第一章 实验基本知识与基本操作 1
第一节 生物化学实验室规则 1
第二节 实验室安全和防护知识 2
第三节 基础实验操作技能 6
第四节 实验误差与提高实验准确度的方法 39
第五节 实验记录与实验报告 44
第二章 糖类物质的检测与分析 48
实验1 糖的呈色反应和还原糖的检验 48
实验2 苯酚-硫酸法测定总糖浓度 50
实验3 还原糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法 52
实验4 粗淀粉的测定——1%盐酸旋光法 54
实验5 血糖的测定 57
Ⅰ 磷钼酸比色法 57
Ⅱ 蒽酮比色法 59
Ⅲ 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD法) 61
实验6 糖酵解中间产物的鉴定 63
实验7 可溶性糖的硅胶G薄层层析 65
第三章 脂类物质的检测与分析 68
实验8 粗脂肪含量的测定——索氏抽提法 68
实验9 脂肪酸值的测定——碱滴定法 69
实验10 油脂皂化与皂化值的测定 72
实验11 碘价的测定(Hanus法) 73
实验12 血清胆固醇的测定 75
Ⅰ 化学比色法 75
Ⅱ 酶法 76
实验13 卵磷脂的提取与鉴定 78
实验14 脂肪酸的B-氧化 80
第四章 氨基酸的检测与分析 83
实验15 纸层析法分离鉴定氨基酸 83
实验16 甲醛滴定法测定氨基氮含量 85
实验17 瓦氏呼吸仪法测定L-谷氨酸的含量 87
第五章 蛋白质的分离制备与分析 91
实验18 蛋白质的两性反应与等电点的测定 91
实验19 蛋白质的沉淀反应、颜色反应及电荷的测定 93
实验20 蛋白质含量测定(一)——微量凯氏定氮法 97
实验21 蛋白质含量测定(二) 101
Ⅰ 双缩脲法 101
Ⅱ 考马斯亮蓝G-250法(Bradford法) 104
Ⅲ Folin试剂法 106
Ⅳ BCA法 108
Ⅴ 紫外(UV)吸收测定法 109
实验22 酪蛋白的制备 112
实验23 凝胶层析法分离蛋白质 113
实验24 血红蛋白的凝胶过滤 115
实验25 蛋白质相对分子质量的测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 118
实验26 血清蛋白质乙酸纤维素薄膜电泳 126
第六章 酶的分离制备与分析 130
实验27 酶的特性——底物专一性 130
实验28 pH值对酶活性的影响 132
实验29 温度对酶活性的影响 133
实验30 脲酶米氏常数的测定 135
实验31 糖化型淀粉酶活性的测定 138
实验32 脂肪酶活性测定 140
实验33 乳酸脱氢酶活性的测定 142
实验34 大麦萌发前后淀粉酶活性的测定 144
实验35 发色底物测定大曲中α-1,4-葡萄糖苷酶活性 147
第七章 维生素的检测分析 150
实验36 维生素B1的荧光测定 150
实验37 维生素B2的测定 152
实验38 植物中抗坏血酸含量的测定 155
实验39 维生素A的测定 156
第八章 核酸的分离与分析 160
实验40 哺乳动物基因组DNA的提取 160
实验41 植物基因组DNA的提取 162
实验42 植物总RNA的提取与电泳 165
实验43 酵母RNA的分离与组分鉴定 167
实验44 组织和细胞RNA的制备 170
实验45 核苷酸的纸电泳 172
实验46 紫外分光光度法测定核酸的含量 174
实验47 RNA与DNA的测定 176
实验48 DNA的琼脂糖凝胶电泳 179
实验49 质粒DNA的微量制备(碱裂解法、煮沸法) 182
实验50 质粒DNA的酶切鉴定及琼脂糖凝胶电泳 187
实验51 质粒DNA的大量制备与纯化 189
实验52 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 193
实验53 PCR基因扩增 198
第九章 综合性与设计性实验 200
实验54 鸡卵类黏蛋白的分离纯化 200
实验55 纤维素酶活性测定及pH值对其活性的影响 205
实验56 酪氨酸酶的提取及其催化活性研究 208
实验57 酵母蔗糖酶的纯化及性质研究 212
Ⅰ 酵母蔗糖酶的提取与纯化 212
Ⅱ 蔗糖酶Km值测定及脲的抑制作用 213
Ⅲ pH值对酶活性的影响和最适pH值的测定 217
Ⅳ 温度对酶活性的影响和反应活化能的测定 220
实验58 固定化酵母细胞及蔗糖酶活性的检测 222
实验59 温度、pH值、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响 224
实验60 溶菌酶结晶的制备及活性测定 226
实验61 转基因农产品的PCR检测 230
实验62 橘皮果胶的提取及果冻的制备 235
实验63 发酵过程中无机磷的利用和ATP的生成 236
附录 实验室中常用参数 239
参考文献 240