第一部分 生物化学实验指导 3
第一章 常用生物化学实验技术原理 3
第一节 分光光度法 3
第二节 层析法 13
第三节 电泳法 41
第四节 离心分离法 60
第二章 生物化学基础实验 66
实验一 糖的显色反应和定性鉴定 66
实验二 总糖的测定(1)——3,5-二硝基水杨酸比色定糖法 68
总糖的测定(2)——蒽酮比色法 71
实验三 蛋白质的两性反应和等电点的测定 72
实验四 蛋白质的沉淀及变性实验 74
实验五 蛋白质的呈色反应 76
实验六 考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量 78
实验七 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 80
实验八 紫外光谱吸收法测定蛋白质含量 81
实验九 影响酶活性的因素 82
实验十 酶的特异性 84
第三章 生物化学大实验 86
实验十一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 86
实验十二 离子交换层析法分离氨基酸 89
实验十三 氨基酸的分离——纸层析法 92
实验十四 粗脂肪的提取和定量测定 95
实验十五 大蒜细胞SOD的提取与分离 97
实验十六 淀粉酶活力的测定 100
实验十七 果蔬维生素C含量的测定 103
实验十八 脂肪的碱水解及组分鉴定 105
实验十九 植物材料中总黄酮的提取与测定 107
实验二十 可溶性糖的硅胶G薄层层析 109
实验二十一 糖酵解中间产物的鉴定 112
实验二十二 碱性磷酸酶Km的测定 114
实验二十三 卵清蛋白的分段盐析、透析 117
实验二十四 碘值的测定 119
实验二十五 乳酸脱氢酶粗提液的制备和活力测定 121
实验二十六 糖的酵解作用 124
实验二十七 转氨基作用 127
第二部分 分子生物学实验指导 133
第四章 分子生物学实验一般原理 133
第一节 分子生物学概述 133
第二节 载体 136
第三节 分子生物学中常用的工具酶 147
第四节 基因组文库和cDNA文库的构建 152
第五节 DNA重组与鉴定 156
第六节 PCR基因扩增 162
第七节 DNA序列测定 175
第八节 外源基因的蛋白表达 183
第五章 学生实验(综合性、设计性实验) 194
实验一 总DNA的提取 194
实验二 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 199
实验三 PCR扩增及扩增产物的回收 201
实验四 DNA重组 204
实验五 CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞 207
实验六 重组质粒的转化及筛选 209
实验七 质粒DNA的提取及其定性定量分析 212
实验八 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和检测 215
实验九 重叠延伸PCR介导的定点突变 220
实验十 探针制备和Southern Blot 223
Ⅰ 核酸探针的制备 224
Ⅱ DNA杂交 225
实验十一 反向PCR 229
实验十二 总RNA提取和Northern Blot 232
Ⅰ 植物总RNA提取 233
Ⅱ RNA杂交 235
实验十三 反转录PCR和RACE 239
Ⅰ 反转录PCR(RT-PCR) 239
Ⅱ RACE 243
附录 250
参考文献 272