第一章 实验神经解剖学——一般方法与实验室程序 1
一、引言 1
二、传导束追踪法 1
（一）方法的类型 1
（二）方法的选定 3
三、实际问题 4
（一）实验动物 4
（二）组织处理 9
四、分析 12
（一）材料的总量 12
（二）分析的方法 12
（三）正常材料 12
（四）制图与重建 13
五、神经解剖学实验室 14
（一）动物室与外科手术 14
（二）光学设备 14
（三）实验室的预防措施 15
六、附录 15
（一）制备冷冻切片的组织包埋 15
（二）用滑动切片机作冷冻切片 16
（三）染色法 17
第二章 选择性破坏中枢神经系统特定部位的方法 24
一、引言 24
二、立体定向技术 24
（一）理论基础 24
（二）立体定向图的绘制 25
（三）坐标的确定 26
三、非选择性损伤技术 26
（一）机械损伤 26
（二）注射非选择性毒素 27
（三）大脑血管系的改变 27
（四）放射性物质 27
（五）超声波 28
（六）温度损伤 28
（七）电解损伤 28
四、对电解损伤的评价 29
五、选择性损伤技术 32
（一）海人酸及谷氨酸衍生物 32
（二）神经毒素儿茶酚胺和吲哚胺衍生物 35
六、附录：立体定向图谱介绍 39
第三章 输送示踪物的方法 40
一、引言 40
二、加压注射法 40
（一）微量注射器注射法 41
（二）微管注射 41
三、离子透入注射法（或微电泳） 43
（一）一般注意事项 43
（二）细胞外注射 44
（三）细胞内注射 45
四、附录 48
（一）微电极技术的一般介绍 48
（二）微电极的制作与应用 49
（三）慢性微电极技术及其应用 51
第四章 溃变轴浆的银浸染法 55
一、引言 55
二、理论性探讨 57
（一）银浸染法的应用 57
（二）银浸染法的选择 58
三、实验应用的一些问题 58
（一）术后存活期 58
（二）固定与切片 59
四、当前几种银浸染法的一般特性 60
（一）Glees法 60
（二）Nauta-Laidlaw法 61
（三）Fink-Heimer法 63
（四）铜-银法 65
（五）Nauta-Laidlaw,Fink-Heimer及铜-银法的比较 69
（六）其它银浸染法 70
五、关于溃变纤维与终末溃变的说明 71
（一）轴索溃变 71
（二）终末溃变 73
六、其它溃变神经元现象 73
（一）细胞体与树突的溃变相 73
（二）间接的Waller溃变 75
（三）丘脑内的逆行性尘粒 75
七、镜检时判断错误的原因 75
（一）神经元的银沉积 76
（二）自发性、偶然性及感染性溃变 78
（三）Cammermeyer暗神经元 78
（四）神经胶质成分与结缔组织 78
（五）嗅球内的人工产物 79
八、优点与缺点 79
（一）优点 79
（二）缺点 80
九、附录 80
（一）Nauta-Laidlaw法 80
（二）Fink-Heimer法 81
（三）Ebbesson-Robinson法 83
（四）铜-银法 83
第五章 中枢神经系统内轴索联系的放射自显影示踪术 86
一、引言 86
二、方法的原理 86
三、方法学 87
（一）放射性示踪物的选择 87
（二）示踪物的脑内注射 91
（三）动物的存活期 92
（四）灌注和固定 94
（五）切片及装片 94
（六）切片涂布乳胶 96
（七）乳胶的曝光 97
（八）乳胶的显影和定影 98
（九）组织染色 98
四、资料分析 99
（一）标记通路的确定 99
（二）常见的人工产物 100
五、电镜放射自显影技术 102
六、优点和缺点 104
（一）优点 104
（二）缺点 105
七、附录 105
（一）猫脑的石蜡包埋程序 105
（二）暗室 105
（三）石蜡切片的焦油紫染色 105
（四）D-19b显影液 106
（五）F-5定影液 106
第六章 辣根过氧化物酶（HRP）——基本方法 107
一、引言 107
二、基本用法 107
三、HRP的结合与输送 108
（一）HRP的特性 108
（二）HRP的扩散 108
（三）HRP与神经元的结合 111
四、方法学 113
（一）麻醉剂的选择 113
（二）细胞外给药法 113
（三）存活时间 115
（四）固定和切片 116
（五）HRP的摄取和输送的增强 117
五、各种HRP法的一般特点 118
（一）DAB法 118
（二）o-D法 120
（三）BDHC法 123
（四）TMB法 123
六、结果和解释 124
（一）注射的部位 124
