第一章 概述 1
第一节 什么是流式细胞术？ 1
第二节 流式细胞术能做什么？ 1
第三节 背景与回顾 2
第四节 仪器简介 4
一、BD公司 4
二、Beckman Coulter公司 7
三、ABI公司 12
四、Union Biometrica公司 12
五、Apogee公司 14
六、Partec公司 15
七、Merck Millipore公司 16
第五节 前景与展望 19
一、流式细胞术与显微技术结合 20
二、流式细胞术与质谱技术结合 21
参考文献 21
第二章 流式细胞术原理 22
第一节 工作原理 22
第二节 液流系统 23
一、鞘液 23
二、喷嘴 24
三、流式照射室 25
第三节 光学检测系统 25
一、激光和荧光 25
二、激光照射液流 31
三、光学信号 33
四、光学元件 36
五、光学信号检测系统 36
第四节 电子控制系统 40
一、光电检测器 40
二、通道 41
三、阈值 42
小结 42
参考文献 42
第三章 数据储存与分析系统 43
第一节 数据储存 43
第二节 数据分析 43
一、常用术语 44
二、流式图谱的表现形式 47
三、荧光补偿 55
第三节 数据分析实例 63
实例一：双参数FSC/SSC分析 63
实例二：三参数FSC/SSC/FL1分析 63
实例三：四参数FSC/SSC/FL1/FL2简单样本分析 64
实例四：四参数FSC/SSC/FL1/FL2复杂样本分析 65
小结 67
参考文献 68
第四章 细胞分选 69
第一节 细胞分选的原理 69
一、液滴形成 69
二、延迟时间 70
三、液滴充电与偏转 72
四、液滴的收集 72
第二节 影响分选的因素 73
一、分选速度 73
二、分选门的设定 75
三、分选模式 77
第三节 分选的质量控制与评价 78
一、分选的准确性 78
二、分选的效率 80
三、无菌分选 80
四、分选对细胞活性的影响 81
第四节 分选前的准备 81
一、分选用细胞的制备要求 81
二、准备的材料 82
三、分选时需要考虑的几个问题 83
第五节 细胞分选的应用实例 83
实例一：单细胞分选 83
实例二：回收极低比例（＜0.01％）的细胞 84
实例三：纯化稳定的细胞系 85
实例四：淋巴细胞分选 87
实例五：组织特异性干细胞分选 87
实例六：染料排异性干细胞分选 90
实例七：精子分选 94
小结 96
参考文献 97
第五章 细胞表面标志的检测 98
第一节 血液细胞的检测 98
第二节 细胞表面标志的染色技术 100
一、细胞表面分化抗原 100
二、直接染色法和间接染色法 102
第三节 对照的设置 102
一、阴性对照 103
二、同型对照 105
三、阳性对照 106
四、荧光补偿 106
第四节 定量测定 107
一、外标法 108
二、内标法 108
三、标准曲线法 108
四、分辨率 109
第五节 设门的策略 111
一、设门 111
二、检验门 112
三、荧光设门 116
四、多色流式分析实例 117
小结 118
参考文献 119
第六章 细胞内成分的检测 120
第一节 流式细胞术检测细胞内蛋白的特点 120
第二节 细胞内蛋白染色通则 122
一、细胞内蛋白染色的步骤 122
二、细胞内蛋白染色应遵循的原则 123
第三节 磷酸化蛋白的检测 123
一、固定和通透细胞 124
二、荧光抗体染色 125
三、优化染色方法 127
四、多种磷酸化蛋白同时检测 127
第四节 细胞因子的检测 129
一、T淋巴细胞的细胞因子检测 129
二、单核细胞的细胞因子检测 130
三、细胞内蛋白检测的优缺点 131
第五节 微球免疫测定法 131
一、CBA方法的原理 132
二、CBA方法的流程 132
三、CBA方法的检测范围 135
四、CBA方法的优缺点 136
第六节 磷酸化蛋白与DNA同时检测 137
小结 137
参考文献 138
第七章 细胞核成分的检测 139
第一节 常用的DNA染料 139
第二节 细胞周期 141
一、细胞周期的定量分析方法 142
二、粘连细胞的分析 144
三、画门方法 145
四、BrdU/PI双参数分析细胞周期 146
第三节 细胞周期的动态分析 147
一、BrdU/PI双参数检测 147
二、Hoechst/PI双参数检测 148
第四节 DNA总量分析和倍体分析 149
一、DNA总量分析 149
二、正常生物体的倍体分析 150
三、肿瘤细胞的非整倍体分析 150
四、植物倍体的分析 151
第五节 细胞同步化 153
一、自然同步化 154
二、人工同步化 154
第六节 DNA与RNA同时检测 155
一、吖啶橙（AO）同时检测DNA与RNA 155
二、Hoechst 33342/Pyronin Y同时检测DNA和RNA 156
