第一章 组织制片技术与细胞化学技术 1
第一节 组织制片技术 1
一、取材 1
二、固定 2
三、脱水与透明 8
四、包埋 8
五、切片 10
六、染色 11
七、封片 16
八、非切片法组织标本制作技术 16
第二节 常用组织化学与细胞化学的技术方法 17
一、碳水化合物显色方法 17
二、核酸显色方法 19
三、蛋白质显色方法 20
四、脂类显色方法 21
五、无机成分显色方法 23
六、酶组织化学显色方法 25
第三节 放射自显影技术 31
一、放射自显影像制备 31
二、放射自显影分辨力、效率、本底、类型、复制与阅读 35
三、放射自显影基本技术方法 37
四、放射自显影的应用 40
五、放射自显影技术注意事项 45
第四节 细胞凋亡检测技术 46
一、吖啶橙荧光染色法 47
二、Hoechst 33258染色法 47
三、末端脱氧核糖核酸转移酶介导地高辛缺口末端标记法 47
四、凝胶电泳检测法 48
五、流式细胞仪检测法 48
六、透射电子显微镜检测法 49
七、其他检测方法 49
第二章 免疫细胞化学技术 51
第一节 免疫细胞化学概述 51
一、免疫细胞化学技术发展简史 51
二、免疫细胞化学的相关概念 52
三、免疫细胞化学技术中的抗体命名 53
四、免疫细胞化学技术的基本过程与分类 53
五、免疫细胞化学技术的优点 54
六、免疫细胞化学技术中的抗体 54
第二节 酶免疫细胞化学技术的基本原理 58
一、用于标记的酶 58
二、直接法 59
三、间接法 59
四、非标记抗体法 60
五、酶标记抗体法 62
第三节 酶免疫细胞化学操作技术 64
一、切片的准备 64
二、抗体的配制 68
三、对照实验 68
四、染色操作 69
五、各种方法的敏感性 76
六、免疫阳性结果的判定 77
七、免疫细胞化学双重／多重染色技术 78
八、金属离子对免疫细胞化学染色的影响 83
第四节 荧光免疫细胞化学技术 84
一、用于标记的荧光染料 84
二、荧光免疫细胞化学技术中的非特异荧光 85
三、荧光免疫细胞化学染色技术的分类与染色步骤 87
四、荧光免疫细胞化学双重／多重染色技术 89
五、荧光免疫细胞化学技术的一些进展 89
第五节 免疫细胞化学染色的有关注意事项 93
一、常见问题及其处理办法 93
二、同种属一抗用于同种属动物的免疫细胞化学染色 96
第三章 原位杂交组织化学技术 100
第一节 原位杂交组织化学技术的基本原理和方法 100
一、基本原理 100
二、基本方法 101
第二节 核酸探针的种类、制备及标记 108
一、探针的种类和制备 109
二、探针的标记 110
第三节 不同探针在原位杂交组织化学中的应用 117
一、cRNA探针在原位杂交组织化学中的应用 117
二、DNA及寡核苷酸技术在原位杂交组织化学中的应用 120
第四节 原位杂交组织化学与免疫细胞化学双标技术 121
一、放射性核素原位杂交组织化学与免疫组织化学双标记法 122
二、非核素原位杂交组织化学与免疫组织化学双标记法 123
第五节 荧光原位杂交细胞化学技术 124
一、DNA探针应用于FISH中的基本原则 125
二、FISH基本操作方法 125
三、细胞核混悬液的FISH 127
四、染色体的FISH 128
第六节 原位杂交细胞化学技术的一些新进展 129
一、原位PCR 129
二、原位启动标记法 131
三、肽-核酸原位杂交细胞化学技术 132
四、组织芯片定量原位杂交技术 133
五、锁链探针原位杂交技术 133
第七节 原位杂交在细胞增殖、凋亡检测中的应用 134
一、组蛋白mRNA原位杂交检测细胞增殖 134
二、原位标记DNA片段检测细胞凋亡 136
第八节 整胚原位杂交 139
第四章 电子显微镜技术 144
第一节 透射电镜 144
一、透射电镜的基本原理 144
二、超薄切片技术 146
三、微波辐射快速制样技术 153
四、负染色技术 154
第二节 扫描电镜技术 155
一、扫描电镜概况 155
二、扫描电镜的生物样品制备 156
第三节 冷冻电镜制样技术 162
一、冷冻固定原理 162
二、快速冷冻方法 162
三、冷冻复型样品制备 163
四、冷冻超薄切片法 164
第四节 电镜细胞化学技术 166
一、电镜酶细胞化学基本原理 166
二、样品制备程序 166
三、常用电镜酶细胞化学方法 168
第五节 免疫电镜技术 174
一、概述 174
二、酶标免疫细胞化学电镜技术 178
三、胶体金标记免疫电镜技术 184
四、铁蛋白标记免疫电镜技术 194
五、双标免疫电镜技术 196
第六节 电镜原位杂交技术 204
一、电镜原位杂交技术概述 204
二、几种电镜原位杂交技术的操作步骤 207
第五章 激光扫描共聚焦显微技术 213
第一节 激光扫描共聚焦显微技术的基本原理 213
一、共聚焦技术的发展 213
二、激光扫描共聚焦显微镜 216
三、激光扫描共聚焦显微镜成像模式 220
四、样本制备和图像采集 221
第二节 激光扫描共聚焦显微镜在生物领域的应用 235
一、细胞内钙离子测定 236
二、细胞内pH的测定 246
三、细胞断层扫描和三维重建 251
四、膜电位的测定 254
五、荧光漂白恢复技术 256
六、笼锁化合物技术 259
第六章 细胞形态定量分析技术 265
第一节 基本概念 266
一、二维图像与三维结构之间的关系 266
二、几何探针 267
三、卡瓦列里原理 268
第二节 细胞数的体视学定量研究 271
一、随机抽样 271
二、从轮廓数估计细胞数 274
