第一节 实验误差的概念 1
第二节 实验误差的种类、产生原因及其纠正办法 1
一、系统误差 1
(一)特征 1
第一章 临床化学定量分析中的实验误差 1
(二)来源 2
(三)表现形式 6
(一)来源 7
(二)特征 7
二、随机误差 7
(四)纠正方法 7
(三)纠正方法 8
(四)抽样误差 8
三、过失误差(责任误差) 8
(一)来源 8
(二)危害 8
(三)纠正方法 8
二、标准偏差 9
一、平均误差 9
第三节 实验误差的相互转化 9
第四节 实验误差的表示方法 9
三、绝对误差(偏差) 10
四、相对误差(偏差) 10
五、变异系数 11
六、总误差和各步骤误差的估计 11
第五节 实验误差的评价指标 12
一、精密度 12
(一)定义 12
(二)不精密度 12
(三)连续测定的精密度 12
(四)重复性精密度 13
(五)再现性精密度 14
二、正确度 15
三、准确度 15
三、离群值的统计检验 18
二、处理离群值的一般原则 18
第六节 离群值的处理——过失误差的判断 18
一、离群值的概念 18
(一)检验离群值的理论依据 19
(二)离群值的检验方法 19
第二章 怎样选择和评价临床化学实验方法 22
第一节 方法选择与评价的目的意义 22
第二节 临床化学分析方法的分级及命名 22
一、决定性方法 23
二、参考方法 23
三、常规方法或现场方法 24
第三节 实验方法分析性能的评价 26
一、实用性方法的选择 26
(一)方法选择的原则 26
(二)方法选择的具体步骤 26
二、实用性方法的评价试验 27
(一)精密度的估计 27
(二)准确度和特异性的评价 28
(三)检测能力的测定 45
三、可接受性的判断 47
(一)性能标准 47
(二)性能标准的确定 47
(三)性能标准的判断 51
四、评价实验的书面报告 61
五、评价后实验和方法的正式使用 61
(一)评价后实验 61
(二)正式交付使用前的准备工作 61
第三章 实验室基础工作的质量保证 63
第一节 实验用水的质量要求 63
一、试剂级纯水的等级标准 63
二、试剂级纯水的制备和用途 65
三、试剂级纯水的贮存、运输和使用 65
四、试剂级纯水的纯度检查 65
(二)进口试剂规格 66
(一)国产化学试剂的规格 66
一、化学试剂 66
第二节 试剂及试剂配制 66
(三)特殊规格的试剂 68
(四)选用试剂的原则 68
(五)试剂的恒重和纯化 68
(六)试剂的保管 68
二、试剂的配制 68
(一)试剂配制中的浓度表示方法 68
(二)配制方法 71
(三)标准酸碱溶液的配制与标定 72
第三节 试剂盒及其质量的用户评估 73
一、检查包装是否完整 74
(一)外包装 74
(二)内包装 74
(三)说明书 74
(四)线性范围的测定 75
(三)干扰物试验 75
(二)精密度的检验 75
(一)准确度的测定 75
三、对试剂盒所装试剂性能特征的评估 75
二、对试剂盒所装试剂质量的初步评估 75
(五)稳定性试验 76
第四节 标准物质 76
一、标准物质的基本概念 76
二、标准物质的分类 76
(一)按标准物质的性质和用途分类 76
(二)按用户类型分类 77
三、临床化学中的标准物质 77
(一)临床化学中标准物质的分级 77
(二)临床化学中标准物质应具备的条件 77
(三)确定示值的途径 78
(四)临床化学常用的标准物质 78
二、常用量器的允差标准 81
(四)量器的级别 81
(三)完全流出式与不完全流出式 81
(一)标准温度与标称容量 81
一、与量器有关的几个概念 81
第五节 常用量器的校正与正确使用 81
(二)量入式和量出式 81
三、量器校正 82
(一)基本方法 82
(二)容量瓶的校正 83
(三)滴定管的校正 83
(四)吸量管的校正 84
(五)微量吸管的校正 84
(六)取液器的校正和监测 85
四、常见量器的正确使用 85
(一)容量瓶 85
(二)量筒 85
(五)移液吸管 86
(六)取液器 86
(三)有分度吸量管 86
