第一章 免疫球蛋白技术 1
第一节 免疫血清的制备 1
一、动物的选择 1
二、免疫原 1
三、佐剂的应用 2
四、免疫的次数和方法 3
五、几种常用免疫血清的制备法 4
六、免疫血清的效价测定 7
七、免疫血清的浓缩 8
八、免疫血清的保存 9
第二节 免疫球蛋白的分离和提纯 9
一、IgG的分离和提纯 9
二、IgM的分离和提纯 19
三、IgA的分离和提纯 20
四、IgE的分离和提纯 23
第三节 免疫球蛋白的纯度鉴定 25
一、琼脂免疫双向扩散 25
二、琼脂免疫电泳 27
三、琼脂单纯(区带)电泳 28
四、聚丙烯酰胺凝胶电泳(圆盘电泳) 29
五、对流免疫电泳 31
第四节 免疫球蛋白的含量测定 33
一、紫外吸收法 33
二、福林酚法 34
三、双缩脲法 36
四、其他测定法 37
第二章 抗原抗体分析技术 40
第一节 薄层等电聚焦电泳技术 40
第二节 双向电泳技术 44
第三节 免疫印迹法 49
第四节 高效液相色谱技术 54
第三章 血清学反应 57
第一节 沉淀反应 57
一、环状沉淀反应 57
二、絮状沉淀反应 58
三、琼脂扩散沉淀反应 58
第二节 直接凝集反应 59
一、试管凝集反应 60
二、玻板凝集反应 61
三、玻片凝集反应 61
四、微量凝集反应 62
第三节 微载体技术 62
一、间接红细胞凝集反应 63
二、反向间接乳胶凝集反应 67
三、反向间接炭凝集反应 69
第四节 抗球蛋白凝集反应 70
第五节 补体的测定 72
第六节 补体结合反应 77
一、直接补体结合反应 77
二、固相补体结合试验 87
三、微量补体结合反应 89
四、间接补体结合反应 92
第七节 固相溶血试验 94
第八节 团集反应 95
第九节 凝集溶解试验 101
第十节 中和试验 103
第十一节 红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验 111
第四章 免疫荧光技术 114
第一节 免疫荧光技术的原理及特点 114
第二节 荧光抗体的制备 117
一、免疫血清的制备及免疫球蛋白的提纯 117
二、荧光色素的标记 118
第三节 荧光抗体染色法 129
一、标本的制备 129
二、标本的固定和保存 130
三、染色方法 132
四、染色标本的保存 134
第四节 荧光显微镜检查 134
一、光源 134
二、滤光片 136
三、显微镜 137
四、观察方法 138
五、使用荧光显微镜的注意事项 138
六、摄影 139
第五节 非特异性荧光的产生和消除 139
一、在细菌学中的应用 143
第六节 免疫荧光技术在兽医学上的应用 143
二、在霉形体及病毒病方面的应用 145
第七节 其他免疫荧光技术 147
一、荧光菌团染色法 147
二、吖啶橙简易免疫荧光法 148
三、红细胞吸附免疫荧光技术 149
四、荧光素标记葡萄球菌A蛋白试验 149
第五章 免疫酶技术 150
第一节 概述 150
一、免疫酶技术的原理及分类 150
二、酶结合物的制备 150
第二节 酶联免疫吸附试验 151
第三节 免疫酶染色法 154
第四节 化学发光免疫测量法 155
第五节 其他免疫酶技术 158
一、BAS免疫酶技术 158
二、斑点酶联免疫吸附测定法 161
三、单克隆抗体酶联免疫吸附试验 162
四、双特异抗体酶免疫测定法 163
第六章 放射免疫技术 165
第一节 放射免疫饱和分析法 165
一、基本原理 165
二、测定技术 167
三、放射免疫饱和分析法的应用 176
第二节 放射免疫沉淀自显影法 177
第七章 免疫电镜技术 180
第一节 免疫复合物电镜技术 180
一、离心法 180
二、琼脂滤过法 180
三、琼脂聚乙二醇法 181
第二节 免疫标记电镜技术 181
一、铁蛋白抗体法 181
二、酶抗体法 187
三、重金属标记抗体技术 192
四、血蓝蛋白标记抗体技术 192
五、病毒的电镜凝集试验 193
第八章 基因工程技术 194
第一节 基因工程的基本原理 194
一、目的基因的分离 194
二、用于基因重组的基本工具酶 195
三、用于分子克隆的载体 199
四、基因表达 200
第二节 分子克隆基本操作方法 201
一、细菌质粒DNA的大量提取 201
二、细菌质粒DNA的快速提取 202
三、用限制性内切酶酶切DNA 203
四、DNA凝胶电泳 204
五、用低熔点琼脂糖回收DNA片段 206
六、DNA的去磷酸化 207
八、细菌质粒的转化 208
七、DNA片段与载体DNA的连接 208
九、共转化 209
十、重组克隆系的筛选与鉴定 210
第三节 基因工程技术在免疫学中的应用实例 214
一、仔猪大肠杆菌基因工程苗菌株的构建 214
