第一部分 生物化学实验技术 1
第一章 分光光度技术 1
第一节 基本原理 1
一、光的基本知识 1
二、朗伯-比尔（Lamber-Beer）定律 2
第二节 分光光度计结构简介 3
一、光源 3
二、分光系统（单色器） 4
三、狭缝 4
四、比色杯 4
五、检测器系统 4
第三节 分光光度技术的应用 5
一、测定溶液中物质的含量 5
二、用紫外光谱鉴定化合物 5
第四节 分光光度法的误差 6
第五节 常见国产分光光度计的使用 6
一、72型分光光度计 6
二、721型分光光度计 7
三、751型分光光度计 8
四、使用分光光度计的注意事项 10
参考文献 10
思考题 10
第二章 色谱技术 11
第一节 概述 11
一、引言 11
二、层析过程 12
三、层析法分类 12
四、各类色谱法简介 14
第二节 凝胶色谱 14
一、基本理论 15
二、凝胶的种类及性质 16
三、实验技术 17
第三节 离子交换色谱 18
一、基本理论 18
二、离子交换的分类及常见种类 19
三、实验操作 20
第四节 亲和色谱 21
一、基本理论 21
二、实验方法 23
第五节 高压液相色谱 23
一、分类 23
二、易出现的问题 25
三、主要设备及操作流程 26
第六节 气相色谱 27
一、气相色谱法的分类及发展 27
二、气相色谱仪的构成及一般流程 27
三、气相色谱中层析柱及固定相的特点 28
参考文献 29
思考题 29
第三章 电泳 30
第一节 基本理论 31
第二节 醋酸纤维素薄膜电泳 33
第三节 琼脂糖凝胶电泳 33
第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 34
第五节 电泳后大分子的检测 38
第六节 等电聚焦 40
一、基本原理 41
二、载体两性电解质 41
三、密度梯度等电点聚焦 42
参考文献 43
思考题 43
第四章 放射性同位素技术 44
第一节 概述 44
一、放射性同位素的特点 44
二、放射性强度及其度量单位 44
三、射线与物质的相互作用 45
第二节 放射性同位素的应用——同位素示踪法 46
一、同位素示踪法基本原理和特点 46
二、示踪实验的设计原则 47
三、同位素示踪法在生物化学和分子生物学中的应用 57
第三节 放射性测量 63
一、闪烁型探测器 64
二、晶体闪烁计数 65
三、液体闪烁计数 68
四、放射测量的注意事项 77
第四节 放射防护 78
一、放射性的危害及防护的必要性 78
二、放射防护的三原则 79
三、我国现行的放射卫生防护标准 80
四、内照射和外照射的防护 81
五、放射性污染的清除 87
六、合理处理放射性三废 90
参考文献 91
思考题 92
第五章 生物大分子制备基本技术 93
第一节 选择材料及预处理 93
第二节 细胞的破碎及细胞器的分离 93
一、细胞的破碎 93
二、细胞器的分离 94
第三节 提取和纯化 95
一、蛋白质（包括酶）的提取 95
二、蛋白质的分离纯化 96
三、核酸的提取与纯化 97
第四节 浓缩、干燥及保存 98
一、样品的浓缩 98
二、干燥 99
三、贮存 100
参考文献 100
思考题 100
第六章 超离心技术 101
第一节 基本原理 101
一、相对离心力 101
二、沉降速度 102
三、沉降系数 103
四、沉降时间 105
第二节 转头和离心管 105
一、固定角度转头 105
二、甩开吊筒式转头 106
三、垂直管转头 106
四、区带转头 106
五、离心管 107
第三节 离心方法 107
一、差速沉淀离心 108
二、速度区带离心 109
三、等密度离心 113
第四节 仪器装置和操作 114
一、离心机的类型和应用范围 114
二、超速离心机 114
三、高速离心机 117
四、台式医用离心机 117
参考文献 118
思考题 118
第二部分 基因分子生物学基本技术 123
第七章 核酸杂交技术 123
第一节 DNA的变性与复性 123
一、DNA变性 123
二、复性 125
第二节 核酸杂交技术概述 126
一、前言 126
二、探针-靶反应 128
第三节 核酸探针 128
一、核酸探针的种类 129
二、核酸探针的标记和检测 132
第四节 核酸分子杂交方法 137
一、核酸分子杂交的类型 137
二、核酸分子杂交实验因素的优化 145
参考文献 149
思考题 150
第八章 重组DNA技术 151
第一节 分子克隆常用技术 151
一、核酸的纯化 151
二、核酸的浓缩 151
三、DNA、RNA的定量 152
四、核酸的凝胶电泳和分子量参照物 152
第二节 分子克隆常用载体 154
一、质粒 154
二、单链丝状噬菌体和噬粒 156
第三节 分子克隆中常用的酶 157
一、限制性内切核酸酶 157
二、DNA聚合酶 162
三、连接酶 163
四、T4噬菌体多核苷酸激酶 164
五、碱性磷酸酶 164
第四节 DNA的限制酶切割及限制片段的回收 164
一、限制酶消化反应的进行 164
二、消化产物的凝胶电泳分析 165
三、凝胶中DNA片段的回收 165
第五节 DNA的连接 166
第六节 外源DNA导入宿主细胞 169
一、大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 169
