微生物学实习课须知 1
一、医学微生物学实验目的和要求 1
二、微生物学实验室规则 1
细菌学总论 2
实习一 细菌的形态学 2
一、显微镜油镜头的使用 2
二、细菌的基本形态和特殊结构 4
三、细菌动力的直接观察 5
实习二 细菌的人工培养 5
一、人工培养基的种类及其应用 6
二、培养基制备的一般程序 6
三、细菌接种法 7
四、菌落特点观察 13
五、菌落计算板的使用 14
实习三 细菌染色法 15
一、细菌染色标本的制备 15
二、革兰染色法 16
实习四 细菌代谢产物检查 17
一、毒素检查 17
二、糖代谢物检查 18
实习五 消毒、灭菌、除菌 18
一、物理方法 19
二、化学方法 24
实习六 噬菌体试验 25
一、噬菌体分离 25
二、噬菌体蚀斑试验 26
实习七 细菌的遗传与变异 26
一、接合传递试验 26
二、转化试验 27
三、转导试验 28
四、细菌变异现象的观察 29
细菌学各论 32
实习八 病原性球菌 32
一、致病性球菌检验程序 33
二、致病性球菌形态与菌落 33
三、血浆凝固酶试验 34
四、抗链球菌溶血素“O”测定 34
五、透明质酸酶试验 36
六、胆盐溶菌试验 37
七、Optochin敏感试验 37
八、细菌毒力试验 38
九、脑脊液直接涂片检查 38
十、荧光抗体法检查淋病奈瑟菌 39
实习九 肠道细菌 40
一、大肠埃希菌、沙门菌和志贺菌的鉴定程序 40
二、肠道杆菌的形态与典型菌落形态 41
三、双糖试验和尿素酶试验 41
四、肥达反应试验 42
五、菌姆维克试验 44
六、微量-编码测定法 45
七、血清学试验 47
八、抗生素敏感性试验 47
九、鲎试验 49
十、霍乱弧菌的一般鉴定程序 50
十一、霍乱弧菌形态与典型菌落形态 50
十二、霍乱弧菌快速诊断 50
十三、副溶血性弧菌嗜盐试验 51
实习十 幽门螺杆菌、布氏杆菌、鼠疫杆菌、炭疽杆菌、结核分枝杆菌、厌氧芽胞梭菌、军团菌、百日咳杆菌和白喉棒状杆菌 52
一、形态与典型菌落观察 52
二、幽门螺杆菌尿素酶试验 53
三、布氏杆菌玻片凝集试验 54
四、鼠疫杆菌噬菌体裂解试验 54
五、炭疽杆菌串珠试验 55
六、结核杆菌耐酸染色 55
七、产气荚膜梭菌汹涌发酵试验 56
八、破伤风梭菌外毒素致病作用及抗毒素保护试验 56
九、肉毒毒素检查 57
十、军团菌免疫荧光检查法 57
十一、百日咳杆菌营养条件试验 58
十二、白喉棒状杆菌毒力测定 58
其他微生物 60
实习十一 支原体 60
实习十二 衣原体 60
实习十三 立克次体 61
一、立克次体的培养与形态 61
二、外-斐反应 61
实习十四 螺旋体 62
一、观察主要病原性螺旋体的形态特征 62
二、暗视野法检查钩端螺旋体 62
三、快速血浆反应素试验 63
实习十五 病原性真菌 64
一、菌落特征观察(大培养示教) 64
二、形态特征观察(小培养示教) 64
三、浅部感染真菌的检查 65
四、深部感染真菌的检查 65
病毒学 67
实习十六 病毒的形态学检查 67
一、病毒的5种基本形态 67
二、应用透射电子显微镜检查病毒颗粒 67
三、光学显微镜检查病毒包涵体 68
实习十七 病毒的动物接种 68
一、乳鼠的颅内接种 68
二、小白鼠鼻腔接种法 69
实习十八 病毒的鸡胚接种 69
一、卵黄囊接种 70
二、羊膜腔接种 70
三、尿囊腔接种 70
四、绒毛尿囊膜接种 71
实习十九 病毒的组织培养 71
一、原代细胞培养 71
二、传代细胞培养 72
实习二十 流行性感冒病毒的分离鉴定 72
一、流感病毒的分离培养-鸡胚尿囊腔接种 72
二、流感病毒的初步鉴定-血细胞凝集试验和血细胞凝集抑制试验 73
实习二十一 免疫荧光技术 75
一、直接免疫荧光(DIF)检测单纯疱疹病毒(HSV)抗原 76
二、间接免疫荧光(IIF)检测CMV IgM抗体 76
实习二十二 中和试验 77
实习二十三 空(蚀)斑形成试验 78
实习二十四 Southern印迹杂交 79
实习二十五 Northern印迹杂交 80
一、RNA的分离 80
二、变性RNA的膜上转移及固定 81
三、杂交 82
实习二十六 蛋白质印迹法Western Blotting 84
实习二十七 聚合酶链式反应 86
实习二十八 DNA序列测定 87
附录 89
附录Ⅰ 常用培养基制备 89
附录Ⅱ 微生物染色法 97
附录Ⅲ 常用指示剂、试剂、溶液和缓冲液 101
附录Ⅳ 实验动物的管理、接种、采血及解剖法 107
附录Ⅴ 伤寒抗原与伤寒免疫血清的制备 110