二、应用PRPL串联启动子和Clts857调控基因高效表达γ干扰素 217
三、用生物素标记DNA探针检定弯曲菌 219
附：基因工程技术常用溶液及试剂的配制 220
第九章 细胞免疫检测技术 222
第一节 硝基蓝四氮唑还原试验 222
第二节 白细胞杀菌功能试验 224
一、体内法 225
二、体外法 225
第三节 巨噬细胞吞噬功能检测法 225
第四节 淋巴细胞转化试验 226
一、形态学检查法 227
二、3H-胸腺嘧啶核苷掺入法 229
第五节 巨噬细胞移行抑制试验 231
第六节 T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶的测定 234
第七节 白细胞粘附抑制试验 236
第十章 T、B淋巴细胞计数技术 240
第一节 T淋巴细胞计数法 240
一、E-玫瑰花环形成试验 240
二、微量E-玫瑰花环形成试验 243
三、活性玫瑰花环形成试验 244
第二节 B淋巴细胞计数法 245
一、B淋巴细胞SmIg的检测 246
二、免疫微球法 247
三、EAC花环试验 248
四、FBC花环试验 249
五、EA花环试验 251
第三节 溶血空斑试验 252
第四节 EY-混合玫瑰花环形成试验 255
第十一章 葡萄球菌A蛋白技术 258
第一节 SPA的基本特性 258
一、SPA的理化特性 258
二、SPA的免疫学及生物学特性 259
第二节 SPA制剂 260
一、菌种与培养 260
二、SPA的提取 261
三、SPA试剂 262
第三节 SPA在免疫诊断中的应用 265
一、协同凝集试验 265
二、酶标SPA染色法 267
三、酶标SPA酶联免疫吸附测定法 268
第四节 应用IgG-SPA菌免疫法制备抗IgG血清的技术 269
第五节 用SPA-Sepharose-4B亲和层析法提取IgG的技术 271
第六节 SPA-Sepharose 6MB亲和层析法分离B细胞 272
第十二章 循环免疫复合物检测方法 274
第一节 聚乙二醇沉淀法 275
第二节 利用C1q进行循环免疫复合物检测的方法 276
一、C1q的制备 276
二、C1q琼脂扩散测定法 278
三、C1q放射免疫测定法 278
四、酶联C1q测定法 279
第三节 固相团集素结合测定法 280
第四节 C3b致敏酵母菌凝集试验测定法 282
第五节 抗补体试验测定法 283
一、试管法抗补体试验 283
二、微量板法抗补体试验 285
第一节 原理 288
第十三章 单克隆抗体技术 288
第二节 材料和方法 290
第三节 注意的问题 294
第四节 抗鼻疽菌McAb杂交瘤细胞株的建立 295
第五节 生物导弹技术 297
第一节 红细胞免疫功能测定技术 301
第二节 碳免疫测定法 301
第三节 免疫染色法 302
第四节 胶乳免疫测定法 303
第五节 相分离免疫测定技术 306
第十五章 免疫生物制剂的制备 311
第一节 免疫核糖核酸的制备 311
一、免疫学作用机理 311
二、免疫核糖核酸的类型 311
三、制备技术 312
四、免疫核糖核酸制剂检定 314
一、转移因子的作用机理 315
第二节 转移因子的制备 315
二、转移因子的制备方法 315
五、免疫核糖核酸的临床应用 315
三、转移因子的含量测定 317
四、转移因子的检定程序 317
一、概述 319
二、猪胸腺肽的提取 319
第三节 胸腺肽的制备 319
三、牛胸腺肽的制备 320
四、含量测定 321
五、活力测定 321
第四节 干扰素技术 322
一、干扰素的制备 323
二、白细胞干扰素的纯化 324
第五节 白细胞介素的制备 327
一、IL-1的制备 327
二、IL-2的制备 328
第六节 肿瘤坏死因子的制备 329
第十六章 免疫学技术常用试剂配制 332
第一节 缓冲溶液 332
一、缓冲溶液的基本性质 332
二、常用缓冲液的配制 334
第二节 平衡盐溶液 347
一、平衡盐溶液的种类与作用 347
二、实际应用及配制要求 347
二、常用平衡盐溶液的配制 347
二、钙镁盐水 349
三、硼酸盐水 349
四、联苯胺溶液 349
一、Alsever氏液 349
第三节 其他溶液的配制 349
七、等渗的EDTA二钠溶液 350
六、甘油缓冲液 350
八、鞣酸溶液 350
五、双重氮联苯胺溶液 350
九、酯酶染色液 351
十、淋巴细胞分离液 351
十一、赛氏液 352
1、常用元素的原子量表 353
2、希腊字母表 353
附录 353
3、常量、微量和超微量度量衡单位名称表 354
4、常用实验动物正常体温变动范围(直肠温) 355
5、免疫学常用缩写略语 356
6、离心机与离心力 363
第十四章 其他免疫学技术 398