实验须知 1
目 录 1
第一部分培养基的配制与灭菌 3
实验一培养基的配制与灭菌 3
一、实验目的 3
二、实验材料及仪器 3
三、实验内容 3
1．培养基的配制 3
2．玻璃器皿的洗刷和包装 7
3．灭菌法 8
四、报告要求 8
保藏 9
一、实验目的 9
第二部分微生物的纯种分离与保藏 9
实验二微生物的纯种分离与 9
五、思考题 9
二、实验材料及仪器 10
三、实验内容 10
1．土壤微生物的分离 10
2．用划线分离法进行细菌的 12
纯化 12
3．微生物菌种的冰箱保藏法 13
4．根据菌落及培养特征鉴别 13
微生物的类型 13
5．微生物的平板计数法 15
实验三病毒、细菌、放线菌形 16
第三部分微生物形态的观察 16
态的观察 16
五、思考题 16
四、报告要求 16
一、实验目的 17
二、实验材料及仪器 17
三、实验内容 17
1．病毒 17
（1）病毒的鸡胚培养及病斑 17
观察 17
（2）病毒形态的观察 18
2．细菌 18
（1）利用暗视野映光法观察 18
生活的变形杆菌的运动 18
（2）细菌细胞大小的测量 19
四、报告要求 21
（2）孢子形态的观察 21
（1）孢子丝形态的观察 21
3．放线菌 21
（3）细菌的形态和构造 21
五、思考题 22
实验四细菌染色技术 22
一、实验目的 22
二、实验材料及仪器 22
三、实验内容 22
1．细菌的简单染色法 22
2．革兰氏染色法（Hucker改 23
良法） 23
3．芽孢染色法（Conkin）改进 25
Wirtz的方法） 25
4．荚膜染色法（墨汁背景染色 25
法） 25
5．鞭毛染色法（按申云生氏法 26
略加改进） 26
五、思考题 27
四、报告要求 27
实验五酵母菌和霉菌形态的· 28
观察 28
一、实验目的 28
二、实验材料及仪器 28
三、实验内容 29
1．酵母菌的形态 29
2．霉菌的形态 29
四、报告要求 29
五、思考题 30
第四部分细菌的生理生化反应 30
实验六细菌的生理生化反应 30
一、实验目的 30
1．含碳化合物的分解和利用 31
（1）油脂水解试验 31
三、实验内容 31
二、实验材料 31
（2）淀粉水解试验 32
（3）糖类（醇或糖苷）发酵试 33
验 33
（4）乙酰甲基甲醇试验（V.P． 33
试验） 33
（5）甲基红试验（M.R．试 34
验） 34
2．含氮化合物的分解和利用 35
（1）明胶液化试验 35
（2）硝酸盐还原试验 35
（3）产氨试验 37
（4）硫化氢产生的试验 37
（5）吲？产生试验 38
（6）石蕊牛乳试验 39
四、报告要求 41
五、思考题 42
第五部分 环境条件对微生物生命活动的影响 42
实验七大肠杆菌生长曲线的 42
测定 42
一、实验目的 43
二、实验材料和仪器 43
三、实验内容 43
1．实验处理 43
2．实验步骤 43
（1）接种 43
（2）培养 43
（3）比浊 44
四、报告要求 44
五、思考题 44
二、实验材料及仪器 45
一、实验目的 45
实验八环境因素对微生物生 45
长发育的影响 45
三、实验内容 46
1．物理因素的影响 46
（1）紫外线对金黄色葡萄球 46
菌生长的影响 46
（2）氧对醋酪酸梭状芽孢杆 46
菌的影响 46
2．化学因素的影响 47
（1）pH值对金黄色葡萄球 47
菌生长的影响 47
（2）化学药剂对金黄色葡萄 48
球菌生长的影响 48
（2）痢疾杆菌714噬菌体对 49
菌的影响 49
痢疾杆菌的裂解作用 49
3．生物因素的影响 49
黄色葡萄球菌和枯草杆 49
