绪论 1
一、学习目标 1
二、生物化学实验技术发展简史 1
三、实验室规则 3
四、实验记录与实验报告 3
第一章 量器的使用、校正与实验数据的处理 5
一、常用量器的使用规则 5
二、常用量器容量的校正 6
三、实验误差与数据处理 7
实验一 吸量管和微量可调式移液器的使用、校正与数据处理 10
第二章 分光光度技术 11
一、光吸收的基本知识 11
二、光吸收的基本定律 12
三、吸光度的测量 13
四、定量分析方法 16
实验二 分光光度法测定未知溶液的浓度 16
第三章 层析技术 18
一、层析技术的基本概念和特点 18
二、层析法的分类 19
三、常用的层析方法 19
四、柱层析的基本装置和基本操作 25
实验三 Sephadex G-25凝胶层析 27
第四章 电泳技术 29
一、电泳的基本原理 29
二、电泳的分类 31
三、常用的电泳技术 32
四、染色方法 37
实验四 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 38
实验五 血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳 41
实验六 DNA的琼脂糖凝胶电泳 44
第五章 离心技术 46
一、离心技术的基本理论 46
二、离心机的分类 48
三、常用的离心分离方法 49
四、离心操作注意事项 51
第六章 酶活力的测定与酶法分析 52
一、酶活力的测定 52
二、酶法分析 55
实验七 血清中碱性磷酸酶活力的测定（磷酸苯二钠法） 57
实验八 血清中葡萄糖浓度的测定（GOD-POD法） 59
实验九 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 61
第七章 临床常用生物化学检验 64
一、血清蛋白质含量的测定 64
实验十 血清总蛋白的测定（双缩脲法） 64
实验十一 血清白蛋白的测定（溴甲酚绿法） 66
二、血清葡萄糖含量的测定 68
实验十二 血清葡萄糖的测定（邻甲苯胺法） 68
实验十三 口服葡萄糖耐量试验（OGTT） 70
三、血清脂类物质的测定 71
实验十四 血清甘油三酯的测定（GPO-PAP法） 72
实验十五 血清总胆固醇的测定（胆固醇氧化酶法） 74
实验十六 血清高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-Ch）的测定（磷钨酸-Mg2＋沉淀法） 75
四、肝功能的相关检测 77
实验十七 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力的测定（改良赖氏法） 77
实验十八 血清总胆红素和直接胆红素的测定（改良J-G法） 79
五、肾功能的相关检测 82
实验十九 血清尿素的测定（脲酶比色法） 82
实验二十 血清尿酸的测定（酶偶联法） 84
第八章 基因工程技术 87
一、获取目的基因 88
二、选择适当的载体 88
三、限制性内切酶切割DNA 89
四、DNA片段的回收 90
五、目的基因与载体片段的连接 90
六、重组DNA导入宿主细胞 91
七、重组DNA的筛选与鉴定 91
八、外源基因的表达与目的蛋白的纯化 92
实验二十一 质粒DNA的小量快速提取（碱裂解法） 92
实验二十二 人外周血白细胞DNA的制备（NaI法） 94
第九章 血清白蛋白的纯化与鉴定 96
实验二十三 盐析与葡聚糖凝胶G-25凝胶层析脱盐 97
实验二十四 DEAE-纤维素离子交换层析 99
实验二十五 考马斯亮蓝G250染色法测定蛋白质的浓度 101
实验二十六 蛋白质垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） 102
实验二十七 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） 105
第十章 重组DNA的构建及其在大肠杆菌中的诱导表达 107
实验二十八 目的基因的PCR扩增 108
实验二十九 目的基因与载体的限制性双酶切 111
实验三十 从琼脂糖凝胶中回收DNA（玻璃粉末洗脱法） 112
实验三十一 目的基因片段与载体的连接 114
实验三十二 大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与筛选 115
实验三十三 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和SDS-PAGE检测 117
实验三十四 Western印迹法检测表达蛋白 118
附录 常用生物化学仪器的使用方法 121
附录A 721E型分光光度计 121
附录B HD-3型紫外检测仪 122
附录C BSZ-100型自动部分收集器 124
附录D LM17型记录仪 125
附录E DYY-6C型电泳仪 126
附录F Adventurer系列电子天平 126
附录G H-1650型离心机 127
附录H PTC-150型PCR仪 128
参考文献 130