三、细胞的直接计数 278
第三节 成功应用的举例 283
第七章 细胞化学定量分析技术 286
第一节 概论 286
一、基本概念与定义 286
二、计量细胞化学物质量的过程 288
三、细胞化学定量分析中的误区与陷阱 288
四、细胞化学计量术的评定 291
第二节 显微光度测量术 295
一、概述 295
二、显微吸收光度术 295
三、显微荧光光度术 298
第三节 显微分光光度计 300
一、测量方法 300
二、吸收光度测量 300
三、荧光光度测量 300
第四节 显微图像分析系统 301
一、组成 301
二、图像处理与分析原理 301
三、性能要求 302
四、图像分析系统性能的生物学方法评估 307
五、测量参数及其意义 308
第五节 流式细胞术 310
一、流式细胞仪的主要组件 310
二、流式细胞仪的原理 310
三、流式细胞仪的应用 311
四、流式细胞术的质量控制 311
第八章 细胞培养及细胞内注射技术 313
第一节 细胞培养的基本操作及要求 313
一、常用培养器皿的洗消 313
二、细胞培养用液的配制 314
三、无菌操作的要领和要求 315
四、细胞原代培养 316
五、细胞传代培养 318
六、细胞的冻存与复苏 319
第二节 细胞的特殊培养方法 320
一、二倍体细胞培养法 320
二、支持物培养法 320
三、细胞克隆培养 320
四、球体细胞培养 321
五、微载体细胞培养法 321
六、悬浮培养法 322
第三节 干细胞的培养方法及免疫标记 322
一、小鼠胚胎干细胞体外分离培养 322
二、已建系的小鼠胚胎干细胞体外培养 325
三、胚胎干细胞的鉴定 326
第四节 器官培养方法 327
第五节 细胞内注射技术 329
一、细胞内注射的类型 330
二、细胞内注射操作方法 330
三、细胞内注射与细胞化学技术 334
第九章 PCR实验技术与方法 336
第一节 PCR技术总论 336
一、PCR反应体系 337
二、PCR的基本操作 338
三、PCR的常见问题 340
四、PCR的主要应用 341
第二节 反转录-聚合酶链式反应 341
一、基本原理 341
二、常规RT-PCR 342
三、一步法RT-PCR 344
四、RT-PCR的应用 345
第三节 定量PCR 345
一、定量PCR的概念 345
二、定量PCR的原理 345
三、定量PCR的类型 346
四、荧光定量PCR 347
五、定量PCR常见问题 351
六、定量PCR的应用 351
第四节 原位PCR 352
一、原位PCR的基本原理 352
二、原位PCR的分类 352
三、原位PCR的基本步骤 353
四、原位PCR注意事项 354
五、原位PCR的应用 355
第五节 单细胞PCR 355
一、单细胞PCR的原理 356
二、方法和步骤 356
三、单细胞PCR注意事项 358
四、单细胞RT-PCR的应用 358
第十章 蛋白质组基本理论与技术 360
第一节 蛋白质研究历史回顾 360
一、蛋白质研究的初期阶段 360
二、蛋白质研究的发展阶段 361
三、蛋白质研究的分子生物学——基因组阶段 362
四、蛋白质研究的分子生物学——蛋白质组阶段 363
第二节 蛋白质组研究的理论和技术基础 364
一、蛋白质分离纯化的理论基础 364
二、蛋白质分离纯化的技术基础 367
第三节 大鼠皮质额叶双向电泳实例分析 370
一、实验原理 371
二、实验所需设备、试剂及其配制 371
三、实验结果 375
四、实验体会 375
第四节 快速老化小鼠额叶皮质蛋白组学的考马斯亮蓝染色技术 376
一、实验原理 376
二、实验所需设备、试剂及其配制 377
三、实验结果 382
四、实验体会 385
附录一 免疫细胞化学常用试剂 388
一、缓冲液 388
二、固定剂 392
三、显色液 395
四、黏附剂 397
五、封固剂 398
六、酶消化液 398
七、其他 399
附录二 原位杂交组织化学常用试剂及处理 402
一、杂交前准备 402
二、探针的标记相关试剂 405
三、固定剂 408
四、杂交前处理相关试剂 409
五、杂交用液 410
六、杂交后漂洗溶液 411
七、原位杂交信号显示 412
附录三 图像分析软件在免疫细胞化学中的应用 414
第一节 Image Pro Plus软件在图像定量分析中的应用 414
一、使用IPP对免疫组织化学DAB显色图像作定量分析 414
二、对免疫荧光图像的定量分析 423
第二节 NIS-Elements BR在形态学研究中的应用 431
一、NIS-Elements BR分析软件的定标 431
二、NIS-Elements BR软件对简单目标的几何测量 432
三、NIS-Elements BR软件对复杂目标的几何测量 436
四、NIS-Elements BR软件测量某区域的目标 442
五、NIS-Elements BR分析软件测量荧光强度 446
六、NIS-Elements BR分析软件在多通道荧光方面的应用 451
附录四 常用计算机统计软件的使用 454
第一节 统计软件SPSS简介及使用 454
一、SPSS软件简介 454
二、SPSS的主要窗口及统计功能 454
三、SPSS常用菜单功能简介 456
四、SPSS进行统计分析的主要过程 458
五、实例分析 458
第二节 统计软件Excel简介及使用 466
一、Excel简介 466
二、Excel的数据处理与统计功能&一 466
三、实例分析 468
缩略词表 475