目 录 1
前言 1
绪论 3
实验方法六 由携带Tn10的菌株选择Tets突变体 （7 4
第一部分实 验 8
实验一插入Tn10的营养缺陷型的分离 8
实验二特殊基因附近Tn10插入突变体的分离 15
实验三Tn10引起的缺失突变 21
实验四局部诱变 26
离和鉴定 31
实验五通过羟胺形成的λ噬菌体点突变体的分 31
实验六λαmp缺失突变体的分离 34
实验七缺失定位 36
实验八通过互补作用选择λgt—his克隆 39
实验九噬菌斑杂交 44
实验十凝胶杂交 48
实验十一DNA的电子显微镜观察 50
实验十二从λ载体到质粒载体的次级克隆 52
实验十三Tn10介导的F′ts lac+插入 54
二、噬菌体划线分离 57
第二部分实验方法 57
一、寄主细胞 57
实验方法一噬菌体的噬菌斑纯化 57
三、挑选噬菌斑 58
四、噬菌体的滴度测定 58
实验方法二噬菌体原液的制备 61
一、寄主细胞 61
二、铺平板的步骤 61
三、平板收集 61
实验方法三制备P22转导噬菌体的快速方法 64
一、标准杂交 65
实验方法四噬菌体的纯化 66
一、CsC1区域密度梯度离心 66
二、平衡梯度离心 67
实验方法五Tn 10转位 69
一、从NK337菌株产生缺陷性转导噬菌体 69
二、加噬菌体尾部到P22头部 70
三、转位转导 71
因的λ噬菌体 76
实验方法七红色平板用于试验具有β-内酰胺酶功能基 76
实验方法八羟胺诱变 78
一、噬菌体或克隆基因（如β-内酰胺酶基因）中突变体的 78
分离 78
二、通过并发转导进行局部诱变 79
实验方法九λ缺失突变体的选择 82
实验方法十噬菌体的重组和体内互补试验 85
二、噬菌体生长的互补试验 85
三、突变噬菌体（λ或P22）互补作用的点滴试验 86
实验方法十一 λ噬菌体DNA的提取 90
一、甲酰胺法 90
二、λDNA的快速分离 92
三、用可被温度诱导的S am 7溶源菌制备λDNA 95
四、λDNA的解链 96
一、大量E、coli质粒DNA的分离 98
实验方法十二质粒DNA和细菌DNA的分离 98
二、少量质粒DNA和细菌DNA的分离 101
（一）从菌落或液体培养物中快速分离质粒DNA和（或） 101
细菌DNA 101
（二）从10毫升培养物中快速分离质粒DNA 103
实验方法十三从DNA氯化铯溶液中除去溴化乙锭 105
一、DNA切割 107
二、以T4DNA连接酶进行共价连接 107
实验方法十四λgt杂种的组建 107
实验方法十五体外包装λDNA为病毒颗粒 110
一、包装反应 110
二、诱导过的包装细胞的制备 110
实验方法十六λDNA的转染 113
一、细胞培养 113
二、细胞制备 113
三、DNA感染 113
四、细胞保藏 114
体中 116
实验方法十七将DNA片段次级克隆到E、coli质粒载 116
实验方法十八质粒DNA的转化 118
实验方法十九E、coli中杂种噬菌体的互补作用 120
一、由杂种库进行裂解选择 120
二、杂种库中双溶源菌的选择 121
实验方法二十琼脂糖凝胶电泳 125
一、琼脂糖凝胶 125
二、琼脂糖凝胶中DNA的染色 129
三、含有核酸的凝胶的照相 130
四、乙二醛凝胶 131
实验方法二十一 DNA转移到硝酸纤维素或重氮 134
滤膜上 134
一、从琼脂糖凝胶上转移 134
二、从λ噬菌体的噬菌斑上转移 136
三、从细菌菌落上转移 139
实验方法二十二缺口转译α-32P标记DNA 141
一、反应 141
三、脱氧核糖核酸酶 142
二、脱氧核苷三磷酸（dNTP） 142
四、32P参入DNA的检测……………………………………（142 ） 143
五、标记DNA的回收 143
六、附注 144
实验方法二十三 与固体支持物上的DNA或RNA 145
的杂交 145
实验方法二十四 固体支持物上32P的放射自显影 149
实验方法二十五从琼脂糖凝胶中回收DNA 150
一、玻璃纤维过滤法 150
三、将DNA电泳洗脱至羟基磷灰石中 152
二、KI平衡密度梯度离心法 152
实验方法二十六 用溴化乙锭快速测定DNA 154
的浓度 154
一、琼脂糖平板法 154
二、塑料膜－环法 154
实验方法二十七DNA的电子显微镜观察 156
一、水样法 156
二、甲酰胺法 157
二、异源双链的电镜观察 159
实验方法二十八形成异源双链的一般方法 159
一、异源双链的形成 159
实验方法二十九 由λcI 857Sam 7溶源菌制备不同组 161
分的酶 161
一、一般程序 161
二、从E、coli 594裂解液中纯化DNA聚合酶Ⅰ 162
三、从E、colill50裂解液中纯化T4DNA连接酶 164
第三部分附 录 166
附录一培养基、药物浓度和补充营养物 166
一、培养基 166
二、药物浓度 171
三、补充营养物 174
附录二营养缺陷型的鉴别（生长谱测定） 175
附录三细菌、噬菌体和DNA的保藏 177
一、细菌和噬菌体的保藏方法 177
二、细菌和噬菌体保藏的操作步骤 177
三、DNA的保存 178
一、缓冲液 181
附录四缓冲液和溶液浓度 181
二、溶液浓度 183
附录五透析袋的制备 185
附录六度量衡 186
一、微升体积的测量 186
二、DNA的解链温度（Tm） 187
三、离心澄清时间 188
四、单位 189
二、限制性核酸内切酶的性质 190
附录七限制性核酸内切酶的切割 190
一、方法 190
附录八λ载体的容量 194
附录九限制性图谱 195
一、λ图谱和λ载体 195
二、pBR322图谱 206
附录十组氨酸缺失图 208
附录十一栅格式样 209
附录十二菌株目录 211