1 引言 1
1.1 品种的概念和品种濒危的标准 1
1.1.1 品种的概念 1
1.1.2 品种濒危的标准 1
1.2 保护濒危品种的理由 2
1.3 确定基因储备的基本方法 4
2 基因组 6
2.1 保存 6
2.1.1 胚胎(超数排卵、受精卵的采集及冷冻保存) 6
2.1.2 胚胎的操作 13
2.1.3 细胞和核 16
2.1.4 精液 17
2.1.4.1 精液的冷冻保存 17
2.1.4.2 深度冷冻精液的长期贮存 19
2.1.5 卵母细胞 20
2.1.5.1 排出的卵母细胞的收集 20
2.1.5.2 从卵巢收集卵母细胞 20
2.1.5.3 体外受精 20
2.1.5.4 深度冷冻和解冻后卵母细胞的体外受精 20
2.2 复原 21
2.2.1 解冻胚胎的移植 21
2.2.2 用卵裂球和保存的细胞生产嵌合体 23
2.2.3 核移植 25
3 基因 28
3.1 保存 28
3.1.1 分离的染色体 28
3.1.2 基因组DNA文库和/或cDNA文库的建立 29
3.1.2.2 重组DNA的体外包装和转染 36
3.1.2.1 高分子量基因组DNA的分离和部分水解 36
3.1.3 基因分离 39
3.1.4 核苷酸序列 40
3.2 复原 40
3.2.1 用保存的材料构建遗传文库 40
3.2.2 转基因牛的生产 41
3.2.2.1 直接显微注射DNA 41
3.2.2.2 用逆转录病毒载体移植基因 43
3.2.2.3 用转染的多能细胞形成嵌合体而生产转基因牛 43
3.2.3 转基因动物的检查 44
3.2.4 转基因牛的繁育 48
4 遗传问题 51
4.1 小群体生存的可能性 51
4.2 遗传变异性的降低 51
4.3.1 在胚胎和精液文库中保存单基因 54
4.3 质量性状 54
4.3.2 在基因组文库中保存单基因 55
4.4 数量性状 56
5 胚胎库的实际应用 57
5.1 固定的胚胎移植站 57
5.2 流动的胚胎移植小组 57
5.3 供体母牛 58
5.4 建立胚胎库所需要的费用 61
6 讨论和结果 63
6.1 濒危的牛品种 63
6.2 牛品种的保存价值 63
6.3 选择最适宜的保种技术 64
6.4 实际工作 64
7 摘要 66
8 参考文献 67