（1）青霉菌对大肠杆菌、金 49
（3）抗原抗体的凝集反应 50
四、报告要求 51
五、思考题 52
实验九酵母菌的酒精发酵以 52
及影响发酵的条件 52
一、实验目的 52
二、实验材料及仪器 53
三、实验内容 53
1．培养基的配制及仪器的准 53
备 53
2．接种及发酵 54
3．结果观察 54
（1）酵母菌细胞的计数 55
（2）酒精蒸馏及酒精度的测 56
定 56
（3）甘油的定性分析法 57
四、报告要求 58
五、思考题 59
附录一显微镜油镜的使用方 60
法 60
一、显微镜的全部结构 60
二、显微镜的使用方法 60
1．显微镜的放置 60
2．调节光照 60
3．低倍镜观察 61
4．高倍镜观察 61
5．油镜观察 61
一、洗涤液配制法 62
6．镜检完毕后的工作 62
附录二玻璃器皿的清洁 62
二、各种玻璃器皿的洗涤 63
附录三灭菌技术 64
一、机械灭菌法 64
1．硅藻土过滤器（又称Berke- 64
feld或Mandler滤器） 64
2．蔡氏石棉板滤器（又称赛氏 64
滤器，即Seitz滤器） 64
3．玻璃滤器 65
二、化学灭菌法 66
三、物理灭菌法 66
1．干热灭菌 67
2．间歇灭菌 68
3．高压蒸汽灭菌 69
4．紫外线 72
附录四微生物的接种技术 72
一、斜面接种技术 73
二、液体接种 75
三、由液体培养基接种液体 75
培养基 75
四、穿刺接种 75
五、病毒的鸡胚接种 75
附录五实验用菌种一览表 77
一、细菌及放线菌 77
二、酵母菌 78
三、霉菌 79
四、其他 79
三、淀粉培养基（试验淀粉 80
基（葡萄糖蛋白胨培养基） 80
水解用） 80
一、糖发酵液体培养基 80
附录六实验用培养基配制法 80
二、M.R.-V.P．试验培养 80
四、油脂培养基 81
五、硝酸盐还原试验培养基 81
六、产氨试验培养基（蛋白 82
胨牛肉膏液体培养基） 82
七、产生硫化氢试验的培养 82
基 82
八、石蕊牛乳培养基 82
培养基 83
试剂） 83
一、甲基红试剂（M.R．试验 83
制法 83
附录七实验用记剂、溶液配 83
十四、玉米深层培养基 83
十一、肉膏蛋白胨琼脂培养 83
十三、豆芽汁葡萄糖（或蔗糖） 83
放线菌用） 83
十二、淀粉琼脂培养基（培养 83
基 83
十、肉膏蛋白胨液体培养基 83
九、明胶培养基 83
六、吲？试剂（Ehrlich试剂） 84
五、氨试剂（奈氏试剂） 84
菌形态用） 84
七、乳酸石炭酸溶液（观察霉 84
四、亚硝酸盐试剂 84
三、淀粉水解试验用碘液 84
（V.P．试剂） 84
二、乙酰甲基甲醇试验试剂 84
八、1％来苏尔溶液 85
九、5％石炭酸溶液 85
十、0.1％HgCl2溶液 85
十一、1％硫酸铜溶液 85
十二、正丁醇-醋酸-水溶液 85
（4:1:5） 85
十三、硝酸银丙酮溶液 85
十四、碱性酒精溶液（1％氢 85
氧化钠酒精溶液） 85
十五、7.5N氢氧化铵溶液 85
二、革兰氏染色染液 86
一、普通染色法常用染液 86
附录八实验用染液配制法 86
三、芽孢染色染液 87
四、齐氏（Ziehl）石炭酸复红 87
染液 87
五、鞭毛染色染液 87
附录九伯杰（Bergey）氏真细 88
菌目检索表（第七版） 88
一、真细菌目分科检索表 88
二、肠杆菌科检索表 89
三、小球菌科检索表 90
四、芽孢杆菌科检索表 91
五、埃希氏杆菌族检索表 91
六、埃希氏杆菌属分种检索表 91
附录十微生物学教学进度表 92
主要参考书目 93