第一篇 理论篇 3
第一章 非洲猪瘟概述 3
第一节 非洲猪瘟的流行史 3
一、起源及流行史 3
二、大事记 7
第二节 非洲猪瘟的流行和防控特征 9
一、流行特征 9
二、传播方式 10
三、危害 11
四、防控特征 12
第二章 病原学 18
第一节 分类和命名 18
一、早期的分类地位 18
二、近来分类地位的变动 19
第二节 病毒结构与组成 20
一、形态结构 20
二、化学组成 21
第三节 对理化因子的抵抗力 22
一、对物理因子的抵抗力 23
二、对化学因子的抵抗力 24
第四节 培养特性 24
一、体内培养 24
二、体外培养 25
第五节 生物学特性 27
一、红细胞吸附特性 27
二、抗原特性 28
三、致病性 30
第三章 分子病原学 37
第一节 基因组结构特征和变异 37
一、ASFV基因组结构特征 37
二、ASFV遗传变异 38
第二节 主要基因及其编码蛋白的结构与功能 40
一、参与DNA复制和修复以及mRNA转录和加工的蛋白质 41
二、构成病毒粒子结构的蛋白质 44
三、参与病毒复制和对宿主细胞调节的酶 47
四、与宿主相互作用的蛋白质 49
五、多基因家族（MGFs）蛋白 51
第三节 遗传进化分析 52
一、p72基因 53
二、pB602L（9-RL）基因 54
三、p54基因 56
四、已知全基因组序列的11株ASFV的123个连锁基因 56
第四章 流行病学 67
第一节 传染源 67
一、家猪 67
二、野猪 70
三、产品 72
四、软蜱 73
五、其他吸血昆虫 73
第二节 传播途径及传播方式 73
一、传播途径 74
二、传播方式 76
第三节 易感动物 77
一、家猪 77
二、野猪 78
三、蜱类 79
四、实验动物 80
第四节 野猪的分布及在ASFV传播中的作用 81
一、野猪的生活习性和分布 81
二、野猪在ASFV传播中的作用 86
第五节 蜱在病毒传播中的作用 87
一、钝缘蜱的分类地位 87
二、钝缘蜱的形态特征 88
三、钝缘蜱的生活习性 89
四、钝缘蜱的分布情况 89
五、蜱在ASFV传播中的作用 90
第六节 流行特征 91
一、地域性 91
二、虫媒传染 92
三、流行形式多样化 92
第七节 地区性分布 94
一、非洲大陆的分布 94
二、欧洲大陆西部的分布 95
三、美洲大陆的分布 96
四、欧洲大陆东部的分布 97
五、俄罗斯的分布 97
第八节 分子流行病学 98
一、基因分型 98
二、p72基因型与地区分布的关系 99
三、基因分型与致病性的关系 100
四、分子流行病学与疫病防控 100
第五章 致病机理 107
第一节 病毒与宿主动物的相互作用 107
一、与家猪的相互作用 107
二、与野猪的相互作用 109
三、与蜱的相互作用 110
第二节 病毒与宿主细胞的相互作用 111
一、ASFV的侵入 113
二、ASFV基因的表达 113
三、ASFV DNA的复制 116
四、ASFV粒子的形成 117
五、ASFV的释放 118
第三节 病毒逃逸宿主免疫防御功能的机制 120
一、ASFV A238L蛋白对细胞信号转导通路的调节 120
二、对感染细胞凋亡的调节 123
三、对病毒与细胞黏附性的调节 125
第四节 宿主的抗感染免疫 126
一、免疫学特性 126
二、非特异性天然免疫反应 126
三、获得性免疫反应 128
第六章 临床症状 149
第一节 临床概述 149
一、潜伏期 149
二、发病率和死亡率 150
第二节 临床表现 150
一、最急性型 151
二、急性型 151
三、亚急性型 154
四、慢性型 155
五、亚临床感染 157
第七章 病理变化 160
第一节 最急性型和急性型 160
一、大体剖检 160
二、组织病理学 161
三、超微结构 163
第二节 亚急性型 165
一、大体剖检 165
二、组织病理学 165
第三节 慢性型和亚临床感染 165
一、大体剖检 165
二、组织病理学 166
第四节 不同毒株感染猪的病理变化 166
一、Lisbon 60（L60）强毒株 167
二、Malawi'83（M'83）强毒株 168
三、E70强毒株 170
四、E75毒株 171
五、The Dominican Republic（DR）毒株 172
