第1章 绪论 1
1．1克隆概念 1
1．2克隆研究的主要内容 2
1．2．1供核细胞的来源和特性 2
1．2．2细胞质受体的来源和特性 3
1．2．3重构胚核质适应机理 3
1．2．4克隆技术支持体系研究 4
1．2．5重构胚胎体内和体外培养技术 4
1．2．6克隆技术实用化研究 4
1．3克隆研究的历史 4
1．4克隆研究的现状 8
第2章 生物的进化 12
2．1地球的形成 12
2．2生命的起源 13
2．3生物进化 13
2．3．1原生动物的出现 13
2．3．2双胚层动物 14
2．3．3三胚层动物 14
2．3．4脊椎动物 15
第3章 细胞 18
3．1细胞生物学基础 18
3．1．1细胞的发现 18
3．1．2细胞的概念 18
3．1．3细胞的结构与功能 20
3．1．4细胞增殖 22
3．2细胞培养技术 25
3．2．1基本概念 25
3．2．2体外培养细胞的基本类型 25
3．2．3细胞培养的基本设备 26
3．2．4常用培养基的准备 31
3．2．5克隆技术中常用的培养基 33
3．2．6细胞培养步骤 34
3．2．7外源基因导入细胞的方法 35
3．3胚胎干细胞 36
3．3．1胚胎干细胞的特点 36
3．3．2胚胎干细胞的培养和建系 38
3．3．3胚胎干细胞的应用 39
第4章 动物的繁殖 40
4．1繁殖机理 40
4．1．1配子的形成 40
4．1．2精子的形生 41
4．1．3卵泡的发育与排卵 42
4．1．4受精作用 43
4．1．5胚胎的发育 45
4．2动物繁殖生物技术 46
4．2．1胚胎移植技术 46
4．2．1．1胚胎来源 47
4．2．1．2胚胎的采集 51
4．2．1．3胚胎的保存 51
4．2．1．4受体动物的准备 51
4．2．1．5胚胎移植 52
4．2．2试管动物技术 52
4．2．2．1卵母细胞的来源 52
4．2．2．2卵母细胞的体外培养和成熟 53
4．2．2．3体外受精 53
第5章 动物基因工程 55
5．1转基因动物技术 55
5．1．1转基因的构建 55
5．1．1．1转基因的基本结构 55
5．1．1．2转基因鸡表达载体的构建 57
5．1．2转基因动物培育方法 57
5．1．2．1原核胚的显微注射法 57
5．1．2．2单细胞阶段的显微注射法制备转基因鸡 58
5．1．2．3胚胎干细胞法 61
5．1．2．4反转录病毒载体法 61
5．1．2．5体细胞转染和胚胎克隆法 62
5．1．2．6原始生殖细胞介导法 62
5．1．2．7精子载体法 63
5．1．2．8脂质体介导精子作载体导入外源基因法 63
5．1．3转基因的检测 63
5．1．4基因构件功能的检测 63
5．1．4．1体外方法 64
5．1．4．2活体组织DNA直接注射法 64
5．1．4．3诱导泌乳法 64
5．1．5基因表达的检测 64
5．1．5．1表达产物的测定 64
5．1．5．2报告基因的应用 65
5．1．6组织特异性表达系统 66
5．1．6．1乳腺表达系统 66
5．1．6．2血液表达系统 66
5．1．6．3膀胱表达系统 67
5．1．6．4禽类输卵管表达系统 67
5．1．6．5昆虫体液表达系统 68
5．1．6．6精液表达系统 69
5．1．7转基因动物作为食物引起的社会反响 69
5．1．8各国的对策 69
5．1．9关于转基因动物安全性 70
5．1．10转基因动物的管理 70
5．2基因打靶技术 71
5．2．1同源重组 72
5．2．2载体的设计和构建 75
5．2．2．1插入型载体 75
5．2．2．2置换型载体 75
5．2．3靶细胞来源 77
5．2．4打靶载体导入细胞技术 77
5．2．5基因打靶技术程序 78
