序 1
前言 1
第一章 怀山药及其研究概况 1
一、怀山药简介 1
目录 1
二、怀山药的研究概况 3
第二章 怀山药组织培养的基本原理及操作技术 5
一、怀山药组织培养的概念 5
二、怀山药组织培养的理论依据 5
1．植物细胞全能性的概念 5
2．植物细胞全能性的实现 5
三、怀山药组织培养的优点 6
1．理论意义 7
2．实践意义 7
四、怀山药组织培养的意义 7
五、怀山药组织培养的基本设备 8
1．实验室 8
2．常用仪器设备 11
3．必要的玻璃器皿 15
六、怀山药组织培养的基本操作技术 16
1．玻璃器皿的洗涤 16
2．培养基及其配制方法 18
3．培养材料的选择及表面消毒 24
4．无菌操作（接种） 26
5．无菌培养 28
6．污染和褐变的原因及其预防措施 29
7．生理生化指标的测定方法 31
8．电泳方法 37
10．试管苗气孔变化规律的研究方法 39
9．组织细胞学研究方法 39
11．微型块茎超微结构的观察法 40
第三章 怀山药愈伤组织的诱导形成 41
一、茎段愈伤组织的诱导形成 41
1．光下茎段愈伤组织的诱导形成 41
2．暗处茎段愈伤组织的诱导形成 43
3．温度对茎段愈伤组织诱导的影响 43
二、叶片愈伤组织的诱导形成 44
1．光下叶片愈伤组织的诱导形成 44
2．暗处叶片愈伤组织的诱导形成 45
3．叶龄对愈伤组织诱导的影响 46
4．温度对铁棍山药叶片愈伤组织诱导的影响 47
三、微型块茎愈伤组织的诱导 47
1．光下植物生长物质组合对微型块茎愈伤组织的诱导 47
2．暗培养下不同植物生长物质配比对愈伤组织的诱导 48
3．光质对铁棍山药微型块茎愈伤组织诱导的影响 50
四、怀山药脱分化过程中生理生化变化规律的研究 53
1．叶片和茎段脱分化过程中生理生化变化 53
2．微型块茎脱分化过程中生理生化变化 54
五、怀山药脱分化过程中组织细胞学观察 59
1．脱分化过程中组织细胞学变化 59
2．脱分化过程中细胞分裂方式 60
六、愈伤组织生长过程中染色体数目的稳定性 61
七、讨论 61
1．外植体对怀山药脱分化的影响 61
2．光对怀山药脱分化的影响 62
3．怀山药脱分化时愈伤组织的起源 64
附录 1 65
5．怀山药愈伤组织形成过程的分期 65
4．怀山药脱分化过程中细胞的分裂方式 65
第四章 怀山药愈伤组织的分化与植株再生 67
一、茎段愈伤组织的分化与植株再生 67
1．47号山药芽的分化 67
2．铁棍山药芽的分化 68
二、微型块茎愈伤组织的分化与植株再生 69
1．不定芽的诱导发生过程 69
2．植物生长物质对不定芽诱导的影响 70
3．带芽体愈伤组织的继代培养 71
4．光质对愈伤组织分化的影响 71
三、怀山药微型块茎再分化过程中生理生化变化规律的研究 72
1．再分化过程中可溶性蛋白含量的变化 72
2．再分化过程中POD活性的变化 72
5．再分化过程中蛋白水解酶谱的变化 73
4．再分化过程中POD同工酶谱的变化 73
3．再分化过程中总蛋白变化的电泳图谱 73
四、怀山药脱分化与再分化机理探讨 74
1．光照对怀山药再分化的影响 74
2．植物生长物质在怀山药脱分化和再分化中的作用 75
3．POD与怀山药微型块茎脱分化和再分化的关系 75
4．蛋白水解酶与怀山药微型块茎脱分化和再分化的关系 76
5．愈伤组织继代培养中分化能力及染色体的稳定性 77
6．高频率愈伤组织再生体系为怀山药遗传转化提供了良好的受体系统 77
第五章 怀山药试管苗的快速繁殖 79
一、怀山药快繁的过程 79
1．无菌培养体系的建立 79
2．诱导外植体生长与分化 80
3．中间繁殖体的增殖 80
1．腋生枝型 81
5．试管苗驯化、移栽 81
4．壮苗与生根 81
二、怀山药试管苗繁殖的类型及影响因素 81
2．器官发生型 88
3．多芽体发生型 88
4．微型块茎诱导发生型 89
三、怀山药试管苗繁殖速率的计算方法 89
1．理论计算 89
2．实际计算 90
四、怀山药试管苗快繁工作的计划安排 90
五、提高试管苗繁殖速度的方法 92
1．改进培养基 93
2．改善培养条件 94
六、光质对试管苗生长和繁殖过程中生理生化变化的影响 94
1．光质对试管苗叶绿素含量的影响 94
2．光质对试管苗NR活性的影响 95
3．光质对试管苗IAA氧化酶活性的影响 95
4．光质对试管苗可溶性蛋白含量变化的影响 96
5．光质对试管苗可溶性总糖含量变化的影响 96
七、怀山药试管苗的继代培养 96
1．试管苗的继代方法 97
2．影响试管苗继代培养的因素 97
八、讨论 97
1．怀山药试管苗快繁的途径 97
2．怀山药试管苗快繁的影响因素 98
3．光质对试管苗生长发育的影响 99
4．光质对试管苗生理生化变化的影响 100
2．影响壮苗生根的因素 102
1．根的发生过程 102
一、怀山药试管苗的壮苗生根 102
