概论 1
1 基因克隆的载体与制备 1
1.1 载体与宿主 1
1.1.1 常用载体 1
1.1.2 宿主细菌 11
1.2 质粒DNA的制备 15
实验一 大规模制备质粒DNA--碱变性法抽提pBR322质粒DNA 15
实验二 氯化铯密度梯度超离心提取pXZ6 DNA 23
实验三 小规模制备质粒DNA 29
1.3 质粒DNA的鉴定 36
实验四 紫外吸收检测DNA的浓度与纯度 37
实验五 溴化乙锭--标准DNA浓度比较法测定DNA浓度 40
实验六 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 42
实验七 聚炳烯酰胺凝胶电泳检测DNA 48
实验八 脉冲电泳检测大分子DNA 54
2 目的基因的制备 62
2.1 目的基因的来源 62
实验九 基因的化学合成 63
实验十 基因的PCR扩增技术 71
实验十一 逆转录PCR扩增目的基因 76
实验十二 DNA的限制性内切酶酶切 78
2.2 DNA的酶切 78
实验十三 酶切DNA片断的CIP处理 86
2.3 DNA酶切片段的分离与回收 90
实验十四 从低熔点胶琼脂糖凝胶中分离回收DNA片段 90
实验十五 从琼脂糖凝胶中用DEAE插片法回收DNA片断 94
实验十六 从琼脂糖凝胶中用QIAEX法和透析袋电泳法分离回收DNA片断 96
实验十七 从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段 101
3 基因克隆与重组DNA的检测 107
3.1 DNA的连接与转化 107
实验十八 DNA的重组连接 107
实验十九 重组DNA的转化 113
3.2 重组DNA克隆子的筛选与鉴定 121
实验二十 转化子DNA的快速鉴定 121
实验二十一 λ噬菌体DNA(分子量Marker)的制备 125
实验二十二 重组DNA的快速制备与酶切 133
实验二十三 缺口平移法制备32P-DNA探针 138
实验二十四 菌落原位杂交 149
实验二十五 Southem印迹杂交法 156
实验二十六 噬菌体M13mp18克隆目的基因与DNA制备 162
实验二十七 噬菌体的点杂交(Dol Blot) 167
实验二十八 Nouthern杂交 170
实验二十九 DNA的序列测定--单链DNA的序列测定 174
实验三十 双链DNA的序列分析 180
3.3 寡核苷酸介导的定点突变 184
实验三十一 寡聚核苷酸介导的定点突变：缺口双链法 184
实验三十二 寡聚核苷酸介导的定点突变：掺U法 190
3.4 cCNA文库的构建 197
实验三十三 一步法抽提总RNA 197
实验三十四 mRNA的分离纯化 199
实验三十五 cDNA的合成与分离纯化 201
实验三十六 重组λ噬菌体的包装与铺板 207
4 表达载体的构建与基因表达 213
表达系统的主要条件 213
实验三十七 RlRp启动子表达载体表达目的基因 215
实验三十八 RLAC启动子表达载体系统表达目的基因 217
5 基因工程表达产物的分离纯化与鉴定 221
5.1 基因工程表达产物的分离纯化 221
实验三十九 凝胶过滤层析技术 222
实验四十 离子交换层析技术 225
实验四十一 亲和层析技术 230
实验四十二 高效液相层析和快速蛋白液相层析(HPLC和FPLC技术) 234
实验四十三 大肠杆菌表达基因工程产物的分离纯化 238
实验四十四 酵母细胞表达基因工程产物的分离纯化 242
实验四十五 CHO细胞表达基因工程产物的分离纯化 245
5.2 基因工程产物的分析鉴定 246
实验四十六 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 248
实验四十七 免疫酶标技术(ELISA) 252
实验四十八 蛋白质印迹分析(Western Blot Analysis) 256
实验四十九 蛋白质浓度的测定 261
实验五十 蛋白质等电点的测定 266
实验五十一 蛋白质N末端氨基酸序列分析 272
实验五十二 蛋白质肽谱分析技术 276
实验五十三 重组蛋白的生物学活性测定 280
6 附录 285
6.1 各种试剂的母液配方 285
6.2 常用的抗菌素 292
6.3 玻璃和塑料器皿的硅化 293
6.4 核酸凝胶电泳图谱摄影 293
6.5 X-光底片的冲洗方法 297
6.6 常用仪器与器皿 298
6.7 氨基酸与遗传密码子 301
6.8 核酸、蛋白质换算数据 303