目录 3
第一篇 细胞工程的基本技术——细胞培养技术 3
第一章 细胞培养的基本知识 3
第一节 基本概念和名词 3
第二节 细胞的特性 5
一、培养细胞的形态与结构 6
二、培养细胞的生长方式和类型 7
三、培养细胞的生长特点和生长增殖过程 8
第一节 细胞的营养 14
第二章 细胞培养的条件 14
一、水 15
二、糖 15
三、氨基酸 15
四、维生素 16
五、无机离子和微量元素 17
六、促生长因子 18
第二节 影响细胞生长的因素 20
一、温度 20
二、渗透压 21
四、无毒和无菌 22
三、气体环境和pH 22
五、辐射线和超声波 23
六、细胞接种浓度（密度） 23
七、容器转动速度和悬浮搅动速度 24
第三章 细胞培养的必备设施、常用器材和培养基 25
第一节 细胞培养的必备设施 25
一、无菌实验室 25
二、净化工作台 26
四、其他设备 27
三、恒温培养箱 27
第二节 细胞培养常用器材及处理方法 28
一、玻璃器材 28
二、塑料器材 29
三、橡皮器材 30
四、金属器材 30
五、其他用品 30
第三节 常用溶液、培养液及其配制 31
一、平衡盐溶液 31
二、其他溶液 33
三、培养基 34
第二篇 细胞工程的常用技术 39
一、取材的基本要求 40
第四章 原代细胞的培养与建系 40
第一节 原代细胞的取材 40
二、各类组织的取材技术 41
第二节 原代细胞的分离和制作 43
一、悬浮细胞的分离方法 43
二、实体组织材料的分离方法 43
三、原代细胞的培养方法 47
一、原代细胞的培养与维持 49
第三节 原代和传代细胞的培养和维持 49
二、原代细胞培养的首次传代 51
三、传代细胞的传代培养 51
四、传代细胞的建系和维持 52
第四节 细胞的纯化和克隆 53
一、细胞的纯化 53
二、细胞的克隆化 56
第五章 正常细胞的培养技术 60
一、上皮细胞培养 60
二、中胚层细胞培养 69
二、神经外胚层细胞培养 88
第六章 肿瘤细胞的培养 92
一、肿瘤细胞培养的生物学特性 92
二、培养肿瘤细胞的生物学特性的检测 94
三、肿瘤细胞的取材和培养 95
第七章 细胞培养的污染及控制 102
第一节 污染的类型 102
一、细菌污染 102
二、真菌污染 102
五、非同种细胞污染 103
四、病毒污染 103
三、支原体污染 103
第二节 污染来源及鉴别 104
一、污染来源 104
二、污染的鉴别 105
第三节 污染的清除和预防 106
一、污染的清除 106
二、污染的预防 107
一、概述 109
第一节 细胞的冻存 109
第八章 细胞的冷冻保存复苏技术 109
二、主要冷冻设备和材料 110
三、细胞冻存方法 110
三、注意事项 111
第三节 细胞的运输 111
第二节 细胞的复苏 111
二、细胞复苏的主要操作步骤 111
一、细胞复苏的原则 111
一、冷冻储存运输 112
二、充液法 112
第九章 培养细胞的观察与检测方法 113
一、肉眼观察 113
第一节 培养细胞的常规检查和观察方法 113
二、显微镜观察 114
三、细胞的生长状态 114
四、微生物污染 114
第二节 培养活细胞的观察方法 115
一、相差显微镜直接观察法 115
二、暗视野显微镜技术观察活细胞 116
第三节 细胞固定观察法 117
四、离体活细胞染色观察 117
三、缩时显微镜摄影观察 117
一、细胞固定基本方法 118
二、常用染色方法 118
三、特殊染色方法 120
第四节 细胞生长状况有关指标的检测方法 125
一、细胞计数 125
二、细胞生长曲线和生长倍数 126
三、细胞分裂指数 126
五、克隆形成率 127
四、细胞接种存活率 127
第五节 细胞生物活性的化学检测法 129
一、四氮唑盐（MTT）比色法 129
二、细胞蛋白质含量测定法（考马斯亮蓝测定法） 130
三、细胞蛋白质合成的3H－亮氨酸掺入试验 130
四、细胞DNA合成测定法 131
第六节 电镜观察法 132
一、透射电镜细胞样品制备技术和观察方法 132
二、扫描电镜细胞样品制备 134
一、X染色质显示法 139
第十章 细胞染色体显示和分带技术及其应用 139
