目 录 1
第一章超薄切片技术 1
1.1概述 1
1.2取材 3
1．取材的基本要求 3
2．取材方法 4
1.3固定 5
1．固定的概念 5
2．常用固定剂的性质 5
3．常用缓冲液的配制 10
4．常用固定液的配制 15
5．固定方法 18
6．影响固定效果的因素 21
7． 良好固定的标准 23
1.4清洗与脱水 24
1.5浸透与包埋 25
1． 目的与要求 25
2．常用包埋剂的性质与配方 26
3．浸透与包埋的操作 33
4． 包埋损伤 36
5． 包埋操作中的注意事项 37
1．支持膜的制备 38
1.6超薄切片 38
2．包埋块的修整 45
3．玻璃刀的制作 46
4． 超薄切片 51
1.7超薄切片的染色 60
1． 电镜图象反差形成的原理 60
2．染色的必要性 61
3．染色方法 62
参考文献 71
2.1负染色的原理 73
第二章负染色技术 73
2.2悬液样品的制备 74
1．直接取样 74
2．样品提纯的方法 74
3．病毒样品的浓缩方法 75
2.3染色液的配制 76
2.4染色方法 77
1．滴染法 77
2．喷雾法 77
3．漂浮法 77
2．样品的浓度 78
3．样品与染液的均匀分散性 78
1．样品的纯度 78
2.5影响染色效果的主要因素 78
4．悬液与染液的酸碱度 79
5．染色时机 79
2.6对照样品的染色 79
参考文献 79
第三章 金属投影与复型技术 81
3.1金属投影技术 81
1．真空喷镀仪简介 81
2．蒸发材料的性质 82
3．投影方法 84
4．颗粒大小的测量 87
5．影响投影效果的因素 88
3.2复型技术 89
1．一级复型 89
2．二级复型 90
参考文献 91
第四章样品的冷冻（冰冻）制备技术 92
4.1概述 92
1．生物样品中水分的存在方式 92
2．冰晶的形成及其对细胞活性的影响 93
3．冷冻剂与保护剂 94
4.2冷冻干燥技术 95
4.3冷冻取代技术 97
1．仪器的准备 98
4.4冷冻切片技术 98
2．样品的预处理 101
3．样品的冷冻 102
4．切片操作 103
5．切片的收集与染色 103
4.5冷冻断裂（刻蚀）复型技术 104
1．冷冻断裂及刻蚀装置 105
2．冷冻断裂（刻蚀）复型的制作 109
3．冷冻复型电镜图象的辨认 118
参考文献 121
1．酶的细胞化学技术 123
第五章 电镜细胞化学技术 123
5.1蛋白质的细胞化学技术 123
2．蛋白质的细胞化学技术 136
5.2核酸的细胞化学技术 138
1．醋酸铀染色法 138
2． DNA的Feulgen－六亚甲四胺银特异染色法 139
3． RNA的选择性染色 139
5.3碳水化合物的细胞化学技术 140
1．过碘酸－六亚甲四胺银法 140
2．氨基硫脲蛋白银法 141
3．酸性粘基质的定位 142
2．用洋地黄皂苷保存胆固醇的方法 143
1．保存脂肪的脱水方法 143
5.4脂肪的细胞化学方法 143
3．磷脂的保存方法 144
5.5某些无机离子的细胞化学定位 144
1．钙离子的定位 144
2．磷酸盐的定位 145
3．某些重金属离子的定位 145
5.6提取定位法 147
1．核酸的提取定位法 147
2．蛋白水解酶的应用 149
3．多糖的提取定位法 149
参考文献 150
6.1抗原的选择 152
第六章免疫电子显微镜技术 152
6.2抗体的分离与提纯 153
1．抗体的一般特性 153
2．特异性抗体的分离与提纯 155
3．抗体片段的制备 159
6.3抗体的标记技术 160
1．铁蛋白标记技术 160
2．酶标记技术 168
3．杂种抗体标记技术 171
4．免疫酶搭桥法 174
1． 铁蛋白标记抗体（Fer-Ab）的电镜染色 175
6.4 电镜样品的制备 175
2．酶标记抗体的电镜染色 180
6.5对照实验 181
1．特异抗体的封闭对照 182
2．特异抗原的吸收对照 182
3．非特异性对照 182
参考文献 182
第七章 电镜放射自显影技术 185
7.1原理 185
7.2放射自显影用的同位素 186
1．能量特征 186
2．半衰期 187
3．剂量与毒性 188
7.3 电镜自显影样品的制备 189
1．标本的标记 189
2．厚切片及超薄切片的制备 190
3．乳胶的选择、稀释与敷膜 191
4．曝光 198
5．显影与定影 199
6．样品的后处理 201
7.4对照观察 202
1．本底颗粒的测量 202
4．排除标记产物扩散的可能性 204
2．排除假阳性的对照实验 204
3．排除假阴性的对照实验 204
5．抑制剂的应用 205
7.5放射自显影照片的分析 205
1．误差与分辨率 205
2．定量分析方法 211
参考文献 214
第八章生物大分子电镜样品的制备技术 216
8.1概述 216
8.2蛋白质分子电镜样品的制备技术 218
1．对蛋白质溶液的要求 218
2．低噪声支持膜的制备 219
3．蛋白质大分子的负染色技术 220
4． 电镜观察时应注意的问题 222
5．蛋白质大分子电镜研究的进展 223
8.3核酸大分子电镜样品的制备技术 225
1． 电镜观察核酸的基本原理 225
2．实验方法与步骤 226
3． 电镜观察时应注意的问题 234
参考文献 235
第九章扫描电子显微镜及生物样品制备技术 236
9.1扫描电子显微镜的特点 236
1． 结构 237
9.2扫描电镜的结构及工作原理 237
2．工作原理 242
9.3生物样品制备方法 242
1．新鲜材料直接观察 243
2．化学的方法 243
3．物理的方法 243
4．临界点干燥法 244
5．特殊的样品制备方法 248
9.4各类样品制备的一般程序 253
1．动物的软组织 253
3．昆虫 254
2．游离细胞 254
4．植物 255
参考文献 257
主要参考书 258
第十章透射电子显微镜的基本原理及其结构 259
10.1 电子光学的基本知识 260
1．光学显微镜的局限性 260
2． 电子成象的基本原理 264
10.2透射电镜的结构及工作原理 268
1．结构概貌 268
2．主要部件的结构及功能 271
主要参考书 279