(四)奥氏吸管 86
第六节 常规仪器的检定与正确使用 87
一、分光光度计 87
(一)波长校正 87
(二)线性检查 89
(三)杂光检测 89
(四)比色杯的配套性检查 90
(七)正确使用 91
(五)稳定性的检定 91
(六)吸光度校正 91
二、分析天平 92
(一)天平的精度分级 92
(二)天平的正确使用 92
(三)天平的维护保养 93
(四)天平的检定 93
(二)准确度 94
(一)检出限和测定范围 94
第一节 血清总蛋白含量测定 94
一、微量凯氏定氮法 94
第四章 蛋白质测定 94
(三)精密度 95
(四)用作血清蛋白标准品定值方法的不准确性因素 95
二、双缩脲法 96
(一)试剂配方的选择与评价 96
(二)标化测定 98
(三)蛋白标准液的标化 99
(四)常规测定方法的标准化 100
(五)方法的可靠性 100
三、酚试剂法 105
(一)试剂组方的比较 105
(二)蛋白标准液 106
(三)标准工作曲线的制备 106
(四)方法的分析性能 107
四、紫外吸收法 108
第二节 血清白蛋白测定 109
一、溴甲酚绿法 109
(一)试剂标准化问题 109
(二)标准品的选择 113
(三)显色时间对测定值的影响 114
(四)影响测定准确性的其它因素 114
(五)与其它参比方法的对比 115
二、溴甲酚紫法 116
(一)BCP与血清白蛋白反应的特异性 116
(二)与其它参比方法的对照 118
(三)温度对呈色的影响 118
(四)准确度 118
(五)重复性 118
(六)干扰 118
三、乙醛酸法 119
第三节 血浆纤维蛋白原测定 119
(七)BCP与牛、猪血清的反应 119
一、亚硫酸钠盐析双缩脲比色法 121
二、凝块分离双缩脲比色法 122
三、热沉淀比浊法 122
(一)试剂(缓冲液)配方的选择 122
(二)方法的分析性能 122
四、硫酸铵—EDTA比浊法 124
(一)显浊液配方的选择 124
(二)方法的分析性能 125
五、考马斯亮兰微量比色测定法 126
(一)沉淀剂的选择 126
(二)方法性能 126
第四节 尿蛋白总量测定 127
一、尿蛋白总量测定方法的评价 127
(一)磺基水杨酸法 127
(三)钨酸法 128
(二)三氯醋酸法 128
(四)海胺1622法 129
(五)双缩脲比色法 129
(六)酚试剂比色法 129
(七)丹宁酸—氯化铁比色法 130
(八)丽春红蛋白结合法 130
(九)考马斯亮兰G—250法 130
(十)邻苯三酚红—钼酸盐法 132
(一)健康人及病理性尿蛋白组份的构成特征 133
(十一)半定量试纸法 133
二、尿蛋白总量测定标准物的选择应用 133
(二)不同组份标准品对测定结果的影响 135
(三)标准品的选择应用 135
第五节 脑脊液蛋白质总量测定 138
一、正常脑脊液蛋白组份的构成特征 138
二、常规方法的评价 139
(一)标本选择 141
一、血糖标本 141
(二)抗凝剂和血糖保护剂的选择 141
第一节 标本的选择、处理及保存 141
第五章 糖及其代谢产物测定 141
二、乳酸和丙酮酸测定标本 142
(一)测定乳酸的标本 142
(二)丙酮酸测定的标本 143
第二节 血浆葡萄糖测定 143
一、邻甲苯胺法 145
(一)测定方法的历史和现状 145
(二)实验条件探讨 145
(三)方法可靠性 147
二、葡萄糖氧化酶法 148
(一)测定方法的历史和现状 148
(二)关于Trinder反应 148
(三)GOD—POD法试剂盒的质量标准与评价 149
(四)国家卫生部推荐的GOD—POD法与Tirnder改良法的实验条件 151
(五)方法可靠性 151
(一)测定方法的历史和现状 152
三、己糖激酶法 152
(二)实验条件与试剂要求 153
(三)方法可靠性 154
第三节 乳酸和丙酮酸的酶法测定 155
一、乳酸的酶法测定 155
(一)分析方法的发展历史与现状 155
(二)酶比色法的反应原理与实验条件 156
