第一章 病毒和立克次氏体病实验诊断的基本概念和方法 1
一、概述 1
二、原液的配制 2
三、实验诊断方法 7
1．显微镜检查 7
2．病毒分离 7
3．血清学试验 13
（一）补体结合试验 13
（二）血球凝集抑制试验 13
（三）中和试验 15
（四）凝集试验 15
（1）特异性凝集试验 15
（2）非特异性凝集试验 15
四、标本的收集和保存 17
1．采取标本的时间 18
2．标本的收集 18
3．运送 18
4．保存 18
五、滤器的使用和清洁 18
1．种类 18
2．清洁和灭菌 19
六、病毒的保存 20
1．低温冷冻保存 20
2．保存于50％甘油中 21
3．真空干燥保存 22
七、半数致死量的测定 25
1．意义 25
2．操作方法 25
3．确定LD50值的几种方法 27
4．LD50在中和试验中的应用 28
（一）固定血清、稀释病毒的方法 28
（二）固定病毒、稀释血清的方法 30
附录一 病毒实验室工作的安全规则 31
附录二 病毒立克次氏体检验室一般所需设备和用具 31
第二章 动物实验 35
一、概述 35
二、用途 36
三、动物的选择 37
四、实验动物的编号 38
五、实验动物的观察与照料 39
六、动物接种法 41
1．鼻内接种 41
2．皮内接种 42
3．皮下接种 42
4．腹腔内接种 42
5．颅腔内接种 42
6．静脉内接种 43
（一）家兔 43
（二）豚鼠 43
（三）小白鼠 43
（四）大白鼠 43
七、动物采血法 44
1．家兔 44
2．豚鼠 44
3．小白鼠 45
4．大白鼠 45
5．鸡及鸽子 45
八、感染动物的解剖 46
九、培养病毒的种类 47
十、常用实验动物的自发性传染病 47
1．细菌性疾病 47
2．病毒性疾病 49
3．其他 51
4．动物体外寄生虫的控制 51
第三章 鸡胚培养 52
一、鸡胚的发育 52
二、材料设备 54
1、卵 54
2．孵卵器 54
3．检卵灯及暗室 55
4．开卵钻及磨牙机 55
5．卵盘 55
6．接种罩及紫外线灯 55
7．其他 55
三、鸡胚培养注意事项 56
1．无菌技术 56
2．细心谨慎的操作 56
3．保持培养条件 56
4．无菌试验 56
四、操作技术 57
1．鸡卵的保存、孵育及检卵 57
2．各种途径的鸡胚接种方法 57
（一）卵黄囊接种法 57
（二）绒毛尿囊膜接种法 58
（三）尿囊接种法 59
（四）羊膜腔接种法 60
（五）静脉接种法 61
（六）脑内接种法 62
五、总结表 62
第四章 组织培养 64
一、概述 64
二、用具的规格，洗涤和消毒 65
1．玻璃器皿 65
2．橡皮管和橡皮塞 66
3．组织搅碎器 66
4．解剖用具 66
三、各种溶液、血清、浸出液的准备、消毒、保存和使用 66
1．Hanks液 66
2．Earle氏液 67
3．磷酸缓冲盐水 68
4．199综合培养基 68
5．Eagle氏营养液 74
6．鸡胚浸出液 75
7．牛胚浸出液 76
8．血清 76
9．鸡血浆 78
10．羊水 79
11．0.02％乙二胺四乙酸二钠溶液 79
12．？蛋白酶溶液 80
13．抗菌素 80
14．0.5％乳蛋白水解物 80
四、培养方法 80
1．单层细胞培养 81
（一）HeLa细胞 81
（二）Detroit-6细胞 84
（三）人胎盘羊膜细胞 85
（四）猴肾上皮细胞 86
（五）鸡胚细胞 88
（六）鸡胚肝脏细胞 89
2．组织块培养 90
五、染色方法 92
六、总结表 94
第五章 流行性乙型脑炎（包括淋巴球脉络丛脑膜炎） 96
一、概述 96
二、血清学试验 96
1．补体结合试验 96
（一）1.25％羊血球悬液的配制 96
（二）溶血素 97
（三）补体 98
（四）抗原 99
（五）免疫血清的制备 101
（六）血清 103
（七）致敏羊血球悬液 103
（八）试验步骤 106
附：微量补体结合试验操作方法 106
（一）标本的采取 106
（二）试验 108
2．血球凝集抑制试验 111
（一）0.01M磷酸缓冲盐水（pH6.4）的制备 112
（二）0.25％小鸡血球悬液 112
（三）流行性乙型脑炎血凝素的制备 112
（四）血清的处理 112
（五）试验步骤 113
3．中和试验 114
（一）动物 114
（二）血清 114
（三）病毒 114
（四）方法 114
三、病毒的分离和鉴定 115
1．分离 115
（一）标本 115
（二）悬液的制备 115
（三）动物 115
（四）接种 116
（五）观察 116
（六）传代 116
2．鉴定 116
（一）初步鉴定 116
（二）最后鉴定 117
（1）动物感染范围 117
（2）交互中和试验 118
（3）交互补体结合试验 118
（4）交互保护试验 118
