目录 3
上篇 生物化学与分子生物学实验方法与技术概论 3
第1章 生物化学与分子生物学实验入门 3
1.1 实验室规则 3
1.2 实验报告写作规范 4
1.3 常用生物化学与分子生物学仪器的使用 5
1.4 实验误差与提高实验准确度的方法 12
2.1 生物化学实验常用的生物材料 15
第2章 生物化学实验方法与技术概述 15
2.2 生物分子提取的一般原则 16
2.3 生物化学分离、纯化和分析技术概述 19
2.4 生物化学实验中常用的检测技术 26
第3章 分子生物学实验方法与技术概述 33
3.1 DNA分子克隆的基本原理 33
3.2 用于基因克隆的工具酶 34
3.3 分子克隆的载体与宿主系统 40
3.4 DNA的克隆 44
3.5 基因组文库的构建 47
3.6 克隆基因的分离与鉴定 51
3.7 聚合酶链式反应 53
3.8 DNA的化学合成 56
3.9 基因定位诱变 57
3.10 DNA的序列测定 59
3.11 RNA的测序 60
第4章 生物化学与分子生物学实验的新技术简介 62
4.1 生物芯片技术 62
4.3 双向电泳技术 63
4.2 毛细管电泳技术 63
第5章 生物化学与分子生物学专业常用数据库简介 65
5.1 生物化学与分子生物学专业部分因特网网址 65
5.2 序列数据库 65
5.3 生物信息资源导航系统和服务器 66
5.4 国际上主要SRS数据库查询系统（序列查询系统） 66
中篇 生物化学实验 69
第6章 糖类 69
实验1 总糖和还原糖的测定——3,5-二硝基水杨酸法 69
实验2 血糖的定量测定——Folin—Wu法 71
实验3 肝糖原的提取和鉴定 74
实验4 黏多糖——肝素钠效价的测定 76
实验5 直链淀粉和支链淀粉的测定——双波长法 77
实验6 粗纤维的测定——酸性洗涤剂法 79
第7章 脂质 81
实验7 血清胆固醇的定量测定——磷硫铁法 81
实验8 血清甘油三酯的测定 83
实验9 植物叶片衰老过程中过氧化脂质含量的变化 84
实验10 脂质组成对脂质单分子层通透性的影响 86
实验11 氨基酸的纸上层析 88
第8章 氨基酸和蛋白质 88
实验12 蛋白质含量测定方法Ⅰ——双缩脲法 90
实验13 蛋白质含量测定方法Ⅱ——Folin-酚法 91
实验14 蛋白质含量测定方法Ⅲ——紫外吸收法 93
实验15 蛋白质含量测定方法Ⅳ——考马斯亮蓝G-250染色法 95
实验16 鸡血清蛋白质乙酸纤维素膜电泳 97
实验17 蛋白质的两性性质及等电点的测定 99
实验18 蛋白质的水解和氨基酸的纸层析法分离 101
实验19 酶的基本性质实验 104
第9章 酶 104
实验20 淀粉酶活性的测定 108
实验21 硝酸还原酶活性的测定 110
实验22 过氧化氢酶活性的测定——碘量法 112
实验23 脲酶Km值测定 114
第10章 维生素 117
实验24 维生素A、维生素B1和维生素B2的定性测定 117
实验25 维生素B2（核黄素）的定量测定——荧光法 119
实验26 维生素C的定量测定——2,6-二氯酚靛酚滴定法 121
第11章 核酸的性质、分离纯化与含量测定 124
实验27 动物（脾）肝DNA的制备 125
实验28 血液标本中DNA的提取 127
实验29 小牛胸腺DNA的制备 128
实验30 小牛胸腺DNA熔解温度（Tm）的测量 131
实验31 动物肝RNA的制备——苯酚法 133
实验32 酵母RNA的制备Ⅰ——浓盐法 134
实验33 酵母RNA的制备Ⅱ——稀碱法 136
实验34 植物组织中DNA的制备 137
实验35 核酸的含量测定Ⅰ——紫外吸收法 139
实验36 核酸的含量测定Ⅱ——定磷法 141
实验37 二苯胺显色法测定DNA含量 143
实验38 地衣酚法测定RNA含量 144
实验39 DNA碱基成分分析及含量测定 146
第12章 新陈代谢 149
实验40 糖酵解中间产物的鉴定 149
实验41 动物体肌糖原的酵解作用 151
实验42 脂肪酸的β-氧化作用——酮体的生成及测定 153
实验43 转氨基作用——转氨酶活性鉴定（薄层层析法） 156
实验44 转氨基作用——血清谷丙转氨酶（SGPT）活性测定（King氏法） 158
实验45 血清钙的测定 160
