第一篇 生物化学与分子生物学实验基本技术 3
第一章 生物化学实验基本操作 3
第一节 实验室规则 3
第二节 基本实验操作 3
一、玻璃仪器的清洗 3
二、玻璃仪器的干燥 4
三、特殊污物的清洗 4
四、塑料器皿的清洗 4
五、刻度吸管的使用 4
六、可调式微量移液器的使用 5
七、溶液的混匀、加热、保温及冷却 6
第三节 常用实验仪器的使用 6
一、LD5-2A离心机的使用方法 6
二、Neofuge 13R台式高速冷冻离心机使用方法 7
三、紫外/可见分光光度计的使用方法 8
第四节 常用实验标本的制备 9
一、血液样本的收集 9
二、尿液样本的收集与保存 10
三、组织样品的制备 10
第五节 实验报告的书写 12
一、实验报告基本格式 12
二、书写实验报告应注意事项 12
第二章 分光光度技术 14
第一节 基本原理 14
一、光的一般知识 14
二、发射光谱与吸收光谱 15
三、朗伯-比尔定律 15
第二节 分光光度计的结构 16
一、光源 16
二、分光系统 17
三、狭缝 17
四、吸收池 17
五、检测系统 18
第三节 分光光度技术的应用 18
一、用于溶液中物质的定量测定 18
二、用于溶液中物质的定性测定 18
第三章 电泳技术 20
第一节 基本原理 20
一、电泳的概念 20
二、电泳的主要影响因素 21
第二节 电泳的分类 22
一、按分离目的分类 22
二、按分离原理分类 22
三、按支持介质分类 23
四、其他分类 23
第三节 常用电泳技术 23
一、纸电泳 23
二、乙酸纤维素薄膜电泳 23
三、琼脂糖凝胶电泳 24
四、聚丙烯酰胺凝胶电泳 25
五、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 26
六、等电聚焦电泳 27
七、双向电泳 28
八、毛细管电泳 28
九、单细胞凝胶电泳 29
十、脉冲场凝胶电泳 29
十一、特殊电泳 30
第四章 层析技术 32
第一节 基本知识 32
一、层析的基本概念 32
二、层析技术的分类 32
三、层析的基本原理 33
第二节 离子交换层析 34
一、基本原理 34
二、离子交换介质 34
三、分离过程 36
四、离子交换层析的应用 36
第三节 凝胶层析 37
一、基本原理 37
二、常用凝胶 38
三、凝胶层析的应用 39
第四节 亲和层析 40
一、基本原理 40
二、基质与配体的选择 40
第五节 高效液相色谱 42
一、基本概念 42
二、基本装置 42
第五章 离心技术 45
第一节 基本原理 45
一、离心机的力学原理 46
二、离心机的工作原理 47
第二节 离心机的类型 47
一、按速度分类 48
二、按用途分类 50
第三节 离心机使用及注意事项 51
一、离心机的使用 51
二、离心机使用及维护 51
三、离心过程留意观察 52
四、离心完毕后精心处理 53
五、使用完毕认真登记 53
六、离心机常见故障及排除方法 53
第六章 透析技术 54
第一节 透析原理及影响因素 54
第二节 透析技术的应用 55
第三节 透析操作及注意事项 55
第七章 生物大分子制备 57
第一节 细胞破碎及细胞器分离 57
一、细胞破碎 57
二、细胞器分离 58
第二节 生物大分子的分离与纯化 59
一、蛋白质（酶）的分离与纯化 59
二、核酸的分离与纯化 62
第三节 提纯后的处理 64
一、样品的浓缩 64
二、样品的干燥及贮存 64
第八章 分子生物学基本技术原理 66
第一节 核酸分子杂交 66
一、核酸分子杂交的基本理论 66
二、核酸分子探针 67
三、核酸分子杂交的种类与方法 70
第二节 DNA克隆技术基本原理 72
一、获取目的基因 74
二、构建基因载体 75
三、限制性内切核酸酶的作用 78
四、DNA分子重组 79
五、重组DNA分子导入宿主细胞 80
六、阳性重组体的筛选和鉴定 80
七、克隆基因的表达 82
第三节 聚合酶链反应 83
一、基本原理与方法 83
二、PCR技术的应用 84
第四节 实时定量PCR 85
一、Ct值定量原理 86
二、实时定量PCR荧光标记方法 87
三、实时定量PCR技术的应用 89