第七节 DNA与蛋白质同时检测 157
一、DNA和总蛋白同时检测 157
二、DNA和细胞周期蛋白同时检测 157
第八节 染色体分析 159
小结 160
参考文献 161
第八章 细胞增殖与死亡的检测 163
第一节 细胞增殖的检测 163
第二节 细胞凋亡的检测 167
一、散射光的检测 167
二、caspases酶检测 168
三、线粒体膜电位的检测 169
四、质膜的检测 172
五、DNA检测 173
六、细胞衰老与端粒测定 175
第三节 坏死细胞的检测 177
一、散射光的检测 177
二、膜通透性的检测 178
第四节 细胞凋亡、死亡检测中存在的问题 178
一、细胞凋亡的频率可能与细胞死亡的发生率无关 178
二、以DNA片段来估计细胞凋亡频率的困难 179
三、将凋亡小体或核碎片误判为凋亡细胞 179
四、细胞凋亡、细胞坏死、细胞凋亡的“坏死阶段” 180
五、样品制备过程中凋亡细胞的选择性丢失 180
六、吞噬凋亡小体的活细胞伪装成凋亡细胞 181
七、商业试剂／试剂盒存在的问题 181
八、细胞形态仍然是鉴定凋亡细胞的黄金标准 181
小结 182
参考文献 182
第九章 流式细胞术的应用概述 184
第一节 流式细胞术在生物学研究中的应用 184
一、在细胞生物学中的应用 184
二、在细胞周期研究和DNA倍体分析中的应用 185
三、在细胞凋亡分析中的应用 185
四、在染色体核型分析中的应用 185
五、在分子遗传学中的应用 185
六、在免疫学中的应用 185
七、在植物学中的应用 186
第二节 流式细胞术在医学研究及临床中的应用 186
一、在肿瘤学中的应用 186
二、在临床细胞免疫学中的应用 187
三、在血液病治疗中的应用 190
四、在血栓与出血性疾病治疗中的应用 191
五、生物学领域的其他应用 192
第三节 流式细胞术在农林畜牧养殖业中的应用 193
一、在农林业中的应用 193
二、在家畜性别控制中的应用 193
三、在家畜疾病监控与预防中的应用 193
第四节 流式细胞术在微生物学中的应用 194
一、在病原微生物研究中的应用 194
二、在环境微生物研究中的应用 195
第五节 流式细胞术在食品、药品检测方面的应用 196
一、在食品检测中的应用 196
二、在药品检测中的应用 197
第六节 流式细胞术新技术的应用 199
一、CBA方法 199
二、定量流式细胞术 200
小结 200
参考文献 201
第十章 样本制备和染色方法 203
第一节 单细胞悬液的制备 203
一、小鼠末梢血的采集和单细胞悬液的制备 203
二、小鼠胸腺的分离和单细胞悬液的制备 204
三、小鼠骨髓的采集和单细胞悬液的制备 204
四、密度梯度离心法制备外周血单个核细胞悬液 205
五、小鼠脾脏的分离和单细胞悬液的制备 206
六、小鼠成体乳腺单细胞悬液的制备 207
七、小鼠胰腺单细胞悬液的制备 207
第二节 荧光素标记抗体的制备 208
一、FITC/Texas Red标记 208
二、生物素标记 209
三、Allophycocyanin（APC）或者Phycoerythrin（PE）标记 210
第三节 分析和分选用的细胞染色 211
一、流式分析用的细胞染色方法 211
二、流式分选用的细胞染色方法 212
三、SP细胞的染色方法 213
四、流式分选用的精子染色方法 214
第四节 细胞内分子染色 214
一、常用的细胞固定方法 215
二、细胞内分子的染色方法 215
三、细胞内和细胞外分子同时染色的方法 216
第五节 细胞周期染色 216
一、固定全细胞的PI染色方法 217
二、非固定细胞的无洗染色方法 218
三、BrdU染色方法 219
四、植物细胞的DNA染色方法 220
第六节 细胞同步化实验方法 220
一、过剩胸腺嘧啶脱氧核苷法——S期细胞同步化 221
二、羟基脲法——S期细胞同步化 221
三、秋水仙胺法——M期细胞同步化 222
四、血清饥饿法——G0期细胞同步化 222
五、G1期和G2期细胞同步化实验方法 223
第七节 DNA和RNA同时染色 223
一、Hoechst 33342/PY同时检测DNA和RNA 223
二、吖啶橙（AO）同时检测DNA和RNA 224
第八节 细胞凋亡染色 224
一、PI染色法——DNA凋亡峰的检测 225
二、Annexin V/PI双染色法 226
三、Hoechst 33342/PI双染色法 226
四、TUNEL染色法 227
小结 228
参考文献 229
附录 230
一、流式细胞术相关网址 230
二、流式细胞术相关实验方法网址 231
三、荧光素试剂公司 231
四、荧光光谱网址 232
五、荧光素激发和发射光谱一览表 233