译者的话 1
1．分子生物学基础 1
前言 3
致谢 4
2．分子生物学家的工具 5
3．使用本手册的准备工作、步骤和注意事项 10
3-1 本手册的使用 10
3-2 应注意的安全问题 14
3-3 分子生物学研究所需的仪器设备 16
4．克隆载体与细菌细胞 19
4-1 pBR322 19
4-2 M13 21
4-3 pUC 24
4-4 λgt10 26
4-5 λgt11 28
4-6 EMBL 3和EMBL 4 30
4-7 Charon 28 31
4-8 细菌菌株 33
5．从真核细胞中制备DNA 34
5-1 快速制备DNA 34
5-2 从真核细胞中制备DNA的常用方法 37
5-3 从培养细胞和组织中制备DNA 40
5-4 限制性内切酶及其使用 44
5-5 琼脂糖凝胶电泳 51
5-6 Southern印迹 55
6．用标记的合成探针检测核酸 59
6-1 制作DNA合成探针：一般描述 59
6-2 合成探针的末端标记 63
6-3 用(32)P末端标记的合成探针作杂交 66
7-1 切口平移 70
7．用来源子质粒的探针探测核酸 70
7-2 DNA杂交(Southern印迹杂交) 74
8．质粒DNA制备 78
8-1 细菌转化 78
8-2 质粒DNA制备：Triton-溶菌酶法 81
8-3 大量提取的碱裂法：质粒纯化 88
8-4 质粒的“小量制备”法 92
9．DNA限制酶切片段的制备 95
9-1 小凝胶 95
9-2 酶切后分析DNA限制酶切片段：琼脂糖凝胶电泳 98
9-3 电泳洗脱 101
9-4 DNA限制酶切片段的聚丙烯酰胺凝胶电泳 104
10-1 精胺纯化DNA 108
10．纯化DNA 108
10-2 玻璃粉末洗脱DNA 111
10-3 DNA纯化的其他方法 114
11．真核细胞RNA的制备和分析 117
11-1 异硫氰酸胍制备总RNA 117
11-2 RNA的制备：微量法 124
11-3 用寡聚脱氧胸苷纤维素选择Poly(A~+)RNA 127
11-4 甲醛凝胶电泳分离RNA和Northern印迹 131
11-5 标记探针和DNA或RNA样品的点渍印迹杂交 135
11-6 RNA凝胶印迹探测：概述 138
11-7 从克隆在质粒中的DNA制备RNA探针 140
12．制备噬菌体克隆DNA 145
12-1 噬菌体的生长和制备 145
12-2 噬菌体DNA的大量制备和纯化 149
13-1 克隆真核生物基因组DNA：导论 154
13．克隆真核生物基因组DNA 154
13-2 基因组DNA的制备：Mbo I部分酶解法 156
13-3 制备基因组克隆化用的噬菌体载体 160
13-4 基因组DNA与噬菌体臂连接和包装以构建文库 165
13-5 包装的文库效价测定及涂平板培养 167
13-6 用放射性标记探针筛选已倒平板的文库 170
13-7 文库扩增 176
14．cDNA克隆进λgt10和λgt11 178
14-1 cDNA克隆载体λgt10和λgt11的制备 178
14-2 从真核生物mRNA生成cDNA插入片段 184
14-3 cDNA文库用λgt10或λgt11的臂连接并加以包装 194
14-4 已包装的含插入片段的λgt10和λgt11倒平板和筛选 197
14-5 从λgt10和λgt11cDNA克隆制备DNA 203
15-1 用质粒作亚克隆：总则 207
15．用质粒作亚克隆 207
15-2 制备pBR322质粒以供亚克隆和与插入片段连接 209
15-3 pBR322菌落杂交 215
15-4 亚克隆在pUC质粒上 218
16．M13克隆和顺序测定 221
16-1 M13克隆和顺序测定：总则 221
16-2 制备供克隆化的专一限制酶切片段 227
16-3 BAL31核酸外切酶连续缺失法制备供M13克隆比的插入片段 231
16-4 M13载体的制备和插入片段与载体的连接 236
16-5 M13对JM103大肠杆菌宿主的转化 240
16-6 用放射性标记探针筛选M13克隆选出待测顺序的插入片段 243
16-9 制备作顺序分析用的单链M13DNA 245
16-8 M13克隆的单行筛选分析 248
16-9 聚丙烯酰胺顺序分析凝胶的制备 252
16-10 M13克隆的顺序分析 256
17-1 S_1核酸酶保护测定 263
17．克隆DNA的进一步鉴定 263
18．转染离体培养的哺乳动物细胞 273
18-1 用纯化的质粒进行粘着细胞和非粘着细胞的磷酸钙转染 273
18-2 非粘着和粘着哺乳动物细胞的DEAE葡聚糖介导的转染 277
18-3 电穿孔 280
18-4 选择转染的哺乳动物细胞：G418法 283
18-5 氯霉素乙酰转移酶(CAT)分析 285
19．蛋白质方法 288
19-1 体外翻译和免疫沉淀 288
19-2 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 292
19-3 Western印迹分析 297
19-4 用于蛋白质或RNA的银染凝胶 301
20．常用方法 305
20-1 DNA/RNA的抽提和沉淀 305
20-2 塑料袋的封口 309
20-3 光密度的分析测定 312
20-4 凝胶拍照或放射自显影 314
20-5 放射自显影 316
20-6 制作细菌生长的平板 318
20-7 噬菌体的效价测定和涂布 321
21．专用方法 323
21-1 转基因小鼠的制备 323
21-2 单克隆抗体的产生：杂交瘤融合 332
21-3 用标记探针对组织切片作原位杂交 340
21-4 酵母菌为受体的克隆化 345
附录Ⅰ 贮存溶液 348
附录Ⅱ 酶 356
附录Ⅲ 试剂和仪器供应商 358
索引 363