目录 1
第1章 柱花草研究进展 1
1.1 柱花草的重要性 1
1.2 柱花草炭疽病 2
1.2.1 柱花草炭疽病的主要危害 2
1.2.2 柱花草炭疽病病原菌的遗传多态性及流行性研究 2
1.3 柱花草抗炭疽育种进展 4
1.3.1 收集柱花草种质资源培育抗病品种 4
1.3.2 引种选育 4
1.3.6 转基因抗病育种 5
1.3.5 细胞工程育种 5
1.3.4 杂交育种 5
1.3.3 辐射育种 5
1.4 柱花草生物学研究 6
1.4.1 柱花草细胞遗传学研究 6
1.4.2 柱花草细胞生物学研究 7
1.5 柱花草生物技术研究 7
1.5.1 柱花草组织培养 7
1.5.2 柱花草的原生质体融合 7
1.5.3 柱花草基因克隆 7
1.5.4 柱花草遗传转化 8
1.5.5 柱花草分类及其分子标记 8
参考文献 9
2.1 引言 14
第2章 柱花草种质对炭疽病病原菌的反应 14
2.2.1 供试材料 15
2.2 材料与方法 15
2.2.2 炭疽病病原菌 16
2.2.3 植株接种试验 16
2.2.4 离体叶片接种试验 17
2.3 结果 17
2.3.1 不同柱花草种质对2种类型病原菌的反应 17
2.3.2 不同柱花草种质的离体叶片对胶孢炭疽菌CATAS100的反应评价 19
2.3.3 感病与抗病柱花草种质感病参数比较 21
2.3.4 感病与抗病种质病斑扩展比较 21
2.3.5 盆栽植株与离体叶片对胶孢炭疽菌抗性的差异 21
2.4.3 柱花草的抗炭疽病机制 23
2.5 小结 23
2.4 讨论 23
2.4.2 抗炭疽病柱花草种质 23
2.4.1 柱花草炭疽病原菌的危害 23
参考文献 24
第3章 感病与抗病柱花草遗传多样性的RAPD分析 25
3.1 引言 25
3.2 材料与方法 26
3.2.1 供试材料 26
3.2.2 主要实验仪器 26
3.2.6 酶和DNA标准分子量 27
3.2.5 培养基 27
3.2.7 菌种和克隆载体 27
3.2.4 化学试剂 27
3.2.3 RAPD引物 27
3.2.8 柱花草DNA的提取 28
3.2.9 柱花草RAPD反应体系的建立 29
3.2.10 RAPD数据分析 29
3.2.11 RAPD特异性片段克隆 30
3.3 结果 32
3.3.1 柱花草RAPD反应体系的建立 32
3.3.2 RAPD多态性分析 34
3.3.3 聚类分析 34
3.3.4 多重对应分析 35
3.3.5 RAPD特异性片段的克隆及其分析 38
3.3.6 SG907-1的氨基酸序列同源性比较分析 40
3.4 讨论 40
3.4.1 RAPD扩增的优缺点及克服缺点的措施 40
3.4.2 RAPD聚类分析可靠性 42
3.4.3 SG907-1的克隆 42
3.5 小结 42
参考文献 43
第4章 应用微卫星标记分析柱花草的遗传多样性 45
4.1 引言 45
4.2.4 SSR分析 46
4.2.3 柱花草DNA提取 46
4.2.5 数据分析 46
4.2.1 供试材料 46
4.2 材料与方法 46
4.2.2 主要实验仪器 46
4.3 结果 47
4.3.1 柱花草的微卫星多态性 47
4.3.2 品系内的遗传变异 49
4.3.3 聚类分析 50
4.3.4 抗病与感病柱花草品系在聚类树系图中的分布 50
4.4 讨论 51
4.4.1 SSR技术分析的效果及其与RAPD结果比较 51
4.4.2 柱花草种质的遗传多样性及其应用 52
4.4.3 SSR技术的优点 52
4.5 小结 52
参考文献 53
5.1 引言 54
第5章 感病与抗病柱花草遗传多样性的AFLP分析 54
5.2 材料与方法 56
5.2.1 供试材料 56
5.2.2 化学试剂 56
5.2.3 菌种和克隆载体 57
5.2.4 主要实验仪器 57
5.2.5 柱花草DNA提取 57
5.2.6 AFLP反应 57
5.2.7 AFLP特异性片段的克隆 60
5.2.8 数据分析 61
5.3 结果 61
5.3.1 预扩增效果 61
5.3.2 引物对筛选 61
5.3.3 AFLP多态性分析 62
5.3.4 聚类分析 63
5.3.5 主成分分析 64
5.3.6 AFLP特异性片段的克隆及其分析 66