第八章 诊断 175
第一节 临床诊断要点 175
一、流行病学特点 175
二、临床症状要点 176
三、病理变化要点 176
四、鉴别诊断 177
第二节 实验室诊断 179
一、实验室诊断技术概述 179
二、病毒分离鉴定 187
三、病毒抗原检测 193
四、病毒核酸检测 196
五、血清抗体检测 203
六、与软蜱有关的实验室检测 210
第九章 非洲猪瘟传入我国的风险分析 220
第一节 风险分析的组成要素 220
一、风险识别 220
二、风险评估 221
三、风险管理 222
四、风险交流 222
第二节 ASF风险评估的步骤和思路 223
第三节 ASF传入我国的风险分析 226
一、危害确认 227
二、ASF传入的风险因素分析 227
三、ASF传入我国的高风险地区 230
四、ASFV传入我国可能造成的损失 233
五、风险管理措施 233
六、我国现有规避风险的措施 234
第四节 预警预报 236
一、ASF的预警工作 237
二、国际的跨境动物疾病预警系统 240
第十章 应急预案 243
第一节 应急预案的制定 243
一、制定应急预案的目的和原则 243
二、应急预案的内容和结构 245
三、应急预案制定和修订程序 246
第二节 ASF应急防控预案 246
一、疫情监测、预警与报告 246
二、疫情分级和应急响应 249
三、对疫情采取的应急处置措施 250
四、应急保障措施 257
第三节 应急管理机构和职责 257
一、应急指挥机构 257
二、日常管理机构 258
三、专家委员会 258
四、应急处理机构 258
第十一章 预防与控制 260
第一节 基本原则 260
一、总体策略 260
二、主要措施 261
三、政策法规 265
四、主要发生国家采取的措施及现状 266
第二节 控制和扑灭措施 271
一、建立监测预警系统，实现早期确诊 271
二、分区管理 272
三、根除净化措施 272
四、生物安全措施 273
五、媒介动物的调查和监测 274
六、流行病学调查和监测 274
七、恢复生产 274
第三节 疫苗免疫 275
一、灭活疫苗的研制和免疫效果的评价 275
二、弱毒疫苗的研制和免疫效果的评价 279
三、新型疫苗研究进展 284
第四节 我国目前应采取的综合性措施 286
一、法规建设和国际交流 286
二、监测预警 286
三、加强进口检疫 287
四、加强边境检疫 288
五、卫生消毒 289
六、媒介动物的调查与监测 290
七、改进养殖模式 293
八、严格流通管理 294
九、宣传教育 295
第十二章 社会和经济影响 301
第一节 社会影响 301
一、国际影响 301
二、暴发国家的国内影响 303
第二节 经济损失 306
一、直接损失 306
二、间接损失 308
第三节 国际贸易影响 309
一、直接影响 309
二、间接影响 310
第十三章 非洲猪瘟流行趋势和防控展望 314
第一节 流行趋势 314
一、分布演化趋势 314
二、致病性发展趋势 315
三、基因型流行趋势 316
第二节 全球防控形势 317
一、非洲 318
二、亚洲和大洋洲 318
三、美洲 319
四、欧洲 319
第三节 我国的防控形势 321
一、传入我国的潜在途径 322
二、主要的防控措施 322
第四节 防控展望 325
一、疫苗研究进展 325
二、防控展望 327
第二篇 技术篇 337
第一章 样品的采集与运输 337
第一节 采样的基本条件及原则 337
一、采集ASF样品应具备的基本条件 337
二、采集ASF样品应遵循的基本原则 337
第二节 样品采集及预处理 338
一、采样用具和试剂的准备 339
二、不同样品的采集及预处理 339
第三节 样品记录、运输和保存 343
一、样品信息的记录 343
二、样品运输 346
三、样品保存 347
第二章 病毒分离培养与鉴定 350
第一节 常用细胞及其制备方法 350
一、常用细胞 350
二、制备方法 351
第二节 病毒分离培养 364
一、临床样品中ASFV分离培养 365
二、ASFV在原代细胞或是传代细胞中的适应培养 370
三、注意事项 373
第三节 红细胞吸附试验 373
一、原理 374
二、红细胞吸附试验 375
三、讨论 379
第四节 动物接种试验 380
