第1章 分子生物学实验室规范及注意事项 1
1.1 分子生物学实验室常用仪器设备 1
1.2 分子生物学实验室操作规范 3
1.3 分子生物学实验注意事项 6
第2章 常用的检测分析方法 10
2.1 分光光度法 10
2.2 电泳 11
实验1 DNA浓度与纯度的紫外分光光度法分析 13
实验2 DNA的琼脂糖凝胶电泳 15
实验3 DNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳 19
第3章 植物基因组DNA的提取及鉴定 22
3.1 植物基因组DNA 22
3.2 植物基因组DNA的提取技术 22
实验4 改进SDS法提取植物基因组DNA 23
实验5 CTAB法提取植物基因组DNA 28
第4章 动物基因组DNA的提取及鉴定 31
4.1 动物基因组DNA 31
4.2 动物基因组DNA的提取技术 31
实验6 动物组织基因组DNA的提取 32
实验7 血液基因组DNA的提取 35
第5章 微生物基因组DNA的提取及鉴定 38
5.1 微生物基因组DNA 38
5.2 微生物基因组DNA的提取技术 38
实验8 大肠杆菌基因组DNA的提取 40
实验9 酵母基因组DNA的提取 42
实验10 环境微生物基因组DNA的提取 44
第6章 质粒DNA的提取及鉴定 49
6.1 质粒 49
6.2 大肠杆菌质粒DNA的提取技术 50
实验11 碱裂解法小量制备质粒DNA 51
实验12 试剂盒抽提大肠杆菌质粒 55
实验13 质粒DNA的大量制备 57
第7章 哺乳动物组织总RNA的提取及鉴定 59
7.1 哺乳动物组织总RNA 59
7.2 哺乳动物组织总RNA的提取技术 59
7.3 总RNA提取中的关键问题 60
实验14 哺乳动物组织总RNA的提取 60
第8章 PCR基因扩增及检测 65
8.1 PCR技术的原理 65
8.2 PCR技术的发展历程 65
8.3 PCR技术的种类 67
实验15 绿色荧光蛋白基因的PCR扩增 67
实验16 乳铁蛋白基因的PCR扩增 69
实验17 查尔酮合成酶基因的PCR扩增 72
实验18 逆转录PCR扩增 74
第9章 分子杂交 79
9.1 分子杂交的原理 79
9.2 分子杂交的发展历程 79
9.3 分子杂交的种类 80
实验19 Southern杂交 80
实验20 Northern杂交 84
实验21 Western杂交 87
第10章 限制性内切酶消化 91
10.1 限制性内切酶的发现 91
10.2 限制性内切酶的命名及种类 91
10.3 限制性内切酶的反应体系 92
10.4 限制性内切酶酶切图谱 92
实验22 质粒的限制性内切酶消化 93
实验23 λDNA的限制性内切酶消化 95
第11章 目的基因的分离纯化 98
实验24 乙醇沉淀法纯化PCR扩增产物 99
实验25 硅胶膜吸附法纯化PCR扩增产物 101
实验26 外源DNA的琼脂糖凝胶电泳回收 103
第12章 DNA的体外重组 105
12.1 常用的载体 105
12.2 外源DNA与载体的连接方法 105
实验27 PCR产物直接克隆 107
实验28 黏性末端的连接 110
第13章 感受态细胞的制备及转化 112
13.1 转化 112
13.2 感受态细胞的制备方法 112
实验29 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 113
实验30 重组DNA的蓝白斑筛选 116
第14章 外源基因的诱导表达 119
14.1 表达系统 119
14.2 表达载体 120
14.3 外源基因诱导表达的优化 121
实验31 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 122
实验32 蛋白质的SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 124
第15章 基因文库的构建 128
15.1 基因文库的构建方法 128
15.2 基因文库的应用 129
实验33 植物cDNA文库的构建 130