（二）细胞体的标记 125
（三）轴索和终末标记 128
（四）错误的原因 130
七、优点和缺点 131
（一）优点 131
（二）缺点 131
八、附录 132
（一）二氨基联苯胺（DAB）法（LaVail） 132
（二）联苯胺二盐酸（BDHC）法I（J.S.de Olmos） 133
（三）联苯胺二盐酸（BDHC）法II（M-M Mesulam） 135
（四）四甲基联苯胺（TMB）法I（J.S.de Olmos） 137
（五）四甲基联苯胺（TMB）法II（M-M Mesulam） 139
第七章 辣根过氧化物酶——神经元的细胞内染色 143
一、引言 143
二、方法 144
（一）准备步骤 144
（二）记录与注射 144
（三）动物灌注 146
（四）组织学处理 146
（五）资料分析 147
三、技术的应用 148
四、优点和缺点 149
（一）优点 149
（二）缺点 150
五、附录 150
（一）试剂配制 150
（二）用于逆行Golgi样标记神经元群的另一法 151
第八章 辣根过氧化物酶和荧光物质与其它方法结合的应用 153
一、引言 153
二、侧支投射的追踪 153
（一）HRP逆行双标记的各种结合法 154
（二）荧光素的双标记法 160
（三）HRP的侧支输送 161
三、HRP和顺行追踪法 161
四、HRP和递质类的组织化学法 162
五、HRP和2-脱氧葡糖（2-DG）法 162
六、附录 163
（一）HRP与（3H）-BSA逆行双标记法（Oswald Steward） 163
（二）HRP与（3H）-apo-HRP逆行双标记法（Aldo Rustioni） 165
（三）荧光物质逆行双标记法（H.G.J.M.Kuypers） 166
（四）HRP和AChE同时显示法 168
（五）2-DG和HRP组织化学法（Oswald Steward） 169
第九章Golgi法 171
一、引言 171
二、快速Golgi法 171
（一）准备步骤 172
（二）固定 172
（三）银浸染法 173
（四）组织切片 173
（五）脱水与透明 174
（六）装片 174
（七）灌注固定 175
三、资料分析 175
（一）细胞定位 175
（二）细胞突 176
四、资料表示法 178
（一）Golgi法材料的绘图 178
（二）照像 179
五、Golgi法的几种改良法 179
（一）双重及三重浸染法 179
（二）Golgi-Kopsch法 180
（三）Golgi-Cox法 180
（四）适于胚胎性组织的Golgi法 180
六、优点与缺点 180
（一）优点 180
（二）缺点 181
七、附录 181
（一）灌注的技术方法 181
（二）快速Golgi法组织块的火棉胶包埋法 181
（三）甲醛固定材料的快速Golgi法 183
（四）快速Golgi法切片的稳定与复染 183
（五）Golgi-Kopsch改良法 183
（六）Golgi-Cox法 184
（七）Ramón-Moliner法 185
（八）胚胎组织Golgi法 186
第十章 神经组织的电子显微镜技术制备 187
一、引言 187
二、固定与包埋的基本过程 187
（一）麻醉 187
（二）手术步骤 188
（三）解剖与后固定 188
（四）脱水与包埋 189
三、各种处理法 189
（一）人工呼吸 190
（二）O2-CO2通气 190
（三）灌注的压力 190
（四）灌注液的温度 190
（五）血管冲洗液 191
（六）初级固定剂的组成 191
（七）双重灌注 191
（八）缓冲液冲洗与后固定 192
（九）醋酸双氧铀的稳定作用 192
（十）磷酸盐沉淀 192
（十一）用于髓磷脂的处理法 193
四、对光镜镜检结果的评价 193
五、超薄切片与染色 194
六、附录 195
（一）血管冲洗液 195
（二）0.4mol/L磷酸盐缓冲储备液 195
（三）第一灌注固定剂 195
（四）第二灌注固定剂 196
（五）磷酸盐缓冲淋洗液 196
（六）加倍锇处理缓冲液 197
（七）4%OsO4储备液 197
（八）OsO4后固定剂 197
（九）亚铁氰化锇后固定剂 197
（十）醋酸缓冲洗液 197
（十一）醋酸双氧铀组织块处理液 197
（十二）环氧树脂包埋混合剂 198
（十三）半薄切片的装片与染色 198
（十四）超薄切片染色 199
第十一章 电镜镜检——正常与溃变神经成分电镜镜检的鉴定和研究 200
