重要说明 1
目 录 1
缩写 2
第一章RNA的凝胶电泳 Don Grierson 3
1．引言 3
2．管状聚丙烯酰胺凝胶电泳 4
2.1设备 4
2.2制备凝胶 4
5．分子量的测定 （1 5
2.3电泳设备的组装 6
2.4样品制备和加样 6
2.5凝胶的电泳 7
2.6凝胶扫描 8
2.7凝胶切片 8
2.8凝胶切片放射性的测定 9
2.9 RNA的洗脱和回收 10
3．管状凝胶法的若干改进 11
3.1电泳前DNA的去除 11
3.2加样前RNA的变性 11
3.3非控制温度下的电泳 11
3.4梯度凝胶 12
3.5可溶性聚丙烯酰胺凝胶 12
4.1甲酰胺凝胶 13
4．变性凝胶 13
3.7其他电泳缓冲液 13
3.6琼脂糖－丙烯酰胺复合凝胶 13
4.2尿素凝胶 14
4.3羟甲基汞凝胶 14
5.1非变性凝胶 15
5.2变性凝胶 16
6．板状聚丙烯酰胺凝胶电泳 16
6.1装置 16
6.2凝胶配方 17
6.3灌胶 19
6.5板状凝胶中RNA的检测和回收 20
6.4电泳 20
6.6 RNA转移至重氮苄氧甲基纸上的杂交分析 23
7．聚丙烯酰胺凝胶电泳存在的问题及其解决办法 25
8．组蛋白信使RNA的纯化：实例研究 28
参考文献 29
第二章DNA的凝胶电泳 Paul G.Sealey和Ed M.Southern 31
1．引言 31
2．主要技术及其应用 31
2.1装置 31
2.2非变性凝胶缓冲液 33
2.3变性凝胶缓冲液 34
2.4凝胶制备 34
2.5样品制备和加样 37
2.6凝胶电泳标准DNA的大小 38
2.7电泳条件 38
2.8电泳后的凝胶分析 39
2.9从琼脂糖凝胶回收DNA片段 41
2.10用杂交法分析DNA片段 43
3．DNA的大规模制备性凝胶电泳 46
3.1环形制备装置 46
1.2仪器 （1 50
3.2线形制备装置 52
3.3分级分离的实例 55
4．致谢 58
参考文献 58
第三章 核酸双向凝胶电泳 Rupert De Wachter和Walter Fiers 60
1．RNA双向凝胶电泳导论 60
1.1影响RNA在聚丙烯酰胺凝胶中电泳迁移率的因素 60
1.2双向凝胶系统的主要类型 61
2．RNA双向电泳分离的仪器和实验程序 63
2.1第一向电泳分离 63
2.2第二向电泳分离 65
2.3程序的变动与修正 66
2.4温度控制 67
2.5放射自显影 67
2.8从凝胶中回收RNA 68
2.7切片放射性的测定 68
2.6无放射性RNA的检测 68
3．双向电泳分离RNA的实例 69
3.1寡核苷酸的分离 69
3.2 RNA片段的分离 73
3.3小分子RNA的分离 75
3.4mRNA的分离 76
4．DNA双向凝胶电泳概述 79
5．限制片段的常规凝胶电泳分离DNA 79
5.1电泳分离的基础 79
5.2第一向凝胶电泳分离 79
5.3第二向凝胶电泳分离 80
5.4技术应用实例：病毒DNA限制酶切片段的分离 81
6.1分离的基础 82
6．变性梯度凝胶分离DNA限制酶切片段 82
6.2装置 82
6.3第一向分离 83
6.4第二向分离 84
6.5凝胶的染色和放射自显影 85
6.6技术应用实例：细菌DNA限制酶切片段的分离 85
7．致谢 85
参考文献 86
第四章DNA序列分析 R.Wayne Davies 87
1．引言 87
2.1仪器和材料 89
2．用链终止法进行DNA序列分析 89
2.2微量液体的操作 90
2.4 DNA片段的分离 91
2.3引物片段的特征 91
2.5单链DNA模板的制备 96
2.6引物和模板的退火 97
2.7引物DNA的合成反应 98
2.8核糖取代反应：除去引物片段的另一种方法 101
2.9链终止法测定DNA序列的应用 102
3．DNA序列分析用聚丙烯酰胺凝胶的制备 104
3.1仪器 104
