目录 1
实验须知 1
生物化学实验基本操作训练 3
第一部分 常用生物化学与分子生物学技术及原理 6
第1章 分光光度法 6
1.1 基本原理 6
1.2 分光光度法的定性和定量分析 7
1.3 分光光度计的结构 9
第2章 层析技术 12
2.1 离子交换色谱法 12
2.2 凝胶过滤色谱法 16
2.3 吸附层析法 25
2.4 分配色谱法 27
2.5 亲和层析法 29
第3章 电泳技术 32
3.1 基本原理 32
3.2 一般技术 38
3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 41
3.4 蛋白质的凝胶聚焦电泳法 51
第4章 离心技术 59
4.1 基本原理 59
4.2 离心机和转子的种类 63
4.3 离心分离的种类 66
第5章 分子生物学基本原理 69
5.1 基本概念 69
5.2 重组DNA技术 71
第6章 生化实验常用仪器 85
6.1 722型分光光度计 85
6.2 精密pH计 86
6.3 高速离心机 87
6.4 PCR基因扩增仪 87
第二部分 生物化学与分子生物学实验 90
第7章 蛋白质定性定量分析 90
实验一 蛋白质的沉淀反应 90
1．蛋白质的盐析 90
2．用重金属盐沉淀蛋白质 92
3．用沉淀生物碱的试剂沉淀蛋白质 92
6．加热沉淀蛋白质 93
5．用有机酸沉淀蛋白质 93
4．用无机酸沉淀蛋白质 93
实验二 蛋白质的两性反应及等电点测定 94
1．蛋白质的两性反应 94
2．酪蛋白的等电点的测定 96
实验三 Bradford法测定蛋白浓度 96
实验四 血红蛋白及其衍生物的吸收光谱测定 97
实验五 微量凯氏定氮法测定血清总蛋白 99
实验六 蛋白质定量的紫外分光光度法 103
实验七 福林-酚试剂法测定血清总蛋白 103
实验八 用离子交换层析法分离混合氨基酸 105
实验九 凝胶过滤分离高铁血红蛋白与高铁氰化钾 109
实验十 凝胶过滤分离纯化脲酶及其活性测定 111
实验十一 血清γ球蛋白的分离与纯化 115
实验十二 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 118
实验十三 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 121
实验十四 凝胶等电聚焦分离血清蛋白质 125
第8章 核酸定性定量分析 127
实验十五 酵母RNA的提取（浓盐法）及成分鉴定 127
实验十六 核酸的定量测定——定磷法 129
第9章 酶学实验 132
1．酶活力 132
2．初速度 132
实验十七 底物浓度及抑制剂对酶促反应速度的影响 133
实验十八 温度、pH对酶促反应速度的影响 137
实验十九 蔗糖酶与淀粉酶的专一性实验 139
实验二十 乳酸脱氢酶及其辅酶的作用实验 140
实验二十一 乳酸脱氢酶同工酶活性测定 143
实验二十二 丙酮酸脱氢酶活性测定 144
实验二十三 糖原合成酶活性测定 145
第10章 代谢实验 147
实验二十四 还原糖的定量测定 147
1．Somogyl-shaffer-Hartmann法定糖 147
2．比色法定糖 150
实验二十五 肝糖原的提取和鉴定 151
1．肝糖原提取 151
2．鉴定 152
实验二十六 粗脂肪的定量测定——索氏提取法 152
1．脂肪皂化值的测定 154
实验二十七 脂肪皂化值及碘值的测定 154
2．脂肪碘值的测定 156
实验二十八 脂肪酸的β-氧化 158
实验二十九 肝组织的生酮作用 160
实验三十 转氨基作用及其鉴定 161
第11章 分子生物学实验 164
实验三十一 外周血白细胞DNA提取（微量法） 164
实验三十二 琼脂糖凝胶电泳 165
实验三十三 大肠埃希菌质粒转化实验 167
实验三十四 微量快速质粒DNA的提取与纯化（碱裂解法） 168
实验三十五 限制性核酸内切酶消化DNA 170
实验三十六 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段（低熔点胶法） 172
实验三十七 质粒的柱层析纯化 174
实验三十八 聚合酶链反应 175
实验三十九 单链构象多态性分析 178
1．10％聚丙烯酸胺凝胶的制备 179
2．电泳 179
3．银染 180
4．凝胶干燥 180
第12章 临床生化实验 181
实验四十 酶法（GOD-PAP法）测血清葡萄糖 181
实验四十一 血清尿素氮的测定 182
实验四十二 血清甘油三酯测定 184
实验四十三 红细胞膜的制备 186
实验四十四 红细胞膜蛋白质含量测定（改良福林-酚试剂法） 188
实验四十五 红细胞膜总胆固醇含量的测定 189
实验四十六 维生素C含量的测定（碘滴定法） 191