绪论 1
第一章 各种光学显微镜术 4
第一节 复式显微镜 4
一、显微镜的构造和各部分的用途 5
(一)光学系统 5
(二)机械装置 8
二、显微镜的光学原理及其主要性能 10
(一)显微镜的光学原理 10
(二)显微镜的主要性能 11
三、显微镜的使用和注意事项 18
(一)观察前的准备工作 18
(二)显微镜的照明操作 20
(三)聚光器和物镜配合的操作和滤光片的选择 22
(四)观察操作和油镜的使用 24
(五)观察后的处理工作 25
一、相差显微镜及其用途 27
(六)镜检过程中遇到的问题和分析 27
第二节 相差显微镜与活细胞观察 27
二、相差显微镜的结构 28
(一)环状光阑 28
(二)相板 29
(三)中心望远镜 31
(四)光源和滤光器 31
三、相差显微镜的原理 32
(一)相差 33
(二)衍射和干涉 33
四、相差显微镜的用法 36
(一)相差显微镜的装置 36
(二)调焦和调光 37
(三)中心调节 37
(一)材料 39
(四)相板的选择 39
五、相差显微镜标本的制作 39
(二)载玻片和盖玻片 40
(三)封埋剂 40
(四)染色 42
第三节 暗视野显微镜 43
一、暗视野显微镜及其用途 43
二、暗视野显微镜的光学基础和照明特点 43
(一)胶态体系的光学性质 43
(二)暗视野显微镜照明的特点 44
三、暗视野显微镜的结构 45
(一)抛物面聚光器 46
(四)辉光聚光器 47
(五)同心球面聚光器 47
(三)明暗两用聚光器 47
(二)心形面聚光器 47
四、暗视野显微镜的用法 48
第二章 活体染色 50
第一节 活体染色的定义、目的及染色机制 50
一、何谓活体染色？ 50
二、活体染色与体外活体染色 51
三、活体染色的机制 51
第二节 活体染色的技术 53
一、活体染色剂的分类 53
二、染料溶液的配制和保存 54
三、染色方法 55
第三章 细胞器--线粒体和高尔基体的固定与染色法 63
第一节 线粒体的固定和染色法 63
一、固定和固定剂 63
(一)Dietrich-Parat方法 63
(二)Regaud方法 64
(三)Benoit方法 65
二、包埋和切片 65
三、染色法 65
(一)阿特曼(Altmann)氏染色法 65
(二)Regaud染色法 66
第二节 高尔基体的固定和染色法 67
一、高尔基体的固定 67
二、主要固定剂及其原理 68
(一)硝酸银浸染法 68
(二)四氧化锇浸染法 70
(三)四氧化锇蒸气直接浸染法(汪德耀，1962) 71
第四章 细胞化学 72
第一节 细胞的核酸化学方法 72
一、引言 72
(一)鉴定核酸中的嘌呤和嘧啶的方法简述 73
二、鉴定核酸的细胞化学方法 73
(二)鉴定核酸中DNA的细胞化学方法 76
(三)孚尔根显微分光光度计的用法 84
(四)鉴定核酸中RNA的细胞化学方法 89
第二节 蛋白质和氨基酸的细胞化学 94
一、总论 94
(一)单纯蛋白质 94
(二)结合蛋白质 94
二、方法及原理 95
(一)Millon氏反应(Millon 1849) 95
(二)Ninhydrin(苯骈环三酮戊烃的水合物)-Schiff和Alloxan(四氧嘧啶)-Schiff法［Yasuma(安间)和Ichikawa(市川)1953］ 96
(三)Sakaguchi氏反应 98
(四)黄色蛋白反应 99
(五)--SH基反应 99
(六)Danielli双偶氮结合法 101
(一)酶作用的一般特性 107
第三节 酶的细胞化学 107
一、关于酶的通论 107
(二)酶的分类和命名简介 110
二、关于酶的细胞化学的一般应注意的问题 112
(一)扩散及吸附现象 112
(二)对照试验 115
(三)固定问题 115
(四)酶催化反应专一性的相对性问题 116
(五)酶细胞化学的定量分析 116
(六)简述水解酶的一些例证 117
第四节 糖的细胞化学 120
一、多糖类 121
(一)粘多糖 122
(二)粘蛋白和糖蛋白 123
(一)PAS反应 124
二、糖类的细胞化学 124
(三)糖脂类 124
(二)过碘酸-Schiff反应的专一性问题 125
(三)PAS阳性物质之间的区分 126
(四)PAS反应的原理 127
第五节 脂类的细胞化学 129
一、脂肪的分类 129
二、关于脂类物质的组织化学分析 130
三、脂类的组织化学方法 131
四、胞质反应 134
五、胆固醇和固醇 134
第五章 生物学中的放射自显影术 136
第一节 放射自显影的基本原理 136
一、基本原理 137
(一)放射性同位素 138
(二)乳胶 139
(三)核子乳胶的选择 140
一、宏观自显影 141
第二节 放射自显影的基本操作方法 141
二、显微放射自显影 142
(一)方法简介 142
(二)操作步骤 148
三、电子显微镜放射自显影 153
(一)电子显微镜放射自显影标本的制备 155