第一节 性染色质检测 139
二、Y染色质显示法 140
第二节 培养细胞染色体显示法 140
一、原理 140
二、传代细胞染色体检查 141
三、微量外周血白细胞染色体检查 141
二、染色体显带方法要点 142
一、染色体显带种类 142
第三节 染色体结构显示和检测 142
四、羊水细胞培养 142
三、原理 143
四、常用染色体显带法 143
五、姐妹染色单体分化染色 144
第十一章 细胞器的分离和脱核技术 146
第一节 细胞器的分离技术 146
一、破碎细胞的方法 146
二、部分细胞器的分离方法 147
一、细胞核的分离 151
第二节 细胞核的分离和细胞脱核技术 151
二、细胞脱核技术 152
第十二章 体外培养细胞的转化 154
第一节 细胞转化的基本概念和原理 154
一、细胞转化的基本概念 154
二、细胞转化与恶变的区别 154
三、细胞转化的方式 155
四、细胞转化的基本过程 155
二、细胞的选择 157
三、目前常用的细胞种类 157
一、诱变剂的选择 157
第二节 诱变因素的选择 157
第三节 细胞的转化和转化灶的分离纯化 159
一、细胞的转化 159
二、转化灶的分离 160
三、转化细胞的筛选 161
第四节 几种常用细胞转化技术实例 162
一、化学致癌物的细胞转化 162
二、病毒转化细胞 162
一、细胞凋亡的特征 164
第十三章 细胞凋亡技术 164
二、细胞凋亡试验常用的方法 165
三、Bcl-2凋亡基因表达的检测技术 169
四、细胞凋亡的分子机制 172
五、细胞凋亡的医学意义 175
第十四章 细胞融合和单抗的杂交瘤技术 177
第一节 细胞融合 177
一、常用的细胞融合剂 177
二、细胞融合方式 178
第二节 单克隆抗体的杂交瘤技术 179
一、基本原理 179
二、技术的特点 180
三、技术的应用 180
四、杂交瘤细胞制备的操作程序 181
第十五章 细胞毒免疫学实验技术 191
一、癌细胞的杀伤研究 191
二、细胞毒试验 192
第十六章 药物敏感试验的细胞培养法 197
二、受试细胞的准备 198
一、药物的准备 198
三、药效的评价 199
四、药物敏感性试验的体外细胞培养法 199
五、不同的抗癌药物的生物效应指标选择 204
第十七章 细胞的诱导分化 206
一、细胞分化的概念 206
二、决定细胞分化的因素 206
第十八章 病毒分离培养的细胞培养法 214
一、细胞培养用于病毒研究的优点 214
二、用细胞培养分离病毒 215
三、病毒的鉴定技术 217
四、用细胞培养法制备病毒血清学抗原 224
第十九章 细胞因子的诱生与效价测定 225
第一节 IL-I的诱生及检测 226
一、IL1的诱生 226
二、IL-1的检测方法 227
第二节 IL2的诱生及检测 230
一、IL-2的诱生 230
二、IL-2的检测方法 234
第三节 IL-3的诱生及检测 238
一、IL-3的诱生 239
二、IL-3的检测方法 240
第四节 IL－4、IL-5的诱生及检测 243
一、IL-4和IL-5的诱生 243
二、IL-4的检测方法 245
三、IL-5的检测方法 248
第五节 IL-6、IL-7、IL－8、IL－9的诱生及检测 250
一、IL-6的诱生 250
二、IL6的检测方法 250
四、IL－8的诱生及检测方法 255
三、IL－7的诱生及检测方法 255
五、IL-9的诱生及检测方法 257
第六节 CSFs的诱生及检测 258
一、CSFs的诱生 258
二、CSFs的检测方法 259
第七节 TNF的诱生及检测 261
一、TNF的诱生 261
二、TNF的检测方法 261
一、干扰素的类型 270
二、干扰素的理化性质和生物学性质 270
第八节 干扰素的诱生及检测 270
三、干扰素的诱生 271
四、干扰素效价的测定 275
第二十章 细胞基因的分离鉴定和原位杂交 277
第一节 细胞DNA、RNA的分离鉴定技术 277
一、培养细胞基因组DNA的提取及鉴定 277
二、培养细胞总RNA的提取及鉴定 278
第二节 核酸、蛋白转移电泳及杂交 280