一、材料 381
二、操作方法 381
三、结果判定 381
四、讨论 381
第三章 病毒抗原检测 388
第一节 抗体制备 388
一、多克隆抗体的制备 388
二、单克隆抗体的制备 391
第二节 直接免疫荧光试验 393
一、原理 393
二、材料 393
三、操作方法 394
四、结果判定 394
五、注意事项 394
第三节 免疫酶组化技术 395
一、原理 395
二、材料 396
三、操作方法 396
四、结果判定 397
五、注意事项 397
六、讨论 398
第四节 双抗体夹心ELISA 398
一、原理 399
二、材料 399
三、操作方法 399
四、结果判定 400
五、注意事项 400
第五节 其他方法 401
一、补体结合试验 401
二、琼脂双向扩散试验 402
三、免疫放射分析技术 402
四、免疫传感器 403
五、交叉免疫电泳 403
六、免疫电子显微镜技术 404
七、放射免疫沉淀技术 404
八、斑点免疫结合试验 405
第四章 病毒核酸检测 409
第一节 病毒DNA的提取 409
一、酚／氯仿提取法 409
二、柱式提取法 411
三、磁珠提取法 414
四、讨论 415
第二节 PCR检测法 415
一、常规PCR方法 416
二、巢氏PCR 420
三、多重PCR 423
四、讨论 427
第三节 实时荧光PCR技术 429
一、原理 429
二、根据B646L基因序列设计的实时荧光PCR方法 431
三、根据E183L基因序列设计的实时荧光PCR方法 432
四、讨论 433
第四节 环介导等温扩增技术 434
一、原理 436
二、材料 438
三、操作方法 438
四、结果判定 439
五、注意事项 439
六、讨论 439
第五节 入侵检测法 440
一、原理 440
二、材料 441
三、操作方法 441
四、结果判定 441
五、讨论 441
第六节 原位杂交技术 442
一、原理 442
二、材料 442
三、操作方法 443
四、结果判定 445
五、讨论 446
第五章 血清抗体检测 449
第一节 酶联免疫吸附试验 449
一、以全病毒为包被抗原的ELISA抗体检测 450
二、以P72蛋白为包被抗原的ELISA抗体检测 453
三、以P30蛋白为包被抗原的ELISA抗体检测 456
四、以P54蛋白为包被抗原的ELISA抗体检测 458
五、以PP62蛋白为包被抗原的ELISA抗体检测 458
六、讨论 459
第二节 间接免疫荧光试验 460
一、原理 461
二、材料 461
三、操作方法 461
四、结果判定 462
五、注意事项 462
第三节 免疫印迹试验 462
一、以CS-P为抗原的IB试验 462
二、以重组蛋白为抗原的IB试验 464
三、讨论 465
第四节 对流免疫电泳试验 466
一、原理 466
二、材料 467
三、操作方法 467
四、结果判定 468
第五节 其他免疫酶技术 468
一、间接免疫过氧化物酶蚀斑染色试验 468
二、免疫过氧化物酶单层细胞试验 469
三、斑点免疫结合试验 470
第六节 抗蜱抗体检测方法 470
一、原理 471
二、材料 471
三、操作方法 471
四、结果判定 472
五、讨论 472
第七节 其他方法 473
一、补体结合试验 473
二、琼脂免疫扩散试验 473
三、放射性免疫试验 474
四、蚀斑减少试验 474
五、免疫传感器 475
第六章 遗传分析及溯源 481
第一节 以p72（B646L）基因进行的遗传分析（基因分型） 481
一、原理 482
二、材料与方法 482
三、结果与分析 483
第二节 以B602L基因进行的基因型内遗传分析（基因型内分支） 492
一、原理 492
二、材料与方法 502
三、结果 502
四、讨论分析 502
第三节 案例分析——2007年格鲁吉亚ASFV的遗传分析及溯源 503
一、ASFV在格鲁吉亚的暴发和蔓延 503
二、序列扩增与遗传分析 504
三、讨论 506
附录一 OIE陆生动物诊断试验和疫苗手册（2008） 512
附录二 英国非洲猪瘟防控法规 531
附录三 澳大利亚非洲猪瘟应急计划手册 534
附录四 OIE所列的ASF参考实验室及联系人 541
附录五 缩略语对照 542