(一)测定方法的历史与现状 158
二、丙酮酸的酶法分析 158
(三)方法可靠性 158
(二)方法可靠性 159
第六章 无机离子测定 161
第一节 钾钠离子测定 161
一、火焰原子发射光谱法 161
(一)钾钠原子的特征性发射光谱 161
(二)内标准法的优越性 161
(三)参考方法的主要技术要求 161
(二)方法分类 163
(一)钾、钠离子选择电极的结构与响应特性 163
二、离子选择电极电位测定法 163
三、对钾钠测定FAES法和ISE法的评价 164
(一)方法对比试验 164
(二)干扰因素 165
四、钾、钠的酶法测定 166
(一)钾的酶法测定 166
(二)钠的酶法测定 166
五、标本的采集和贮存 167
(一)仪器工作原理 168
第二节 氯测定 168
一、库仑滴定法 168
(二)技术关键 169
(三)方法分析性能 169
二、硫氰酸汞比色法 171
(一)试剂组成与反应条件 171
(二)方法分析性能 172
三、硝酸汞滴定法 172
(二)方法分析性能 174
(一)测定原理 174
四、离子选择电极法 174
五、酶法测定 174
第三节 钙的测定 175
一、分析方法现状 175
二、对总钙分析方法的评价 176
(一)原子吸收光谱法 176
(二)邻甲酚酞络合酮比色法 177
(三)甲基麝香草酚兰比色法 178
(四)络合滴定法 179
第四节 无机磷测定 180
一、分析方法现状 180
(一)还原法 180
(二)非还原法 182
(三)酶法 183
二、代表性分析方法的方法学评价 183
(一)硫酸亚铁铵法 183
(三)邻苯二胺法 184
(二)米吐尔直接显色法 184
(四)孔雀绿直接显色法 185
(五)结晶紫试剂法 186
(六)紫外法 186
(七)黄嘌呤氧化酶法 188
第五节 血清镁测定 189
一、中子活化同位素稀释法 189
二、原子吸收分光光谱法 189
三、甲基麝香草酚兰比色法 189
四、Calmagite染料比色法 190
五、钛黄比色法 191
六、HK—G6PDH偶联法 192
第六节 血清铁测定 193
一、不除蛋白的亚铁嗪法 195
二、除蛋白亚铁嗪法 195
第一节 概述 197
一、关于酶活性浓度测定的推荐方法 197
第七章 酶类测定 197
二、常用名词术语 198
(一)酶(催化)活性浓度 198
(二)活性单位 198
(三)“连续监测法”和“动态法” 198
(六)同工酶 199
(七)Km 199
(五)测定酶、指示酶、辅助酶 199
(四)最适条件 199
(八)反应初速度 200
(九)反应级数 200
三、反应温度 201
四、样品采集、贮存和高酶活性样品的稀释 201
(一)溶血 201
(二)抗凝剂 202
(三)酶的稳定性和贮存条件 202
(四)高酶活性血清样品的稀释 203
(一)测定方法的历史和现状 204
第二节 常用酶活性浓度测定 204
一、丙氨酸氨基转移酶 204
(二)连续监测法 205
(三)比色法 208
(四)标本 212
二、天冬氨酸氨基转移酶 212
(一)测定方法的历史和现状 212
(二)连续监测法 213
(三)比色法 215
(四)标本 215
三、碱性磷酸酶 215
(一)测定方法的历史和现状 216
(二)连续监测法 217
(三)磷酸苯二钠比色法 219
(四)标本 220
四、酸性磷酸酶 220
(一)测定方法的历史和现状 220
(二)连续监测法 221
(三)比色法 223
(四)标本 223
五、乳酸脱氢酶 224
(一)测定方法的历史和现状 224
(二)连续监测法 225
(三)比色法 227
(四)标本 227
六、γ—谷氨酰(基)转移酶 227
(一)测定方法的历史和现状 228
(二)连续监测法 228
(三)比色法 230
(四)标本 231
七、淀粉酶 231
(一)测定方法的历史和现状 231
(二)碘—淀粉比色法 233
(一)测定方法的历史和现状 234
八、肌酸激酶 234
(三)标本 234