一、DNASouthernBlot及杂交 280
二、RNANorthernBlot及杂交 283
三、蛋白WesternBlot及分析 284
第三节 细胞的原位杂交技术 286
一、探针的制备原则和选择 286
二、载玻片和盖玻片的预处理 287
三、组织细胞固定 287
四、原位杂交 288
第二十一章 基因的细胞内导入技术 292
一、基本概念 292
二、物理化学法基因转染技术 294
三、逆转录病毒载体介导DNA转染法 300
四、转染细胞的鉴定 304
第二十二章 流式细胞仪技术 306
一、样品的制备 306
二、悬浮细胞的固定 307
三、流式细胞仪分析的应用 307
第三篇 细胞工程的应用技术 315
第二十三章 细胞的大量培养 315
第一节 培养要素控制及其参数的测定 317
一、大规模培养系统的类型 320
第二节 细胞大量培养的类型和方法 320
二、大规模生产细胞的方法 321
第二十四章 干扰素和其他细胞因子的生产制备技术 371
第一节 人白细胞干扰素IFN-α的生产制备方法 371
一、细胞来源 371
二、生产设备 371
三、质量控制 371
四、大罐悬浮培养法生产干扰素IFN-α 372
一、生产用细胞来源 373
二、细胞培养装置 373
第二节 人成纤维细胞干扰素的生产制备 373
三、培养基与超诱生剂 374
四、人和鼠IFN-β的制备方法 374
第三节 人“类淋巴细胞”干扰素的生产制备 377
一、细胞来源 377
二、Namalva细胞的干扰素生产 378
三、大量生产的工艺 378
四、生产工艺路线流程 379
一、人白细胞介素－2（IL-2）诱生制备方法 380
第四节 其他细胞因子的制备 380
二、TNF-α、IL-2、IL-6、IFN-γ,GM－CSF的制备 382
第二十五章 病毒及其疫苗的生产制备技术 383
第一节 病毒的生产 383
一、病毒生产的目的和用途 383
二、病毒生产的方法 384
第二节 病毒疫苗的生产 384
一、病毒疫苗的种类 384
二、细胞培养法制备的常用疫苗 385
三、用细胞培养制备病毒疫苗的优点 386
四、提高疫苗效力常采用的方法 387
六、生产病毒和制备病毒疫苗的常用方法 388
五、影响疫苗质量的因素 388
第二十六章 组织移植的活细胞制备技术 392
一、LAK细胞的制备技术 392
二、TIL细胞的制备技术 393
第二十七章 单克隆抗体的生产技术 396
一、牛淋巴液体外循环培养法 396
二、微囊培养法 396
三、含血清的杂交瘤细胞大量培养法 397
四、无血清的杂交瘤细胞培养法 397
一、在细胞生物学方面的应用 400
第二十八章 细胞培养技术和细胞工程在医学中的应用 400
第一节 在细胞学、胚胎学和药学方面的应用 400
二、在组织胚胎学方面的应用 401
三、在药物学和药理学方面的应用 402
第二节 在肿瘤学方面的应用 403
一、肿瘤病因和发病机制的研究 403
二、抗癌药物筛选方面的研究 404
三、癌基因和抑癌基因方面的研究 404
四、癌细胞诱导分化和逆转方面的研究 404
第三节 在免疫学中的应用 405
五、癌细胞杀伤效应的研究 405
一、免疫细胞表面标记和功能的常规检测 406
二、白细胞分化抗原的分类和主要特征 406
三、单核－吞噬细胞的培养和功能的测定 417
四、免疫细胞毒试验 417
五、在细胞因子的诱生和检测中的应用 418
六、在HLA抗原检测中的应用 426
七、在器官和组织移植免疫中的应用 429
第四节 在临床各科中的应用 430
一、在外科中的应用 430
二、在内科中的应用 431
附录 433
附录1 人和动物的主要细胞系（株） 433
附录2 离心速度和离心力换算表 436
附录3 培养基 437
附录4 细胞培养中常用名词解释 438
附录5 细胞培养常用的溶液 448
附录6 中国典型培养物保藏中心细胞库可供细胞目录 451
附录7 中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库可供细胞目录 454
附录8 细胞培养中常用术语的译名 457
主要参考文献 466