第六章 细胞培养 172
第一节 动物细胞的培养 172
一、组织培养及其应用 172
二、培养前的准备工作 174
(一)器械的清洗和消毒 174
(二)生理盐水的制备 176
(三)培养基的制备 180
(一)组织块培养法 190
三、培养方法 190
(二)细胞悬液培养法 194
(三)器官培养法 196
第二节 植物细胞融合 198
一、原生质体培养与植珠的再生 198
(一)材料的选择与酶液的制备 198
(二)原生质体的分离与培养 199
(三)原生质体的分裂与分化 200
二、原生质体融合 200
(一)原生质体分离 200
(二)原生质体融合 200
第七章 显微照相术 202
第一节 照相原理与感光材料 202
一、照相原理与相机的结构 202
(一)照相原理 202
(二)照相机的构造 203
二、感光材料 207
(一)感光片的结构与性能 207
(二)相纸的结构与性能 212
(三)感光材料正反面的辨别 214
第二节 显微照相装置和照相程序 214
一、小型显微照相装置及操作程序 215
(一)主要构成部件 215
(二)去镜头的显微照相机的照相程序 216
(三)带镜头的小型显微照相机的照相程序 217
二、带皮腔的立体和显微摄影两用机 218
三、曝光时间 219
四、放大率及测量方法 220
第三节 底片的冲洗和晒印放大技术 220
一、底片冲洗的步骤及原理 220
(二)显影 221
(一)水中浸润 221
(三)停显 225
(四)定影 226
(五)水洗 228
(六)晾干 229
(七)其他(底片的减薄和加厚) 229
二、晒印与放大技术 230
(一)晒印 230
(二)放大 231
第八章 电子显微镜及其在生物学上的应用 232
第一节 电子显微镜的结构原理 232
一、引言 232
(一)几个常用的基本概念--“分辨率”、“放大倍数”和“反差” 232
(二)显微术的长度单位 236
二、电镜的结构原理 237
(一)光学透镜与电子透镜 237
(二)电镜成像原理 240
(三)电镜的主要构成部件及性能 242
第二节 电子显微镜的发展及未来 250
一、电镜的发展历史 250
二、电镜技术的发展趋势 252
(一)超高分辨本领 252
(二)超高压电镜 253
(三)扫描电镜(SEM) 253
(四)电视电镜 254
(五)透射扫描电镜(TSEM) 255
(六)电镜与其他新技术的配合作用 255
第三节 电子显微镜在生物学上的应用 256
一、细胞学方面 257
二、病毒结构研究方面 257
四、癌病防治研究 258
三、叶绿体超微结构的研究 258
五、分子生物学方面 259
六、动物中枢神经突触等方面的研究 259
第九章 电镜的生物标本制备技术 261
第一节 超薄切片法 262
一、取材 262
二、固定和固定剂的选择 263
(一)固定的意义 263
(二)几种常用固定剂 263
(三)缓冲液和附加液 265
(四)几种常用固定液及配方 266
(五)固定方法及注意事项 271
三、块染 272
四、脱水 273
五、渗透与聚合 273
六、切片 283
七、染色 293
第二节 其他制样技术 298
一、负染色技术 298
二、表面复型法 298
三、真空喷镀法 299
四、冰冻超薄切片法 300
五、冰冻蚀刻技术 300
六、电镀放射自显影术 301
七、抗原抗体法 301
第十章 实验实例 302
实验一、油镜的原理、使用和细胞形态观察 302
实验二、几种特殊光学显微镜的原理及使用的演示 307
实验三、液泡系(vacuome)和线粒体(mitochondria)的活体染色法 315
实验四、高尔基体(Golgibody)和线粒体(mitochondria)的观察 319
实验五、Feulgen反应 321
实验六、Brachet反应 326
实验七、过碘酸雪夫反应(PAS)显示糖元和其他多糖物质 330
实验八、碱性磷酸酶显示法(根据Gomori) 335
实验九、酸性磷酸酶显示法(Gomori氏1950) 336
实验十、过氧化物酶(Peroxidase)显示法(根据McTunKin 1922) 338
实验十一、快绿染色法显示细胞内碱性蛋白及酸性蛋白 340
实验十二、细胞放射自显影 341
实验十三、染色体标本制作技术 345
实验十四、细胞的无丝分裂(amitosis)和有丝分裂(mitosis)的观察 354
实验十五、细胞减数分裂(meiosis)和染色体的形态观察 356
实验十六、生物样品的超薄切片法 362
实验十七、参观电子显微镜 368
实验十八、活细胞和细胞组分的分离与纯化 372
实验十九、动物细胞线粒体的分离 374
实验二十、同功酶垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 377
附录：某些酶的同功酶显色方法 384
参考文献 386