5．2．6中靶细胞的筛选和富集 78
5．2．7基因打靶的类型 79
5．2．8基因打靶的应用 80
5．2．8．1基因敲除的应用 80
5．2．8．2基因功能的修饰 81
5．2．8．3基因表达的调控 82
第6章 微生物和分子克隆 83
6．1微生物的克隆 83
6．1．1微生物概念 83
6．1．2微生物的形态和结构 84
6．1．2．1原核微生物 84
6．1．2．2真核微生物 85
6．1．2．3非细胞微生物 85
6．1．3微生物的繁殖 86
6．1．4微生物的培养 87
6．1．4．1常用器具 87
6．1．4．2培养基 88
6．1．4．3微生物纯培养方法 88
6．1．5基因工程菌 89
6．2分子克隆技术 90
6．2．1 DNA重组分子的制造 90
6．2．2重组DNA的克隆 91
第7章 动物克隆技术 95
7．1哺乳动物克隆技术 95
7．1．1克隆实验室主要设备 96
7．1．2卵母细胞的来源 96
7．1．3核供体细胞的来源 97
7．1．4哺乳动物的核移植 98
7．2胚胎分割 99
7．3胚胎细胞克隆 101
7．3．1供核胚的来源和卵裂球的分离 101
7．3．2核移植 101
7．3．3多代克隆技术 101
7．4胚胎干细胞克隆 102
7．5胎儿成纤维细胞核移植 103
7．6成体细胞克隆 104
7．6．1明星“多莉”的克隆 104
7．6．1．1技术要点 105
7．6．1．2供核细胞来源 105
7．6．1．3供核细胞培养 106
7．6．1．4胞质供体 106
7．6．1．5卵母细胞的去核 106
7．6．1．6去核卵母细胞的激活 106
7．6．2檀香山技术 106
7．6．2．1技术特点 107
7．6．2．2供核细胞 107
7．6．2．3卵母细胞的采集和去核 107
7．6．2．4卵母细胞激活 108
7．6．2．5重构胚的移植 108
7．6．3转基因克隆技术 108
7．6．3．1构建载体 109
7．6．3．2体细胞的培养和基因转染 109
7．6．3．3转染细胞的鉴定 110
7．6．3．4核移植 110
7．6．4基因打靶转基因克隆技术 110
7．6．4．1目的基因（靶基因）的选择 110
7．6．4．2打靶载体的构建 111
7．6．4．3基因打靶转基因克隆羊产生过程 111
7．6．5异种动物克隆 113
第8章 克隆技术的应用 117
8．1克隆技术在畜牧业生产上的应用 118
8．2转基因动物生产 120
8．2．1转基因动物研究存在的问题 120
8．2．2克隆技术在转基因动物生产中的优势 122
8．3特殊动物基因资源的保护 123
8．3．1珍稀动物保护 123
8．3．2天然抗布鲁氏病牛的克隆 125
8．3．3美国野黄牛（gaur）的克隆 125
8．4克隆技术和实验动物 126
8．4．1实验动物种类 126
8．4．2克隆技术与实验动物 128
8．5异种器官移植 129
8．5．1概述 129
8．5．2可能的风险 130
8．5．3排异反应 131
8．5．4器官移植的管理 133
第9章 克隆技术的是非 134
9．1克隆技术存在的问题 134
9．1．1克隆动物生产费用 134
9．1．2克隆动物成活率 134
9．1．3克隆动物个体生理或免疫缺陷 135
9．1．4克隆动物的早衰现象 135
9．2克隆人的争论 137
9．2．1争论的由来 137
9．2．2技术问题 138
9．3影响克隆成功率的因素 139
9．3．1克隆成功率 139
9．3．2影响克隆成败的可能因素 141
9．4克隆展望 141
附录一 有关网站 143
附录二 进行克隆研究的主要单位 144
参考书目 146