一、导言 1
二、培养液和细胞悬液的制备 3
A.100×浓缩的次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷原液 3
B.培养液和盐溶液的配制 3
C.聚乙二醇(PEG)的配制 4
D.细胞悬液的制备 4
1)小鼠脾细胞 4
2)小鼠腹腔巨噬细胞 4
三、细胞融合 4
A.动物的选择 4
B.免疫 5
C.供融合的细胞系 5
D.应用PEG进行细胞融合 6
A.软琼脂克隆技术及具有抗SRBC活性杂交瘤克隆的检测 7
四、克隆 7
B.应用有限稀释法进行克隆 8
五、抗体特异性和抗体亚类的测定 9
A.Jerne氏单细胞空斑试验 9
1)HRBC的TNP偶联 10
2)蛋白A结合的SRBC 10
B.点试验(Spot test) 11
C.凝集试验 11
D.琼脂扩散试验 11
E.酶免疫测定(EIA)和放射免疫测定(RIA) 12
1)材料 12
a)家兔抗小鼠Ig 12
b)应用亲和层析法分离家兔抗小鼠Ig 12
c)应用125I标记家兔抗小鼠免疫球蛋白 12
d)EIA用的试剂 13
2)方法 14
3)细胞的EIA和RIA 15
a)不贴壁细胞 15
b)用于抗体结合试验的细胞固定技术 16
c)固定细胞的EIA法 17
F.EIA在亚类测定上的应用 17
G.不同单克隆抗体对同一抗原的结合 18
H.51Cr释放试验 20
六.应用蛋白A-Sepharose亲和层析法分离小鼠IgG及其亚类 21
七.用14C-亮氨酸进行免疫球蛋白的标记 22
八.细胞表面抗原的标记和免疫沉淀 22
九.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 24
A.试剂、化学物质和材料 24
B.操作方法 26
C.蛋白从聚丙烯酰胺凝胶转移到硝化纤维素膜上 27
十、等电聚焦 29
A.材料 29
B.凝胶槽的装配 29
C.5%聚丙烯酰胺凝胶的制备 29
D.样品的还原与加样 30
E.聚焦方法 30
F.pH梯度的测定 30
G.蛋白区带图谱的染色 30
十一、免疫萤光 31
十二、从腹水中大量提纯单克隆抗体 31
十三、支原体的检查与控制措施 33
十四、杂交瘤细胞的冻存 35
附图 36