第一部分 分子生物学检验技术实验室 1
一、分子生物学检验技术实验须知 1
二、分子生物学检验技术实验室介绍 3
三、分子生物学检验技术常用仪器 5
四、分子生物学实验室生物安全 7
第二部分 核酸的分离与纯化 9
实验一 真核基因组DNA的分离与纯化 9
实验二 真核细胞mRNA的分离与纯化 17
实验三 质粒DNA的提取 26
实验四 核酸的鉴定 33
第三部分 核酸扩增技术 41
实验五 聚合酶链反应 41
实验六PCR-RFLP检测N-ras癌基因突变 45
实验七 等位基因特异性扩增法检测结核分枝杆菌rpoB基因突变 50
实验八TRAP-银染法检测端粒酶活性 54
实验九 多重PCR检测a-地中海贫血基因缺失 60
实验十PCR-SSCP检测凝血因子V基因突变 64
实验十一 实时PCR检测乙型肝炎病毒(HBV)核酸 68
实验十二 反转录-聚合酶链反应检测β-actin mRNA 72
第四部分 核酸分子杂交技术 77
实验十三 探针的制备 77
实验十四DNA分子杂交 87
实验十五RNA分子杂交 92
实验十六 荧光原位杂交 97
实验十七 用反向点杂法进行β-地中海贫血基因诊断 104
第五部分 分子克隆技术 109
实验十八 质粒DNA的限制性内切酶酶切 109
实验十九 目的片段的连接 113
实验二十 感受态细胞的制备及重组子转化 118
实验二十一 重组子的鉴定 124
第六部分 其他分子检验技术 131
实验二十二 真核细胞基因转染技术 131
实验二十三 Western印迹 142
实验二十四 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 149
实验二十五HLA基因分型 154
实验二十六 乙型肝炎病毒基因分型(芯片法) 159
第七部分 自主设计性实验 164
附录 分子生物学检验技术实验中常用试剂和缓冲液的配制 164