目 录 1
前 言 1
1 分子生物学基础 1
2 分子生物学家的实验方法 5
3 使用本书的一般准备、步骤及注意事项 11
§3.1如何使用本书 11
§3.2安全注意事项 15
§3.3分子生物学研究所需要的设备 16
4 克隆载体与细菌细胞 20
§4.1 pBR322 20
§4.2 M13 22
§4.3 pUC 25
§4.5 λgt11 27
§4.4 λgt10 27
§4.6 EMBL3和EMBL4 29
§4.7 Charon28 30
§4.8细菌菌株 32
5 真核细胞DNA的制备 33
§5.1 DNA的快速制备 33
§5.2真核细胞DNA的制备——一般方法 35
§5.3培养细胞和组织的DNA制备 37
§5.4限制性核酸内切酶（REs）及其应用 41
§5.5琼脂糖凝胶电泳 48
§5.6 Southern印迹 51
6 用标记的合成探针探测核酸 55
§6.1制备合成DNA探针——总论 55
§6.2合成探针的末端标记 59
§6.3用合成的32P末端标记探针进行杂交 61
§7.1 缺口转译 66
7 用质粒源性探针探测核酸 66
§7.2 DNA杂交（Southern印迹杂交） 69
8 质粒DNA的制备 73
§8.1细菌的转化 73
§8.2质粒DNA制备：三硝基甲苯—溶菌酶 76
（Triton—Lysozyme）法 76
§8.3大规模碱裂解法：质粒纯化 82
§8.4质粒“微量制备”法 85
9DNA内切酶片段的制备 88
§9.1微型凝胶（Minigels） 88
§9.2酶切后DNA片段的分析 90
——琼脂糖凝胶电泳 90
§9.3 电洗脱 93
§9.4 DNA限制性片段的聚丙烯酰胺凝胶电泳 96
§10.1 DNA的精胺纯化法 100
10 DNA的纯化 100
§10.2 DNA的玻璃粉洗脱 102
§10.3 DNA的纯化：其它方法 104
11 真核细胞RNA的制备和分析 108
§11.1用喹尼丁异硫氰酸盐制备细胞总RNA 108
§11.2微量RNA制备法 114
§11.3用Oligo（dT）纤维素柱制备Poly（A+）RNA 116
§11.4福尔吗啉凝胶电泳分离RNA和Northern印迹分析 120
§11.5用标记的探针“打点”杂交检测DNA或RNA 124
§11.6 RNA杂交时一般注意事项 127
§11.7体外转录克隆到质粒中的DNA插入片段制备RNA探针 128
12 噬菌体克隆DNA的制备 133
§12.1噬菌体的扩增与制备 133
§12.2噬菌体DNA的大量制备与提纯 136
13 从真核细胞基因组中克隆DNA 142
§13.1概述 142
§13.2 DNA制备： MboI部分消化法 144
§13.3基因克隆的噬菌体载体的制备 148
§13.4连接基因组DNA和噬菌体的臂、包装、构建基因文库 153
§13.5基因文库的滴度测定和平皿试验 155
§13.6用放射性标记的探针筛选基因文库 158
§13.7基因文库扩增 163
14 用λgt10和λgt11克隆cDNA 166
§14.1制备cDNA克隆载体——λgt10和λgt11 166
§14.2从真核细胞mRNA制备cDNA插入片段 172
§14.3λgt10或λgt11臂的连接、包装与cDNA 181
文库的构建 181
§14.4包装后的重组λgt10和λgt11的平皿接种 183
与筛选 183
§14.5 λgt10和gt11cDNA克隆DNA的制备 188
15 用质粒载体进行亚克隆 192
§15.1用质粒载体进行亚克隆：总则 192
质粒的制备 193
§15.3 pBR322集落杂交 199
§15.4用pUC质粒载体进行亚克隆 201
16 M13克隆与序列分析 204
§16.1 M13克隆及序列分析：概况 204
§16.2用内切酶制备克隆插入片段 210
§16.3用BAL31外切核酸酶连续删节法制备M13克 214
隆插入片段 214
§16.4 M13载体制备及载体与插入片段的连接 218
§16.5用M13转化大肠杆菌JM103 222
§16.6用放射性探针筛选M13克隆挑选插入片段作序列分析 224
§16.7制备M13单链DNA用于序列分析 226
§16.8 M13克隆的单道（Sinle-lane）筛选 228
§16.9聚丙烯酰胺序列分析凝胶的制备 231
§16.10 M13克隆序列分析 235
17 克隆DNA的进一步定性 241
§17.1 S1核酸酶保护试验 241
18 哺乳动物体外培养细胞的转染试验 251
§18.1用纯化质粒进行悬浮细胞和贴壁细胞转染的磷酸钙沉淀法 251
§18.2 DEAE葡聚糖介导的哺乳动物悬浮细胞和贴壁细胞的转染试验 255
§18.3电导入（Electroporation） 257
§18.4转染后哺乳动物细胞的选择——G418选择方法 260
§18.5氯霉素乙酰转移酶试验（CAT试验） 262
19 蛋白质的分析方法 266
§19.1体外翻译和免疫沉淀 266
§19.2聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 270
§19.3 Western印迹分析法 275
§19.4蛋白质和RNA凝胶的银染色 278
20 一般的方法 282
§20.1 DNA和RNA的抽提和沉淀 282
§20.2塑料袋封口 285
§20.3光密度分析测量 287
§20.4凝胶或放射自显影的照相 288
§20.5放射自显影术 289
§20.6细菌生长平板的制作 291
§20.7噬菌体的滴度测定与铺板 294
21 特殊的方法 296
§21.1转基因小鼠制备 296
§21.2单克隆抗体生产：杂交瘤融合 304
§21.3标记探针与组织切片的原位杂交 311
§21.4克隆至酵母菌 316
附录1． 母液 319
§15.2插入片断的亚克隆与连接中的pBR 322
2．酶类 326
3． 提供试剂和仪器的主要厂商 327