第六章 怀山药试管苗的壮苗生根与移栽 102
3．PP333对试管苗壮苗生根机理的研究 109
1．试管苗移栽成活率低的原因 111
二、试管苗的移栽 111
2．试管苗移栽前后气孔变化规律 112
3．提高试管苗移栽成活率的措施 112
三、讨论 114
1．怀山药试管苗壮苗生根的机理 114
2．影响怀山药试管苗移栽的因素 115
3．气孔行为对试管苗移栽成活率的影响 115
4．试管苗的质量对移栽成活率的影响 116
5．移栽基质对试管苗移栽成活率的影响 116
3．种质保存与交换 117
二、微型块茎的用途 117
三、微型块茎的特点 117
1．种栽微型化 117
2．病毒检测 117
一、微型块茎的概念 117
第七章 怀山药微型块茎的诱导形成 117
四、微型块茎的形成过程 118
五、微型块茎的试管生产技术 119
六、微型块茎诱导形成的影响因素 119
1．植物生长物质对微型块茎诱导形成的影响 119
2．碳源对微型块茎诱导形成的影响 122
3．氮源对微型块茎诱导形成的影响 123
4．光照时间对微型块茎诱导形成的影响 123
5．光质对微型块茎诱导形成的影响 123
七、微型块茎形成过程中生理生化变化 124
1．光质对铁棍山药试管苗微型块茎中可溶性糖含量的影响 124
2．POD活性的变化 125
3．可溶性蛋白含量的变化 126
4．叶绿素含量的变化 127
八、微型块茎结构的电镜观察 127
九、微型块茎的贮藏及贮藏过程中的生理生化变化 127
1．POD活性的变化 128
2．可溶性蛋白含量的变化 129
十、微型块茎的萌发 129
十一、讨论 130
1．生长物质对微型块茎诱导形成的影响 130
2．PP333对微型块茎诱导形成的影响 131
3．AC对微型块茎诱导形成的影响 131
4．糖类对微型块茎诱导形成的影响 131
7．微型块茎是怀山药离体繁殖和保存的有效途径 132
6．光照和黑暗对微型块茎萌发成苗的影响 132
5．氮源对微型块茎诱导形成的影响 132
第八章 怀山药种质资源的离体保存 133
一、离体保存的概念 134
二、离体保存的优点 134
三、离体保存的形式 134
1．常温保存法 134
2．常低温和低温保存法 134
3．超低温保存法 135
四、怀山药离体保存的主要步骤 135
1．种质资源的收集 135
2．离体培养 135
3．离体培养物的保存 135
五、讨论 139
1．研究背景 142
第九章 怀山药脱毒快繁及产业化技术研究 142
一、研究背景、目的及意义 142
3．研究意义 143
4．国内外同类研究现状 143
2．研究目的 143
二、研究内容及技术路线 144
1．研究内容 144
2．技术路线 144
三、怀山药感染病毒的症状及种类 144
1．植物病毒的种类、症状、危害及其传播途径 144
2．怀山药感染病毒后的症状 146
3．怀山药感染病毒的种类鉴定 146
四、怀山药无毒苗的获得 148
1．茎尖培养脱毒的理论依据 148
2．茎尖培养脱毒的方法 149
3．茎尖成苗率和脱毒率的影响因素 150
五、怀山药无毒苗的鉴定 152
1．直接测定法（目测症状法） 152
2．指示植物法 153
3．血清学检测法 153
4．电子显微镜法 153
5．PCR检测法 153
六、无毒苗的保存 154
1．无毒苗的隔离保存 154
2．无毒苗的离体保存 154
七、无毒苗的快繁 154
1．开瓶炼苗移栽法 155
2．直接移栽法 155
九、无毒苗的移栽 155
八、无毒苗的壮苗生根 155
十、无毒苗田间生长及产量比较 156
1．无毒苗进入大田后生长情况 156
2．无毒苗种栽种后生长情况 156
3．示范试验及增产情况 157
十一、怀山药病毒病及其脱除方法的探讨 157
十二、怀山药无毒苗繁殖基地的建设 158
十三、怀山药脱毒试管苗的生产工艺流程 159
1．生产工艺流程 159
2．快繁技术要点 160
十四、怀山药无毒苗生产效益分析 160
1．经济效益分析 160
2．社会效益分析 160
3．环境效益分析 160
2．研究展望 162
第十章 问题与展望 162
1．存在问题 162
附表1 蒸汽压力与蒸汽温度的关系 165
附表2 常用植物生长物质的mg/L（ppm）和μmol/L换算表 165
附表3 常用植物生长物质的μmol/L和mg/L（ppm）换算表 165
附表4 植物组织培养中常用的无机物和有机物的化学式及分子量 166
附表5 常用的植物生长物质理化性质和生理作用 166
附表6 常用的维生素及其主要性质 167
附表7 植物组织培养中培养物的不良表现及改进措施 168
附表8 植物组织和细胞培养常用培养基成分（单位：mg/L） 169
附表9 植物组织和细胞培养常用培养基附加成分（单位：mg/L） 170
参考文献 171
图版 183