3.4贮备液 106
3.3制备凝胶模型 106
3.2材料 106
3.6制备电泳凝胶 107
3.5灌胶 107
3.7加样 108
3.8电泳 108
3.9制备放射自显影凝胶 108
3.10放射自显影 109
4．链终止序列测定中放射自显影图谱的阅读和释意 109
4.1凝胶放射自显影图谱释义中的一般性问题 110
5．M13序列分析系统 111
5.1噬菌体M13的特征 111
5.2 M13克隆系统 112
5.3 M13克隆系统的应用 113
5.4用M13系统进行链终止序列分析 116
6．DNA序列的化学分析法 119
6.1主要方法步骤 119
6.2仪器和材料 120
6.3 DNA片段的用量和纯化 121
6.4 DNA片段的末端标记 121
6.5标记一端的DNA片段的分离 125
6.6碱基特异性的裂解反应 126
7．计算机的使用 129
参考文献 129
6.8 Maxam-Gilbert序列分析凝胶的放射自显影图谱的阅读与释意 129
6.7反应产物的电泳 129
第五章RNA序列分析 James M.D′Alessio 131
1．引言 131
2．用于序列分析的RNA分离 132
3．RNA微克数量级的处理 132
3.1核糖核酸酶的预防 132
3.2反应容器 133
3.3 RNA的乙醇沉淀 133
4．序列分析用RNA的末端标记综述 133
4.1 5′末端标记 133
4.3制备性凝胶电泳 134
4.2 3′末端标记 134
5．序列分析所用末端标记RNA的制备 135
5.1除去帽子结构 135
5.2用〔γ-3 2P）ATP和T4多核苷酸激酶标记5′末端 136
5.3用〔5′-32P〕pCp和T4RNA连接酶标记3′末端 136
5.4聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化32P-RNA 137
5.5从聚丙烯酰胺凝胶中洗脱32P-RNA 138
6．序列分析前的RNA专一性裂解 139
6.1核糖核酸酶H的片段化战略…………………………………………………（139 ）6.2 RNA的位点专一性切割 139
7．RNA的碱基专一性切割：酶促序列分析 140
7.1概述 140
7.2 RNA酶法序列分析的步骤 141
8．RNA的碱基专一性切割：化学序列分析法 142
7.3 RNA的碱水解 142
8.1概述…………………………………………………………………………………（142 ）8.2 RNA化学序列分析的程序 143
9．RNA序列分析用凝胶 145
9.1主要考虑的因素 145
9.2薄层序列分析凝胶的灌胶 146
9.3序列分析凝胶的放射自显影 147
9.4放射自显影图谱的解读 147
参考文献 149
第六章 核蛋白的电泳 Graham H.Goodwin和Albert E.Dahlberg 150
1．核小体的电泳 150
1.1引言 150
1.3贮备液 151
1.5聚丙烯酰胺凝胶平板的制备 152
1.4样品的制备 152
1.6加样与电泳 153
1.7各种核小体带的检测 153
1.8从凝胶中提取核小体颗粒 154
1.9核小体中蛋白质和DNA的回收与分析 155
1.10可能出现的问题及其解决办法 156
1.11核小体的双向电泳 157
2.1引言 159
2.2仪器 159
2．核糖体和多核糖体的电泳 159
2.3贮备液 160
2.4样品制备 160
2.5琼脂糖－丙烯酰胺复合凝胶的制备 161
2.6加样与电泳 162
2.7凝胶染色 162
2.8双向凝胶电泳 162
2.9各种复合凝胶的应用 163
2.10可能出现的问题及其矫正措施 167
参考文献 168
附录 Ⅰ 核酸分子量的标准试剂 Stephen Minter和Paul Sealey 169
Ⅱ 供应电泳专用商品的厂商 173