第五节 反转录PCR 89
一、模板RNA 90
二、反转录引物 90
三、反转录酶 90
四、离子强度 90
五、脱氧核苷三磷酸底物 91
第六节 Western印迹 91
一、蛋白质凝胶电泳 91
二、转膜 91
三、封闭 92
四、免疫杂交与显色 92
第二篇 生物化学与分子生物学教学实验 97
第九章 基本理论实验 97
实验一 蛋白质的沉淀、变性及等电点的测定 97
一、蛋白质的沉淀与变性 97
二、蛋白质等电点的测定 99
实验二 理化因素对唾液淀粉酶活性的影响 101
实验三 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 104
实验四 脂肪酸的β-氧化作用——酮体的生成和利用 106
实验五 血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（赖氏法） 108
第十章 基本技术实验 111
实验六 蛋白质的透析 111
实验七 蛋白质的定量测定（一）：酚试剂法（改良Lowry法） 112
实验八 蛋白质的定量测定（二）：紫外分光光度法 115
实验九 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 116
实验十 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 118
实验十一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 121
实验十二 肌肉组织氨基移换作用（纸层析法） 125
实验十三 胡萝卜素的柱层析分离 128
实验十四 碱性磷酸酶米氏常数的测定 129
第十一章 综合强化实验 134
实验十五 激素对血糖浓度的影响 134
一、血糖的定量测定——葡萄糖氧化酶法 134
二、胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 135
实验十六 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定 138
实验十七 核酸的制备及测定 141
第十二章 分子克隆技术基础实验 148
实验十八 质粒DNA的提取（碱裂解法） 148
实验十九 限制性核酸内切酶对质粒DNA的酶切作用 150
实验二十 DNA的琼脂糖凝胶电泳 151
实验二十一 感受态细菌的制备及质粒DNA的转化 154
实验二十二 核酸的分子杂交 156
实验二十三 聚合酶链反应体外扩增DNA（PCR） 159
实验二十四 反转录-聚合酶链反应（RT-PCR） 162
实验二十五 实时定量PCR （Real-time PCR） 166
实验二十六 蛋白质印迹（Western hlotting） 179
第十三章 学生设计性实验 185
第一节 设计性实验概述 185
一、设计性实验的概念 185
二、学生设计性实验的基本程序 185
第二节 设计性实验的选题和设计 186
一、设计性实验的选题 186
二、实验设计与实施 186
第三节 数据的记录与处理 189
一、实验研究的观察记录 189
二、实验数据的处理 189
第四节 实验报告和论文的撰写 190
一、实验报告的撰写 190
二、科研论文撰写 191
第五节 设计性实验教学组织案例 193
第三篇 生物化学与分子生物学常用资料及数据 199
第十四章 化学试剂分级及注意事项 199
第一节 一般化学试剂的分级 199
一、化学试剂的分级 199
二、易变质及需要特殊方法保存的试剂 199
第二节 试剂配制的一般注意事项 200
第十五章 常用试剂配制 201
第一节 生物化学与分子生物学实验中常用试剂的配制 201
一、有机试剂的配制 201
二、细菌培养基和抗生素的配制 201
三、生化实验中常用缓冲液配制 203
四、常用电泳缓冲液 204
五、常用凝胶上样缓冲液的配制 204
六、常用贮存液的配制 205
七、细菌的保存 207
第二节 重铬酸洗液的配制与再生 207
附录 常用的生物化学与分子生物学相关网站 209
一、国内网站 209
二、国外网站 209