一、引言 200
二、光镜与电镜镜检之间的联系关系 200
三、电镜镜检的实用指标 201
（一）切片的选择 201
（二）局部解剖 202
（三）低倍率放大的检查（1,000-4,000X） 203
（四）中倍率放大的检查（5,000-12,000X） 204
（五）高倍率放大的检查（15,000-25,000X） 205
四、神经成分的鉴定 205
（一）轴突 205
（二）树突 205
（三）轴突样树突 205
五、溃变神经纤维的超微结构 207
（一）溃变的形式 207
（二）小结 212
六、形态测定法 213
（一）计量法 213
（二）取样 213
第十二章Golgi法标本电镜镜检的传导通路追踪法 215
一、引言 215
（一）目的和可能性 215
（二）技术探讨 216
二、技术方法的一般描述 218
（一）固定 218
（二）锇酸及铬盐处理 219
（三）银浸染法 221
（四）初级厚切片 221
（五）减浸染法 221
（六）初级切片的包埋与再装片 223
（七）组织包埋于树脂的厚切片 223
（八）超薄切片法 223
三、优点和缺点 224
（一）优点 225
（二）缺点 225
四、结论性短评和问题探讨 225
五、附录 226
（一）锇与铬处理 226
（二）甘油浸组织块 227
（三）浸染组织的厚切片法 227
（四）金调色 228
（五）不用金的光化学（UV）法 229
（六）用金的光化学法 230
（七）“间断”Golgi浸银法 231
（八）初级切片的平铺包埋 231
（九）切树脂厚切片 232
（十）切片重装法 233
（十一）超薄切片法的监控 233
（十二）铬酸银浸染的保持措施 234
第十三章 荧光组织化学法——神经递质组织化学 235
一、引言 235
二、荧光组织化学法的化学基础 237
（一）介绍 237
（二）Falck-Hillarp法（甲醛缩合法） 237
（三）乙醛酸（GA）法 238
三、设备 240
四、用甲醛或GA缩合法 240
（一）介绍 240
（二）Falck-Hillarp法 240
（三）乙醛酸（GA）法 248
五、荧光组织化学法的选择 253
六、荧光组织化学法的优缺点 254
（一）优点 254
（二）缺点 254
（三）结束语 254
七、附录 257
（一）荧光显微镜镜检与荧光显微镜 257
（二）冷冻干燥器 258
（三）振动切片机 258
（四）恒冷切片箱 259
（五）铝-甲醛恒冷切片箱切片法显示生物单胺递质（Lorén et al.,1980） 259
第十四章 免疫细胞化学法 261
一、引言 261
（一）免疫学基础 261
（二）理论基础 261
二、免疫细胞化学技术的类型 261
（一）直接法 262
（二）间接法 263
（三）小结 264
三、过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）技术 265
（一）固定 265
（二）切片 265
（三）免疫标记 265
（四）光镜镜检 266
（五）电镜镜检 266
四、PAP技术改良法 267
（一）固定 267
（二）切片 267
（三）试剂 268
五、PAP技术的特异性 268
六、PAP技术在显示儿茶酚胺能神经元中的应用 269
（一）光镜下的传导束 270
（二）酪氨酸羟化酶的超微结构定位 271
七、PAP技术在神经肽类定位中的应用 272
（一）光镜镜检 273
（二）在轴索终末中肽的超微结构定位 274
（三）肽能轴索与儿茶酚胺能神经元之间的突触相互作用 275
八、PAP技术的优、缺点 276
（一）优点 276
（二）缺点 276
九、结论 277
十、附录 277
免疫金-银染色法（IGSS） 277
第十五章 2-脱氧葡糖（2-DG）法 279
一、引言 279
二、基本原理 280
三、一般应用 285
四、〔14C〕-2DG方法学 286
（一）脱氧葡糖的注射与测定葡糖代谢率的方法 286
（二）固定与切片 287
（三）放射自显影照片的制备 289
五、〔3H〕-2DG方法学 291
六、数据资料分析 291
（一）定性分析 291
（二）定量分析 292
七、优点与缺点 293
（一）优点 293
（二）缺点 294
八、附录 294
（一）固定剂 294
（二）2-DG切片硫堇染色 294
（三）〔14C〕-2-DG切片染色法 295
参考文献 296
索引 335