第一章 植物分子生物学浅说 1
一、核基因组 3
二、核基因的表达 6
三、转录 7
四、RNA的加工 9
五、转译 11
六、转译后的修饰和包装 13
七、发育过程中基因表达的调控 15
八、叶绿体的生物合成 17
九、线粒体基因组 22
十、结论 24
一、农杆菌的生物学及致瘤特性 25
第二章 高等植物的基因转移载体 25
二、冠瘿瘤诱导及DNA转移的分子生物学 27
三、转移DNA（T-DNA）区 29
四、致病区（Vir） 32
五、T-DNA转移的机理 34
六、转化初期的分子动向 34
七、T-DNA加工 36
八、T-DNA与植物DNA连接点序列分析 38
九、T-DNA在植物基因组内定位和结构 39
十、农杆菌质粒作为转化载体 39
十一、非致瘤Ti质粒载体的基本组分 39
十三、顺向载体（cis） 40
十二、非致瘤植物转化载体 40
十四、反向载体（Trans） 42
十五、特殊用途的转化载体 48
十六、农杆菌Ti质粒载体系统的选用 50
十七、顺向型与反向型载体比较 50
十八、Vir基因、25bp重复序列和寄主范围 51
十九、鉴别转化植物细胞的可选择和可筛选标记基因 53
二十、外源基因克隆到植物转化载体 53
二十一、农杆菌载体的应用 56
第三章 禾谷类作物外源基因的直接导入及表达 58
一、聚乙二醇法（PEG） 60
二、电穿孔法（electroporation） 61
三、注射法（injection） 63
四、粒子轰击法（particle bambardment） 64
第四章 农杆菌转染在植物分子生物学中的应用 67
一、农转染 67
二、农转染方法和优点 69
三、农转染法的应用潜力 72
四、前景 77
第五章 植物基因的分子结构及其调控 78
一、一级结构上的因子 78
二、一级结构的分析 80
三、基因的功能组成 81
四、利用电脑分析分子结构 82
五、CaMV 35S启动子的研究进展 83
六、组织特异性基因的调控 85
七、种子蛋白基因的调控 86
八、其他组织特异性基因的调控 88
九、贮藏蛋白基因 89
十、光诱导基因 91
十一、环境胁迫诱导基因调控 96
十二、激素对基因表达的调控 100
第六章 细胞分裂素对大分子合成及基因表达的调控 102
一、细胞分裂素的活性形式 102
二、细胞分裂素对大分子合成的调控 103
三、细胞分裂素调控基因表达的复杂性 105
四、两种激素调控的基因表达 107
五、细胞分裂素促进光调控基因的表达 108
六、细胞分裂素结合分子 109
七、结论 110
第七章 植物基因表达的光调控 112
一、光对rRNA基因表达的影响 114
二、光对转录丰盛度的影响 118
三、白光及光敏色素对核功能的调控 121
四、结论 143
第八章 叶绿体基因组的遗传操作 144
一、由农杆菌诱导的叶绿体转化 145
二、叶绿体基因组 146
三、外源基因导入质体 150
四、外源基因整入叶绿体DNA 152
五、质体的自主复制 153
六、叶绿体转化的选择性标记 156
七、展望 157
八、烟草叶绿体基因的表达与调控 157
第九章 植物基因的分离工具：转座子 171
一、成功的植物转座子标记 171
二、玉米转座子在其他植物中的活性 173
三、激活剂［Ac］是一种简单的转座子 174
四、改建Ac转座子以优化异源植物的转座子标记 176
五、转座子插入突变体的鉴定 179
第十章 种子蛋白的基因工程 182
一、贮藏蛋白的特性 183
二、编码贮藏蛋白的cDNA的制备 185
一、抗除草剂的植物基因工程 227
第十一章 植物基因工程与农作物改良 227
二、抗病毒的植物基因工程 232
三、抗虫的植物基因工程 235
第十二章 限制性片段长度多态性在植物品种改良中的作用 238
一、RFLP的概念 239
二、RFLP-基因定位的有用工具 240
三、作物RFLP及遗传图谱的构建 242
四、RFLP的应用 243
五、利用RFLP进行QTL定位的基本原理 246
第十三章 植物分子生物学操作技术 251
一、大肠杆菌和农杆菌的培养和贮存 252
二、从大肠杆菌制备大量质粒 255
三、适用于连接的DNA酶切片段制备和纯化 260
四、DNA片段连接到植物转化载体 265
五、重组质粒经转化导入大肠杆菌 270
六、少量快速制备大肠杆菌质粒DNA 275
七、通过限制性酶切和琼脂糖凝胶电泳分析微量DNA 278
八、重组质粒接合到农杆菌 279
九、从根癌农杆菌分离总核酸 281
十、限制性酶酶解农杆菌总DNA 283
第十四章 用根癌农杆菌的T？质粒和发根农杆菌的Ri质粒转化双子叶植物细胞 288