二、高压电穿孔法转化大肠杆菌 170
第七节 含重组质粒的细菌菌落的鉴定 170
一、插入失活 170
二、α互补 172
三、小规模制备质粒DNA进行限制酶切分析 173
四、杂交筛选 174
五、DNA序列分析 175
参考文献 175
思考题 175
第九章 聚合酶链反应（PCR） 176
第一节 PCR的基本原理和方法 176
一、PCR原理 176
二、用于PCR的DNA聚合酶 177
三、PCR方法 179
四、PCR样品的快速制备 179
第二节 PCR技术的应用 183
一、在基因工程中的应用 183
二、在医学中的应用 187
第三节 PCR的设计 197
一、标准反应 197
二、PCR缓冲液 197
三、循环参数 198
四、引物的设计 199
五、PCR的灵敏度和特异性 200
六、PCR污染和残余物 201
七、PCR的错误掺入 201
参考文献 202
思考题 202
第十章 DNA序列测定技术 203
第一节 序列测定的技术和策略 203
一、Sanger双脱氧链终止法 203
二、Maxam-Gilbert DNA化学降解法 207
三、测序策略 209
第二节 Sanger双脱氧链终止法测序 210
一、设立双脱氧测序反应 210
二、变性聚丙烯酰胺凝胶 211
三、应用大肠杆菌DNA聚合酶I Klenow片段的双脱氧测序反应 219
四、应用测序酶的双脱氧测序反应 221
五、测定变性双链DNA模板的序列 224
六、测定DNA扩增产物的序列 224
第三节 双脱氧测序中出现的问题 226
一、模板特异的问题 227
二、全局性问题 229
三、聚丙烯酰胺凝胶出现的问题 229
参考文献 229
思考题 230
第三部分 生物化学和分子生物学实验 233
实验一 蛋白质的变性、凝固及沉淀反应 233
实验二 蛋白质等电点的测定 236
实验三 几种因素对唾液淀粉酶的作用 237
实验四 乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的分离 239
实验五 脲酶Km值简易测定法 241
实验六 血清白蛋白、γ-球蛋白的分离和提纯 243
实验七 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 248
实验八 Lowry's法测定蛋白质含量 251
实验九 紫外吸收法测定蛋白质含量 252
实验十 各种血红蛋白吸收光谱的观察 253
实验十一 组织DNA与RNA的分离、提纯 255
实验十二 DNA与RNA的定量测定 257
实验十三 DNA的琼脂糖凝胶电泳 259
实验十四 RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳 260
实验十五 RNA的合成及其抑制 261
实验十六 NK细胞活性的示踪—125I-UdR同位素释放试验 264
实验十七 放射性焦磷酸（32ppi）-腺三磷交换法测定核糖核酸连接酶的活性 266
实验十八 蛋清溶菌酶的分离 268
实验十九 肾碱性磷酸酶的分离 270
实验二十 聚丙烯酰胺凝胶电泳 272
实验二十一 胰凝乳蛋白酶的制备及活力测定 275
实验二十二 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量 280
实验二十三 煮沸法快速提取质粒DNA 284
实验二十四 碱裂解法快速提取细菌质粒DNA 286
实验二十五 琼脂糖凝胶电泳检查DNA 288
实验二十六 DNA体外重组实验 290
实验二十七 核酸分子杂交实验 293
第四部分 附录 299
Ⅰ 生物化学实验须知 299
一、实验室规则 299
二、实验室急救 299
三、玻璃仪器的洗涤及洗液的配制 300
四、生化实验样品的制备 301
五、实验误差与数据处理 304
Ⅱ 试剂的配制 307
一、溶液浓度的表示与计算 307
二、常用缓冲液配方 309
三、指示剂 316
四、冷却剂和干燥剂 318
五、试剂配制中常用数据 319
六、闪烁液配方 326
Ⅲ 分子克隆中使用的试剂与缓冲液的配制 328
一、酸和碱的浓度 328
二、贮存液 330
三、杂交试验中用于降低背景的封闭剂 335
四、酶类 336
五、常用缓冲液 336
Ⅳ 分子克隆中的常用技术 343
一、玻璃制品和塑料制品 343
二、核酸的纯化 343
三、DNA和RNA的定量 345
四、溴化乙淀溶液的净化处理 345
五、核酸的浓缩 346
六、核酸中放射性的测定 349
七、用于凝胶电泳的标准参照物 351
八、放射自显影 351
九、凝胶过滤层析 352
十、离心柱层析 353
十一、透析管的处理 355
十二、质粒DNA的纯化 355
生物化学和分子生物学实验常用数据资料 357
一、层析法常用数据 357
二、硫酸铵饱和度的常见表 367
三、离心机转数与离心力的列线表 369
四、纯化的人血浆蛋白质的分子参数 371
五、常用参考蛋白质分子量 377
六、透光度和吸光度换算表 378
七、同位素资料 381
八、元素周期表 382
九、DNA资料 383
十、字母与词头 384
十一、元素表 386
十二、常用药品中英文对照及分子式分子量表 391