(二)连续监测法 235
(三)肌酸比色法 236
(四)标本 236
第三节 同工酶测定 238
一、同工酶的概念 238
二、临床常用同工酶的分离测定方法 239
(一)电泳法 239
(二)色谱法 240
(三)免疫学法 240
(四)动力学法 241
三、临床常用同工酶的测定 241
(一)肌酸激酶同工酶 241
(二)乳酸脱氢酶同工酶 243
第一节 血清总胆固醇测定 245
一、测定方法的历史和现状 245
第八章 血脂、脂蛋白和载脂蛋白测定 245
二、方法分级 246
(一)决定性方法 246
(二)参考方法 246
(三)常规方法 247
三、传统的强酸试剂显色法 247
(一)基本显色反应的评价 247
(三)修改的LRC法的评价 249
(二)测定方法的分类 249
四、酶法 250
(一)酶法测定胆固醇的反应步骤 251
(二)工具酶的来源和特性 251
(三)测定方法的分类 251
(四)应用国产酶试剂分析法 252
五、样品采集、贮存及稳定性 255
第二节 血清甘油三酯测定 256
一、测定方法的历史和现状 256
(二)化学法的基本步骤 257
(一)化学测定法的常用方法 257
二、化学测定法 257
(三)异丙醇抽提—乙酰丙酮显色法 258
三、酶法 260
(一)基本反应 260
(二)干扰因素 262
(三)国内常规酶法的评价 264
四、标本采集和保存 265
第三节 血清脂蛋白分析 266
一、分析方法的现状 267
二、血清脂蛋白琼脂糖电泳 268
(一)脂蛋白的染色 269
(二)电泳条件 269
(三)结果判断方式 269
(四)标本 269
(一)分析方法的现状 270
(二)HDL的选择性沉淀分离 270
第四节 高密度脂蛋白及其亚组份胆固醇测定 270
一、高密度脂蛋白胆固醇测定 270
(三)关于胆固醇测定 272
二、HDL亚组份胆固醇测定 272
(一)分析方法的现状 272
(二)聚乙二醇20000沉淀法 272
第五节 血清低密度脂蛋白胆固醇测定 273
一、分析方法的现状 274
(三)沉淀LDL的实验条件 276
(五)方法的分析性能 276
(四)胆固醇测定方法 276
(一)基本原理 276
(二)试剂组方 276
二、PVS法 276
三、Friedewald计算法的评价 277
(一)建立F公式的依据 277
(二)Friedewald计算法存在的问题 277
(三)关于对F公式的修改意见 277
(四)对计算法实用性的倾向性结论 278
第六节 载脂蛋白测定 279
二、载脂蛋白免疫测定方法中存在的问题 280
(一)抗原问题 280
一、测定方法的现状 280
(二)抗体问题 281
(三)参考标准问题 282
三、各种载脂蛋白免疫测定法的优缺点 282
(一)单向免疫扩散法 282
(二)火箭电泳法 282
(三)放射免疫法 282
(四)酶联免疫测定法 283
(五)比浊测定法 283
四、临床常用免疫测定法的评价 283
(一)血清apoAI及B的免疫透射比浊法测定 283
(二)血清载脂蛋白AI及B的火箭电泳测定法 284
(三)载脂蛋白(a)的酶联免疫测定法 285
第一节 血清尿素测定 287
一、测定方法现状 287
第九章 非蛋白质氮类化合物测定 287
二、几种测定尿素常规方法的方法学评价 288
(一)二乙酰一肟法 288
(二)尿素酶Berthelot法 288
(三)酶偶联速率法 290
二、几种常用肌酐测定方法的评价 292
(一)碱性苦味酸比色法 292
一、分析方法现状 292
第二节 血清肌酐测定 292
(二)漂白土碱性苦味酸法 293
(三)速率法 294
(四)酶法 295
第三节 尿酸测定 296
一、尿酸酶紫外吸收法 297
(一)方法的发展历史与现状 297
(二)主要反应及测试条件 297
(三)分析性能的可靠性 297
(二)方法的可靠性 299
二、尿酸酶—POD偶联比色法 299
(一)测定方法的历史和现状 299
三、磷钨酸法 300