实验46 果实中有机酸的提取与鉴定 162
实验47 琥珀酸脱氢酶及丙二酸的抑制作用 163
实验48 生物氧化与电子传递 165
第13章 综合性生物化学实验 168
实验49 可溶性糖的硅胶G薄层层析 168
实验50 离子交换柱层析分离核苷酸 170
实验51 亲和层析法从鸡蛋清中分离溶菌酶 174
实验52 蛋白质的盐析分级分离及凝胶层析脱盐 177
实验53 凝胶层析法测定蛋白质的相对分子质量 179
实验54 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量 182
实验55 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点 187
实验56 蛋白质双向电泳 190
实验57 聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离过氧化物酶同工酶 193
实验58 琼脂糖凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶 195
实验59 细胞色素c的制备及其测定 197
实验60 尼龙固定化木瓜蛋白酶 200
实验61 发酵过程中无机磷的被利用和ATP的生物合成 202
实验62 单向定量免疫电泳法——火箭电泳法 203
实验63 酶联免疫吸附测定——ELISA 205
实验64 蛋白质印迹——Western印迹 207
下篇 分子生物学实验 213
第14章 基础分子生物学实验 213
实验65 碱裂解法提取质粒DNA 213
实验66 质粒DNA的限制性核酸内切酶酶切 216
实验67 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 218
实验68 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 221
实验69 低熔点琼脂糖法回收目的基因 224
实验70 DNA的重组 226
实验71 重组子的筛选与鉴定 227
实验72 聚合酶链式反应技术体外扩增DNA 229
实验73 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR） 233
实验74 脉冲电场凝胶电泳 235
实验75 重组DNA序列在原核细胞中的表达 237
实验76 外源蛋白质的诱导表达及SDS-PAGE电泳检测 240
实验77 DNA的核苷酸序列分析 242
实验78 DNA的分子杂交——Southern印迹 244
实验79 RNA的分子杂交——Northern印迹 247
第15章 综合性分子生物学实验 251
实验80 组织细胞中mRNA的提取与纯化 251
实验81 利用PCR技术差异显示特异的mRNA 254
实验82 植物基因的转化 258
实验83 构建cDNA文库的基础实验 261
实验84 脱氧核糖核酸酶Ⅰ足迹分析 266
实验85 凝胶阻滞实验Ⅰ——DNA-蛋白质滞后电泳分析 268
实验86 凝胶阻滞实验Ⅱ——甲基化干扰实验 271
实验87 凝胶阻滞实验Ⅲ——尿嘧啶干扰实验 274
实验88 酵母双杂交系统实验Ⅰ——质粒DNA转化酵母细胞 275
实验89 酵母双杂交系统实验Ⅱ——β-半乳糖苷酶活性测定 278
实验90 酵母双杂交系统实验Ⅲ——蛋白质相互作用的测定 280
附录 283
附录1 纯水的制备和检验 283
附录2 常用溶液和试剂的配制 283
附录3 常用化学试剂的各种参数表 285
附录4 生物细胞内的缓冲系统与缓冲液的配制 287
附录5 细菌培养基、抗生素 298
附录6 部分生化物质电泳染色方法简介 301
附录7 部分试剂与溶剂的纯化 306
附录8 常用核酸和蛋白质的数据换算 307
附录9 硫酸铵饱和度计算表 308
附录10 常用蛋白质相对分子质量标准参照物 311
附录11 20种组成蛋白质的氨基酸的生物化学性质 311
附录12 某些生物大分子、亚细胞器及微生物的沉降系数 314
附录13 离心机转速（r/min）与相对离心力（RCF）的换算 315
附录14 生物化学与分子生物学中部分常见英文缩写 316
附录15 有关的警告标志图 320
附录参考书目 321