第一章 概述 1
第一节microRNA的发现历程 1
第二节microRNA的起源与加工成熟 2
第三节microRNA的特征和鉴别 9
第四节microRNA的调控机理 11
第五节microRNA的功能 14
第六节microRNA、siRNA、piRNA及其他非编码RNA 19
参考文献 25
第二章microRNA的生物信息学研究方法 31
第一节microRNA的生物信息学分析策略概述 31
第二节microRNA序列信息的获取及相关数据库的建立 32
第三节microRNA簇的分析策略 41
第四节microRNA的种系发育分析 47
第五节microRNA基因的转录调控分析 49
参考文献 69
第三章microRNA的分子生物学研究方法 71
第一节microRNA表达分析方法 71
第二节microRNA体外或体内水平的过表达研究 75
第三节microRNA表达抑制研究 76
第四节 体外验证microRNA作用的靶基因 77
第五节microRNA功能研究的策略 78
参考文献 79
第四章microRNA新基因的预测、克隆鉴定及注册 84
第一节microRNA新基因的预测及注册程序 84
第二节microRNA新基因的克隆及鉴定方法 87
参考文献 100
第五章microRNA表达分析方法 103
第一节microRNA基因芯片分析 103
第二节microRNA PAGE/Northern Blot分析 113
第三节microRNA的实时定量PCR检测 120
第四节microRNA LNA-ISH原位杂交 130
参考文献 134
第六章microRNA表达的干预方法——过表达 139
第一节 化学合成的microRNA mimics 139
第二节 真核系统过表达——非病毒载体瞬时表达载体的构建 140
第三节microRNA腺病毒过表达系统 142
第四节microRNA的慢病毒过表达系统 148
参考文献 155
第七章microRNA表达的干预方法——表达抑制 157
第一节 反义核酸分子的抑制策略——化学合成的microRNA抑制剂 157
第二节 基因水平的抑制策略 161
第三节 基于病毒表达系统的microRNA抑制策略 162
参考文献 167
第八章 靶基因预测分析及萤光素酶双报告基因系统验证 170
第一节 生物信息学预测——microRNA靶基因分析软件的设计及使用 170
第二节 萤光素酶双报告基因系统的应用 184
参考文献 194
第九章microRNA研究方法在肝细胞癌研究中的应用 197
第一节microRNA-21在肝细胞癌中的功能研究简介 197
第二节microRNA-21在肝细胞癌中的功能研究所用实验材料与方法 198
第三节miR-21在肝细胞癌发生过程中的表达分析及功能研究 211
第四节miR-21在肝细胞癌发生及发展过程中的作用机制研究 216
第五节miR-21通过调控不同的靶基因在肝细胞癌发生过程中所发挥的功能研究 223
第六节miR-21对重要信号通路及功能基因的影响 229
第七节microRNA在肿瘤研究中的分析与展望 231
参考文献 234