(一)测定方法的历史和现状 300
(二)方法的可靠性 300
第十章 肝功能试验 303
第一节 血清胆红素测定 303
一、改良J—G法 304
(一)测定方法的历史和现状 304
(二)试剂与方法的标准化 305
(三)方法的可靠性 310
二、胆红素氧化酶法 310
(一)测定方法的历史和现状 310
(二)方法的可靠性 311
(三)结合胆红素的酶法测定 311
(二)血氨的“真值”问题 313
(一)标本的采集与保存 313
一、概述 313
第二节 血氨测定 313
二、对常用血氨测定方法分析性能的评价 314
(一)直接显色法 314
(二)谷氨酸脱氢酶速率法 316
(三)离子交换法 316
(四)氨电极法 316
第一节 化学测定法 319
第十一章 激素及其代谢产物的测定 319
一、尿液香草基杏仁酸测定 320
(一)分析方法的现状 320
(二)对硝基苯胺法 321
二、尿液17—酮类固醇测定 322
(一)分析原理和方法现状 322
(二)参考方法和建议采用的方法 323
(三)对Zimmermann反应间二硝基苯法的评价 323
(二)分析性能的评价 324
(一)分析原理与方法现状 324
三、尿17—羟皮质类固醇测定 324
第二节 放射免疫测定法 325
一、放射免疫分析技术的发展与现状 325
二、竞争性结合分析法的基本原理 326
三、剂量反应曲线的数据处理 327
(一)对纵坐标参数的计算 327
(三)剂量反应曲线的拟合 328
四、RIA方法的主要性能指标 328
(二)半对数坐标绘图法 328
五、几种常用RIA分析方法的评价 329
(一)125Ⅰ标记T4放免测定 329
(二)人血清生长激素单克隆抗体RIA测定 329
(三)3H标记血浆醛固酮微量直接放免测定 329
(四)125Ⅰ标记cGMP放射免疫测定 330
(五)3H标记血浆血栓素B2放射免疫测定 330
第十二章 临床药物监测 332
第一节 概述 332
第二节 抗癫痫药物 333
二、实验条件的选择 334
(一)仪器配置 334
(二)分析柱 334
(三)样品预处理 334
(四)流动相组成和流速 334
(五)标准品及标准曲线 334
一、测定原理 334
(九)定量方法 335
(十)内标准物质的选择原则和来源 335
(七)进样量的确定 335
(八)量程与记录仪 335
(六)检测波长的确定 335
三、方法分析性能 336
第三节 三环类抗抑郁药 336
一、HPLC法分析TCAs的实验条件 337
二、HPLC法分析性能 338
(一)放射免疫分析法 339
第四节 环孢霉素 339
一、实验条件的选择 339
(二)HPLC法 341
二、方法可靠性 342
第五节 抗心律失常药 342
第六节 地高辛测定 344
第七节 氨基糖苷类抗菌素 345
第八节 茶碱 347
第十三章 尿蛋白组分PAGE定量检测法的方法学探讨 350
第一节 概述 350
一、方法的发展历史与应用现状 350
二、PAGE的优点和分类 350
三、SDS的作用 351
四、催化剂催化凝胶聚合的机理 352
五、凝胶配方中尿素的作用 352
第二节 适用于尿蛋白组分定量电泳分析的凝胶配方与聚合条件的控制 352
一、凝胶配方 352
二、凝胶溶液中单体浓度的选择 353
三、凝胶聚合条件的探讨 355
第三节 样品预处理及标志蛋白质的选择与使用 356
一、样品缓冲液 356
二、尿样品的预处理 357
三、标志蛋白质的选择和标准工作曲线的数据处理 357
第四节 电泳、染色及扫描定量 358
一、加样 358
(一)考马斯亮兰R250染色法 360
(二)铬银染色法 360
三、染色方法的选择与评价 360
二、电泳 360
(三)其它染色法 361
四、扫描的技术指标与两种染色法扫描一致性观察 361
第五节 为铬银染色SDS—PAGE方法临床应用所作的基础研究工作 363
一、健康人血清蛋白组份参考值的调查 363
二、健康人尿蛋白组份参考值的调查 363
三、诊断标准 364