一、概说 288
二、使用野生型致瘤的农杆菌和发根农杆菌转化 301
三、用非致瘤性Ti质粒载体转化大的异质外植体 312
四、直接再生转化植株：烟草叶圆片的转化 313
五、经愈伤组织再生转化植株：亚麻苗外植体的转化 322
六、小的同质外植体的转化 331
七、烟草叶片原生质体的分离 332
八、烟草叶肉原生质体的培养 337
九、通过与农杆菌共培养转化原生质体 339
十、胡萝卜悬浮细胞的转化 347
第十五章 外源基因DNA直接转入植物细胞的技术 368
一、农杆菌转化系统的局限性 368
二、以分离的载体DNA转化植物原生质体 369
三、用DNA媒介基因转移法转化原生质体的进展 370
四、DNA媒介基因转移载体 372
五、DMGT载体的瞬间表达 372
六、供稳定转化用的DMGT载体 373
七、用DMGT载体转化完整的细胞组织 374
八、微注射技术 374
九、微注射和微粒载体导入法 374
十、聚乙二醇刺激外源DNA摄入原生质体 375
十一、PEG刺激DNA摄入到原生质体 376
十二、从原生质体里提取DNA进行斑点印迹 378
十三、电穿孔法进行原生质体转化 384
十四、用于瞬间表达的最适电穿孔法 387
十五、微注射法用于植物细胞转化 390
十六、微注射法转化植物细胞………………………………… 39？第十六章 植物的核酸分离技术 400
一、植物核酸的分离 400
二、从干冻植物材料中制备总DNA 402
三、从新鲜植物材料中分离DNA 410
四、核DNA分离 414
五、叶绿体和线粒体DNA的分离 418
六、用二苯胺测定核酸粗提液中的DNA浓度 422
七、植物总RNA的制备 424
八、多聚（腺苷）mRNA的制备 429
第十七章 DNA酶切除及Southern杂交分析 434
一、DNA的限制性酶解 434
二、以琼脂糖凝胶电泳分离DNA 437
三、Southern印迹分步分离的DNA限制酶切片段 443
四、杂交Southern印迹的DNA 448
五、以寡聚核苷酸标记技术制备杂交探针 452
一、概说 458
第十八章 植物基因组成及其表达分析 458
二、以Southern印迹法分析T-DNA的组成 464
三、以Northern印迹法分析基因表达 476
四、以Cab报告基因证明环境及器官特异性对基因表达的调控 482
五、以新霉素磷酸转移酶、Ⅱ（NPT-Ⅱ）为报告蛋白研究过渡肽序列的作用 490
六、从烟草植株中分离完整的叶绿体 493
七、NPT-Ⅱ的原位检测 495
八、NPT-Ⅱ的Western印迹分析 504
九、以报告酶编码序列组建融合基因：GUS基因融合系统 509
十、检测转化植物组织中的胭脂碱 520
第十九章 大肠杆菌、质粒载体及噬菌体 531
一、大肠杆菌 535
二、质粒载体 559
三、噬菌体 587
第二十章 RNA的制备与分析 630
一、由真核和原核细胞制备RNA 630
二、由组织培养细胞制备胞质RNA 631
三、由组织培养细胞制备胞质RNA（简要方法） 634
四、胍盐方法制备总的RNA 637
五、用苯酚／SDS法制备植物RNA 642
六、细菌RNA制备 646
七、多聚腺苷RNA制备（基本方法） 650
八、RNA结构分析和合成 653
九、制备单链末端标记探针和mRNA的S1分析（辅助方法） 659
十、mRNA定量S1分析的控制 663
十一、RNA酶保护分析（基本方法） 668
十二、核苷酸酶保护分析 671
十三、引物延伸（基本方法） 676
十四、通过Northcrn杂交分析RNA 680
十五、新转录RNA的鉴定：哺乳动物细胞核脱落转录（基本方法） 689
第二十一章 构建重组DNA文库 699
一、重组DNA文库的概况 699
二、由基因组DNA制备插入DNA 705
三、由mRNA制备插入DNA片段 719
四、基因组DNA和cDNA文库的构建 739
五、转化或包装文库的扩增 748
第二十二章 重组DNA文库的筛选 754
二、制备噬菌体文库平板并向滤膜转移 756
一、制备文库平板并向滤膜转移 756
三、制备平板及转移质粒和装配质粒文库 761
四、与放射性探针杂交 764
五、用人工合成的寡聚核苷酸作探针 772
六、噬菌体、装配型质粒和质粒克隆的纯化 778
七、纯化质粒及粘粒克隆 781
八、抗体筛选 782
九、免疫筛选λ噬菌斑中的融合蛋白质 783
十、用抗体筛选λgt11表达文库 783
十一、抗体筛选前用IPTG诱导融合蛋白表达 786
十二、cDNA插入序列在噬菌体λ载体间的转移 789
十三、杂交选择及转译的免疫筛选 793