.4.4 胞嘧啶单核苷酸酶(CMPase) 134
5.4.5 酸性单核苷酸酶 135
5.4.6 5′-核苷酸酶(5′-Nase) 136
5.4.7 葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase) 137
5.4.8 3′5′-环核苷酸磷酸二酯酯 138
5.4.9 硫胺素焦磷酸酶(TPPase) 139
5.4.10 核苷二磷酸酶(NDPase) 140
5.4.11 肌苷二磷酸酶(IDPase) 141
5.5.12 尿嘧啶核苷二磷酸酶(UDPase) 142
5.4.13 烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酶(NADPase) 142
5.4.14 腺苷三磷酸酶(ATPase) 143
5.4.15 Ca2+-ATP酶 144
5.4.16 Mg2+-ATP酶 145
5.4.17 Na+-K+-ATP酶 147
5.4.18 腺苷酸环化酶(ACase) 148
5.4.19 酯酶 150
5.4.20 脂酶 151
5.4.21 乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶(AChE和ChE) 151
5.5 氧化还原酶 153
5.5.1 琥珀酸脱氢酶(SDH) 154
5.5.2 乳酸脱氢酶(LDH) 155
5.5.4 过氧化物酶 158
5.5.5 D-氨基酸氧化酶(D-AAOX) 159
5.5.6 a-羟酸氧化酶(a-HAOX) 160
5.6 转移酶 161
5.6.1 胆碱乙酰化酶(ChAc) 162
5.6.2 糖原合成酶 164
5.7 异构酶和裂解酶 165
5.7.1 尿嘧啶核苷二磷酸葡萄糖醛酸表异构酶 165
5.7.2 柠檬酸合成酶 166
5.8 酶细胞化学定量测定 167
第6章 免疫细胞化学技术 170
6.1 PAP技术 171
6.1.1 PAP法的基本原理 171
6.1.2 PAP复合物的制备 171
6.1.3 PAP法操作步骤 174
6.2.1 ABC法的基本原理 175
6.2 ABC技术 175
6.2.2 ABC法的操作步骤 176
6.3 胶体金标记技术 178
6.3.1 胶体金的制备 179
6.3.2 胶体金制备注意事项 181
6.3.3 免疫金探针的制备 182
6.3.4 光镜免疫金银染色(IGSS) 185
6.3.5 光镜彩色免疫金银法(CIGSS) 187
6.3.6 透射电镜免疫金染色(IGS) 188
6.3.7 扫描电镜免疫金标记 190
6.3.8 免疫电镜双重标记和多重标记 191
7.1 核酸的三氯化铟染色法 196
第7章 核酸细胞化学 196
7.2 核酸的钨酸钠染色法 197
7.3 DNA的Feulgen-六亚甲四胺银染色法 198
7.4 DNA的Feulgen-Shiff-乙醇铊染色法 199
7.5 DNA的锇-胺染色 200
7.6 RNA的选择性染色 201
7.7 核仁组成区嗜银蛋白的银染法 202
7.7.1 AgK-NOR染色法 203
7.7.2 Ag-NOR颗粒计数及图象定量分析 203
7.8 DNA差别染色法 204
7.9 核酸定量细胞化学 205
7.9.1 核酸定量分析法 206
7.9.2 肿瘤DNA定量细胞化学的临床应用 206
第8章 蛋白质细胞化学技术 209
8.1 蛋白质的二硝基氟苯法 209
8.2 蛋白质的丙烯醛法 211
8.3 高硫蛋白质的六亚甲四氨银法 211
第9章 糖类细胞化学 214
9.1 糖蛋白的过碘酸-六亚甲四胺银法 214
9.2 糖原和糖蛋白的氨基硫脲-蛋白质酸银法 216
9.3 粘液的六亚甲四胺银法 217
10.1 保存脂类的特殊脱水包埋法 218
第10章 脂类细胞化学 218
10.2 胆固醇的Schultz改良法 219
10.3 毛地黄皂甙保存胆固醇及超微结构定位 220
10.4 磷脂的保存及超微结构定位 222
第11章 离子细胞化学技术 223
11.1 钙离子的焦梯酸盐法 223
11.2 磷酸盐离子的超微结构定位 225
11.3 氯离子的银沉淀法 226
11.4 重金属的硫化物-银法 227
第12章 生物胺细胞化学 229
12.1 生物胺的重铬酸盐法 229
12.2 生物胺的丙烯醛-重铬酸盐法 230
12.3 中枢神经组织中胺的超微结构定位 231
12.4 生物胺的嗜铬反应 231
第13章 细胞原位杂交技术 233
13.1 原位杂交一般操作步骤 234
13.1.1 固定 234
13.1.2 探针的制备 235
13.1.3 原位杂交条件的控制 237
13.2 生物素标记DNA探针的原位杂交法 238
13.3 原位杂交技术的一些进展 241
附录 常用缓冲液等溶液的配制 244
参考文献 250