摘要 1
ABSTRACT 3
英文缩略词表 4
一、前言 5
二、立题依据 6
1中医体质研究 6
1.1中医体质学的概述 6
1.2中医体质学的应用 7
2 NONFH的中医研究 7
3痰湿体质与NONFH的联系及意义 7
4 NONFH痰湿体质与基因多态性的研究及意义 8
三、材料与方法 2
1病例资料 9
2诊断及纳入标准 9
2.1西医诊断标准 9
2.2中医诊断标准 9
2.3纳入标准 9
2.4排除标准 9
2.5病例剔除和脱落标准 9
3中医体质分类及判定标准 10
4研究方法 10
4.1调查方法 10
4.2血液标本采集 10
4.3体质判定方法 10
5资料处理与分组 10
5.1建立病例数据库 10
5.2病例分组 11
6实验方法 11
7分子生物学试剂与仪器 11
7.1主要试剂 11
7.2主要实验仪器 11
8统计 12
9技术路线图 13
四、分子生物学实验研究 14
1血液基因组DNA提取 14
1.1血液基因组DNA提取试剂盒组成 14
1.2 DNA提取操作步骤 14
1.3 DNA提取物检测 15
1.4 DNA所得率及纯度测定 15
1.5 DNA储存 15
2 NONFH目标基因SNP位点选择 15
3 SREBPS基因位点相应序列引物设计及合成 16
3.1引物设计与合成 16
3.2引物的配置 16
3.3引物验证 16
4目的基因序列的PCR扩增 16
4.1 PCR反应体系 16
4.2 PCR反应条件 17
4.3 PCR扩增产物验证 17
5琼脂糖水平平板凝胶电泳实验 17
5.1胶液的制备 17
5.2胶板的制备 17
5.3电泳缓冲液 17
5.4加样 17
5.5电泳 18
5.6观察和拍照 18
6 PCR扩增产物纯化 19
6.1 PCR反应液纯化DNA片段的试剂盒组成 19
6.2操作步骤 19
7 PCR纯化产物测序分析 19
7.1测序引物的设计 19
7.2 PCR纯化产物测序 19
五、结果 20
1临床资料结果 20
1.1性别与NONFH相关性分析 20
1.2 NONFH实验室检查分析结果 20
2分子生物学实验研究结果 21
2.1基因组DNA提取结果 21
2.2 SREBP-2、SREBP-1C基因位点相应序列的PCR扩增结果 21
2.3基因测序结果 22
2.3.1 SREBP-2基因SNP位点测序结果 22
2.3.2 SREBP-1C基因SNP位点测序结果 23
2.4 SREBPS基因SNP位点实验结果统计分析 24
2.4.1 SREBP-2基因RS2267439 SNP位点实验结果 24
2.4.2 SREBP-1C基因RS2297508 SNP位点实验结果 29
六、讨论 32
1脂类代谢紊乱学说与NONFH发生机制 32
2中医体质与NONFH的联系及意义 32
3 NONFH及中医体质与SREBPS基因多态性的相关性 33
3.1 NONFH及中医体质与SREBP-2基因多态性的相关性 33
3.1.1 NONFH与SNP位点基因型的相关性 34
3.1.2 NONFH与SNP位点等位基因的相关性 34
3.1.3 NONFH平和质与痰湿质的SNP位点基因型的相关性 34
3.1.4 NONFH平和质与痰湿质的SNP位点等位基因的相关性 34
3.1.5 NONFH平和质及痰湿质与健康对照组基因型的相关性 34
3.1.6 NONFH平和质及痰湿质与健康对照组等位基因的相关性 35
3.2 NONFH与SREBP-1C基因RS2297508位点基因多态性的相关性 35
3.2.1 NONFH与SNP位点基因型的相关性 35
3.2.2 NONFH与SNP位点等位基因的相关性 36
3.2.3 NONFH平和质与痰湿质的SNP位点基因型的相关性 36
3.2.4 NONFH平和质与痰湿质的SNP位点等位基因的相关性 36
3.2.5 NONFH平和质及痰湿质与健康对照组基因型的相关性 36
3.2.6 NONFH平和质及痰湿质与健康对照组等位基因的相关性 36
3.3 NONFH与SREBP-1C基因RS13306739 SNP位点基因型的相关性 36
七、结语 38
参考文献 39
综述 41
甾醇调节因子结合蛋白基因多态性与股骨头缺血性坏死相关性研究进展 41
八、致谢 49
附录 50
附录1 伦理审查表 50
附录2 病例调查材料证明 51
附录3 兰州军区总医院实验场地证明 52
附录4 SREBPS基因库查询SNP序列 53
附录5 非创伤性股骨头坏死中医体质类型及相关基因多态性研究病例调查表 54
附录6 实验、临床瞬间生活集锦 82
附录7 在校期间学习情况 85