5.3.7 AFLP特异性片段氨基酸序列同源性比较分析 67
5.4 讨论 68
5.4.1 AFLP扩增反应特点 68
5.4.2 AFLP分析的效果 68
5.4.3 圭亚那柱花草品系的遗传多样性 70
5.4.4 AFLP特性片段的鉴定及其利用 70
5.5 小结 70
参考文献 71
6.1 引言 73
第6章 感病与抗病柱花草核rDNA的ITS1序列分析 73
6.2 材料与方法 74
6.2.1 供试材料 74
6.2.2 引物和酶 74
6.2.3 菌种和克隆载体 74
6.2.4 基因组总DNA提取 74
6.2.5 ITS1扩增 74
6.2.6 ITS1片段回收 74
6.2.7 连接和转化 74
6.2.8 转化子鉴定及克隆测序 75
6.2.9 ITS1序列分析 75
6.3 结果 75
6.3.1 ITS1序列长度及变异 75
6.3.3 遗传分化系数 76
6.3.2 聚类分析 76
6.3.4 ITS1序列的限制性酶切位点分析 83
6.4 讨论 84
6.4.1 应用ITS1分析柱花草种质的变异 84
6.4.2 柱花草种子ITS1序列比对 84
6.4.3 基于ITS1的柱花草种子聚类分析 84
6.5 小结 85
参考文献 85
第7章 几丁质酶基因转化柱花草并选育抗炭疽病植株的研究 87
7.1 引言 87
7.2 材料与方法 88
7.2.1 研究材料 88
7.2.4 大肠杆菌质粒制备 89
7.2.5 土壤农杆菌质粒制备 89
7.2.3 土壤农杆菌转化 89
7.2.2 大肠杆菌转化 89
7.2.6 几丁质酶基因植物表达载体的构建 90
7.2.7 几丁质酶的体外抑制胶孢炭疽菌活性鉴定 90
7.2.8 柱花草组织培养 90
7.2.9 卡那霉素抑制分化与再分化的浓度筛选 91
7.2.10 水稻几丁质酶基因转化柱花草 91
7.2.11 GUS活性检测 91
7.2.12 分子检测 92
7.2.13 转基因柱花草植株胶孢炭疽菌接种及发病评价 92
7.3 结果 92
7.3.1 几丁质酶基因植物表达载体构建 92
7.3.3 质粒pCAMBIACH2转化土壤农杆菌LBA4404 93
7.3.2 几丁质酶基因在大肠杆菌中的表达及其在体外的抑直菌活性 93
7.3.4 柱花草组织培养 94
7.3.5 卡那霉素抑制柱花草愈伤组织分化与再分化的浓度 97
7.3.6 转化植株的获得 98
7.3.7 GUS活性检测 98
7.3.8 NPTII基因的PCR检测 99
7.3.9 转化频率 100
7.3.10 Southern杂交分析 100
7.3.11 转基因柱花草植株对胶孢炭疽菌侵染的反应 100
7.4 讨论 101
7.5 小结 102
参考文献 102
8.2 材料与方法 105
8.2.1 材料 105
第8章 热研7号柱花草的选育 105
8.1 引言 105
8.2.2 方法 106
8.3 结果与分析 107
8.3.1 品种特征特性 107
8.3.2 品种比较试验结果 107
8.3.3 区域性试验结果 108
8.3.4 生产试验结果 109
8.3.5 适宜推广区域 110
8.3.6 主要用途 110
8.4 结论 111
参考文献 111
8.3.7 栽培技术要点 111
第9章 柱花草种子生产研究 112
9.1 引言 112
9.2 分布地区、种植面积及总产量 112
9.3 种子生产的适宜区域 113
9.4 主要栽培品种的产量与质量 114
9.5 种子生产的栽培管理技术 115
9.5.1 育苗 115
9.5.2 移栽 115
9.5.3 田间管理 115
9.5.4 收种 116
9.6 价格及经济效益 116
参考文献 117
9.7 种子生产存在的问题 117
9.8 建议 117
第10章 柱花草种子超干贮藏研究 118
10.1 引言 118
10.2 材料与方法 118
10.2.1 材料 119
10.2.2 研究方法 119
10.3 结果 120
10.3.1 常温贮藏柱花草种子的最佳含水量 120
10.3.2 柱花草种子超干贮藏对活力的影响 120
10.3.3 超干贮藏对种子生理生化的影响 122
10.4 讨论 124
参考文献 124