目录 1
第一章 双向电泳概述 1
第一节 双向电泳的概念和原理 1
第二节 双向电泳技术概述 2
一、等电聚焦（IEF） 2
二、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） 6
第三节 蛋白质样品制备 7
一、组织细胞破碎方法 8
二、组织细胞裂解变性缓冲液 8
三、分步提取（Sequential extraction）缓冲液 12
四、应用组织细胞裂解液需要注意的问题 13
第四节 双向电泳的优势、局限性及应用 13
第五节 建立IPG-DALT双向电泳需要考虑的问题 14
第二章 蛋白质样品制备 15
第一节 实验材料、仪器和试剂 15
一、实验材料 15
二、实验仪器与设备 15
三、实验试剂 16
第二节 不同实验材料蛋白质提取方法 17
一、SKOV3细胞蛋白质提取 17
四、实验用酶类、分子量标准和试剂盒 17
二、血清样品 18
三、组织样品蛋白提取 18
第三节 蛋白质浓度测定 20
一、实验过程 20
二、实验结果 21
第四节 糖蛋白处理对策 22
一、概述 22
第五节 蛋白质样品SDS-PAGE检测 23
一、灌制SDS聚丙烯酰胺凝胶（垂直平板电泳） 23
二、实验步骤 23
二、SDS-PAGE过程 26
三、蛋白质检测 27
四、凝胶干燥 27
五、电泳结果 29
六、讨论 31
第三章 IPG-Dalt双向电泳之第一向——IPG等电聚焦 32
第一节 仪器设备 32
一、IEF仪器及配件 32
二、溶液配制 33
一、实验耗材和试剂 33
第二节 实验耗材、试剂及溶液配制 33
二、常规仪器 33
第三节 IPG胶条溶胀 34
一、IPG胶条溶胀（不含样品） 34
二、IPG胶条溶胀（含样品） 36
第四节 IEF实验操作 36
一、IEF产品盒组装 36
二、IEF程序及参数设置 41
三、实验过程 45
二、平衡缓冲液配制（参见附录T、U） 45
一、器材和试剂 45
第一节 IPG胶条平衡 45
第四章 IPG-Dalt双向电泳之第二向——SDS-PAGE 45
第二节 SDS-PAGE实验操作——垂直板SDS-PAGE系统 46
一、北京六一仪器厂电泳系统 46
二、Amersham Biosciences公司垂直电泳系统 48
第三节 SDS-PAGE实验操作——MultiphorⅡ水平SDS-PAGE系统 50
一、灌胶模具（瑞典Amersham Biosciences公司） 50
二、模具组装 50
三、灌制凝胶 50
四、电泳操作过程 52
第四节 蛋白质点检测和凝胶保存 59
第五章 实验结果和讨论 60
第一节 实验结果 60
一、SKOV3细胞蛋白双向电泳结果 60
二、血清样品双向电泳结果 64
三、组织样品双向电泳结果 67
第二节 讨论 72
一、样品材料对双向电泳的影响 72
二、不同的蛋白质提取方法比较 73
四、IPG胶条pH范围和长度选择 74
三、配基修饰蛋白检测 74
五、上样方式比较 75
六、垂直SDS-PAGE和水平SDS-PAGE比较 76
七、不同浓度SDS凝胶对分离效果的影响 78
八、两种交联剂对银染背景的影响 78
九、水质对银染的影响 79
第六章 故障及排除方法 80
参考文献 86
附录 储备液配制 91