第一节 限制性内切酶 1
第一章 DNA重组常用酶 王贤舜 1
第二节 DNA重组常用的其他酶类 5
第二章 DNA重组常用载体 王培之 15
第一节 质粒 15
一、大肠杆菌质粒载体 16
二、枯草杆菌质粒载体 24
三、酵母细胞的基因克隆载体 29
四、质粒DNA的快速纯化和检测 31
第二节 λ噬菌体载体 33
第三节 cosmid载体 35
第四节 单链噬菌体载体 35
一、植物的克隆载体 40
第五节 高等真核细胞的克隆载体 40
二、动物细胞的克隆载体 41
第三章 凝胶电泳 王贤舜 44
第一节 琼脂糖凝胶电泳 44
第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 48
第四章 DNA的分离纯化 刘震乾 52
第一节 细菌染色体DNA的纯化 52
第二节 质粒DNA的提取 53
一、质粒DNA的小量快速提取 53
二、质粒DNA的大量提取和纯化 55
第三节 λ噬菌体DNA的制备 59
一、λ噬菌体的增殖与纯化 59
三、λDNA的小量快速提取 61
二、λDNA的大量制备 61
第四节 从凝胶中回收和纯化DNA 62
第五章 DNA的切割和连接 刘震乾 66
第一节 DNA的切割 66
第六章 核酸分子杂交技术 王申五 刘震乾 66
第二节 DNA片段的连接 67
第三节 DNA片段的末端修饰 69
第一节 同位素标记探针的制备 74
一、缺口平移技术 74
二、核酸的125Ⅰ化学标记 77
第二节 非同位素标记探针的制备 78
第三节 以SP6重组体制备RNA探针 82
第四节 Southern印迹法杂交技术 83
第五节 Northern印迹杂交 87
第六节 斑点杂交 89
一、DNA斑点杂交 89
二、RNA斑点杂交 91
第七节 菌落原位杂交鉴定重组质粒 91
第八节 噬菌斑原位杂交鉴定重组噬菌体 92
第七章 真核生物染色体基因库的构建 王玉珍 95
第一节 载体DNA的制备 95
第二节 插入DNA的制备 97
一、真核高分子量DNA的分离 97
二、高分子量DNA部分酶解及分离纯化 98
第三节 体外包装提取物的制备 100
第四节 DNA连接和体外包装 101
第五节 基因文库的扩增、分装及保存 103
第六节 从基因库中筛选目的基因 105
第一节 mRNA的纯化 107
第八章 真核生物mRNA的纯化和cDNA文库的构建 徐洵 107
一、细胞总RNA的制备 108
二、从组织中提取总RNA 109
三、多聚(A)+RNA的提纯 111
第二节 cDNA文库的构建 113
一、cDNA链的合成 113
二、cDNA的分子克隆 119
附：mRNA的体外翻译 124
一、兔网织红细胞裂解物体外翻译系统 124
二、麦胚抽提液无细胞体外翻译系统 127
第一节 双脱氧-M13系统DNA序列测定法 132
一、由M13克隆系统制备单链模板DNA 132
第九章 DNA序列测定 刘震乾 132
二、双脱氧链末端终止法序列测定 137
第二节 化学裂解法 142
一、DNA片段末端标记 142
二、标记末端的分离 146
三、化学裂解反应 147
四、聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影 151
第十章 重组DNA顺序在原核和真核细胞中的表达 周强 153
第一节 重组DNA顺序导入原核和真核细胞的方法 153
一、大肠杆菌的转化和噬菌体λDNA的导入 153
二、酵母细胞的转化 155
三、动物细胞的转化 157
四、接受外源基因的哺乳动物细胞的筛选 161
一、大细胞技术(Maxicells) 162
第二节 重组DNA表达产物的检测 162
二、紫外线照射细胞的噬菌体感染技术 163
三、免疫沉淀技术检测表达产物 164
第十一章 用体外诱变方法构建突变体 崔涛 167
第一节 缺失突变体 167
一、简单的缺失突变体构建 168
二、精细缺失突变体构建 170
第二节 插入突变 173
一、位点特异性插入 174
二、随机插入 175
第三节 寡聚核苷酸定点诱变 176
一、制备DNA模板 177
二、突变的寡聚核苷酸片段特异性测定 178
三、环状异源双链DNA的体外合成 179
四、富集环状异源双链DNA 180
第四节 盒式突变(casstte mutagenesis) 181
一、简并性寡聚核苷酸的设计和合成 182
二、通过互为引物的寡聚核苷酸合成双链DNA 183
三、寡聚核苷酸片段克隆 184
第五节 转化 185
第六节 筛选突变体 187
附录 193
一、常用实验技术 193
二、有潜在危险的材料与试剂的安全使用 199
三、常用名词缩写和简称 200
四、常用试剂和培养基的配制 202
五、常用实验材料及有关厂家和公司地址 206