目录 3
上篇 基因克隆理论 3
第一章 概论 3
第一节 基因研究历史回顾 3
第二节 遗传的物质基础 3
第三节 基因和基因克隆的概念 5
第四节 基因工程的研究内容和安全性 6
第一节 核酸的结构和功能 10
第二章 基因的结构和功能 10
第二节 遗传物质的组织结构 15
第三节 基因组的结构和功能 23
第三章 蛋白质的结构和功能 35
第一节 蛋白质的基本单位和分类 35
第二节 蛋白质的分子结构和理化性质 39
第三节 蛋白质的生物学功能 49
第四章 基因克隆中常用的工具酶 52
第一节 限制性核酸内切酶 52
第二节 DNA聚合酶 56
第三节 DNA连接酶 60
第四节 修饰酶 61
第五章 基因克隆的载体 65
第一节 质粒载体 65
第二节 噬菌体载体 79
第三节 病毒载体 84
第四节 大容量载体 91
第六章 基因的表达和调控 95
第一节 原核生物基因的表达调控 96
第二节 真核生物基因的表达调控 112
第七章 基因克隆在治疗和诊断中的应用与进展 127
第一节 基因治疗研究进展 127
第二节 基因诊断的研究进展 130
第八章 基因克隆技术在生物制药中的应用 136
第一节 概况 136
第二节 基因工程药物 137
第三节 基因工程抗体 137
第四节 基因工程疫苗 138
第五节 核酸疫苗 139
第六节 生物医药的发展方向 139
下篇 基因克隆技术 143
第九章 分子生物实验中的常用仪器及试剂的配制 143
第一节 分子生物实验室的常规仪器及设备 143
第二节 常用试剂的配制 145
第十章 琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳 149
第一节 原理 149
第二节 琼脂糖电泳 149
第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 150
第四节 电泳的影响因素 151
第五节 电泳中常用的指示剂和染色剂 152
第十一章 目的基因克隆 154
第一节 化学合成法获取目的基因 154
第二节 PCR扩增法获取目的基因 154
第三节 RT-PCR法获取目的基因 159
第一节 感受态细胞的制备和质粒的转化 162
第十二章 载体的准备 162
第二节 质粒DNA的提取 163
第十三章 目的基因与载体的连接 165
第一节 目的基因和载体的酶切 165
第二节 从凝胶中回收DNA 168
第三节 目的基因和载体的连接 169
第十四章 重组载体的检测 172
第一节 酶切和电泳检测 172
第二节 DNA序列测序鉴定 172
第二节 脂质体法 178
第十五章 重组载体的转染 178
第一节 磷酸钙共沉淀法 178
第三节 反转录病毒感染法 179
第四节 腺病毒载体转染法 180
第五节 结果和转染方法的选择 181
第十六章 重组体插入基因、RNA和表达产物蛋白质的检测 183
第一节 Southern blot 183
第二节 Northern blot 186
第三节 Western blot 188