四、流行性乙型脑炎的早期诊断 118
第六章 脊髓灰白质炎 119
一、概述 119
二、分离和鉴定 120
1．标本 120
（一）标本的收集和保存 120
（二）标本的运送 121
（三）标本的处理 121
2．分离 122
（一）接种 122
（1）猴子 122
（2）组织培养 122
（二）观察 123
（1）猴子 123
（2）组织培养 123
3．鉴定 124
（一）免疫血清 124
（二）中和试验 125
4．快速鉴定 127
5．分离和鉴定脊髓灰白质炎及其他肠道病毒的程序 127
三、血清学试验 127
1．中和试验 127
2．补体结合试验 129
3．结果的解释 129
第七章 狂犬病 131
一、概述 131
二、实验室工作人员应注意之点 131
三、标本来源 132
1．临床标本 132
2．尸检标本 132
四、组织病理诊断 132
五、病毒的分离和鉴定 133
六、血清学诊断 134
第八章 流行性腮腺炎 134
一、概述 134
二、病毒的分离和鉴定 135
1．标本采集和运送方法 135
2．标本处理及病毒分离鉴定 135
（一）标本处理方法 135
（二）标本接种及病毒分离鉴定方法 135
（1）鸡胚羊膜腔接种法 135
（2）组织培养 136
三、血清学试验 136
1．补体结合试验 136
（一）抗原的制备 137
（1）病毒抗原（V抗原） 137
（2）可溶性抗原（S抗原） 137
（3）对照抗原 137
（二）免疫血清制备 137
（三）试验方法 138
（四）结果判定 138
2．血凝抑制试验 138
（一）血凝素 139
（二）病人血清 139
（三）鸡血球悬液 139
（四）操作方法 139
（五）结果的解释 139
第九章 流行性感冒 140
一、概述 140
二、血清学试验 140
1．血球凝集试验和血球凝集抑制试验 140
（一）血球凝集试验 140
（1）材料 141
（2）操作方法 141
（3）注意事项 142
（二）血球凝集抑制试验 143
（1）材料 143
（2）血清处理法 144
（3）操作方法 144
（4）注意事项 146
2．补体结合试验 146
（一）抗原的制备 146
（1）可溶性抗原 146
（2）病毒抗原 146
（二）血清 147
（三）免疫血清的制备 147
（四）操作方法 148
三、分离病毒 148
1．标本的收集 148
2．用鸡胚羊膜腔接种法分离病毒 148
（一）注射液的准备 148
（二）羊膜腔接种 149
（三）孵育 149
（四）收获羊水 149
（五）测定羊水的血球凝集素 149
（六）血凝反应真假阳性之判别 149
（七）继续传代 150
四、新分离病毒型别的初步鉴定 151
1．血凝抑制试验 151
2．补体结合试验 151
五、关于排除实验室污染的可能应采取的措施 152
六、毒种的传代和保存 153
1．传代方法 153
2．毒种保存方法 153
（一）冷冻干燥保存 153
（二）低温冰箱保存 154
（三）普通冰箱保存 154
七、流行性感冒病毒株的命名 154
附录：霍乱滤液的制造和效力的测定方法 156
第十章 腺病毒感染的诊断 159
一、概述 159
二、病毒的分离和鉴定 159
1．咽？与咽拭子液 159
2．组织培养 159
3．分离病毒 160
4．病毒的鉴定 160
（一）动物试验 161
（二）对乙醚的抵抗力 161
三、血清学试验 161
1．中和试验 161
2．补体结合试验 162
3．免疫血清的制备 162
第十一章 天花和牛痘 163
一、概述 163
二、病毒的分离和鉴定 163
三、快速诊断 164
四、Paul氏反应 165
五、血清学诊断 166
第十二章 单纯痘疹 167
一、概述 167
二、病毒的分离和鉴别 168
1．鸡胚培养 168
2．动物试验 168
三、血清学诊断 169
第十三章 常见立克？氏体病的实验诊断 170
一、概述 170
二、立克次氏体实际操作时的注意点 170
三、立克次氏体的分离方法 171
1．检验标本的收集和接种 171
（一）病人标本 171
（二）由节肢动物及动物宿主分离立克次氏体 171
2．应用动物分离立克次氏体 172
（一）豚？ 172
（二）小白鼠 173
3．毒种在动物体内连续传代 173
4．鸡胚接种及传代 173
（一）接种及观察 173
（二）解剖及传代 174
（三）无菌试验 174
5．毒株的保存 175
6．立克次氏体的染色和镜检 176
四、立克次氏体的血清学诊断 176
1．外斐氏反应 176
（一）抗原的制备 176
（二）操作方法 177
2．补体结合试验 177
（一）立克次氏体颗粒性抗原的制备 179
（二）可溶性抗原的制备 179
五、免疫保护试验 180