第一章 腺相关病毒特性 1
第一节 腺相关病毒的基本生物学特征 1
第二节 腺相关病毒的种类 2
一、腺相关病毒的主要血清型 2
二、腺相关病毒的主要亚型 4
三、腺相关病毒的主要变种 4
第三节 腺相关病毒的结构特征 5
一、腺相关病毒的基因组结构 5
二、腺相关病毒的衣壳结构 6
第四节 腺相关病毒的生活周期 8
一、腺相关病毒的感染机制与胞内过程 8
二、腺相关病毒的核内行为 13
三、腺相关病毒的整合 15
参考文献 16
第二章 重组腺相关病毒载体 24
第一节 载体构建 24
一、工作原理 24
二、自身互补性腺相关病毒载体 25
三、腺相关病毒／腺相关病毒杂合载体 26
四、腺相关病毒／非腺相关病毒嵌合载体 26
第二节 包装容量 33
一、腺相关病毒载体 33
二、自身互补性腺相关病毒载体 34
三、反式拼接腺相关病毒载体 34
四、异种病毒的嵌合载体 34
第三节 表达效率优化 35
一、衣壳蛋白改造 35
二、基因组改造 38
三、注射前或注射时添加辅助药物 40
四、提高腺相关病毒载体在血液中的稳定性 40
五、调控细胞内的传递过程 41
六、利用RNA技术控制核内行为 42
七、免疫抑制剂降低免疫反应 42
八、加速基因组单双链转变过程 42
第四节 靶向调控与靶向修饰 44
一、衣壳蛋白基因工程改造 44
二、转录水平靶向调控 45
三、化学修饰提高腺相关病毒载体的靶向性 50
参考文献 53
第三章 重组腺相关病毒载体制备与纯化 60
第一节 包装所需的元件 60
一、重组腺相关病毒载体元件 60
二、辅助病毒元件 61
三、包装细胞系 62
第二节 包装技术 62
一、病毒辅助法 62
二、质粒转染法 63
三、病毒感染＋细胞系法 64
四、病毒感染法 64
第三节 分离与纯化技术 65
一、细胞裂解 65
二、分离纯化 66
第四节 重组腺相关病毒载体规模化生产 69
一、转染法 69
二、病毒感染法 69
三、杆状病毒／昆虫细胞生产体系 70
四、重组腺相关病毒载体规模化生产的发酵生物反应器 70
参考文献 71
第四章 重组腺相关病毒载体质量控制与标准化 74
第一节 重组腺相关病毒作产品的质量研究概况 74
一、重组腺相关病毒载体的鉴定与表征技术 74
二、不同血清型的鉴定 75
三、纯度检测 76
四、杂质控制 77
五、滴度检测 80
第二节 重组腺相关病毒载体生产的质量控制 85
一、重组腺相关病毒载体质量控制的基本要求 85
二、重组腺相关病毒载体制备和生产的质量控制 85
三、重组腺相关病毒载体制备过程的质量控制 86
四、质量监测和质量检查 87
附：重组腺相关病毒载体的相关标准物质的质量标准 90
参考文献 91
第五章 重组腺相关病毒载体给药途径与药代动力学 95
第一节 全身给药 96
一、静脉注射 96
二、动脉注射 96
第二节 局部给药 97
一、肌内注射 97
二、肿瘤内注射 99
三、脑内注射 99
四、玻璃体内注射 100
五、肝静脉注射 101
第三节 口服给药 102
一、胃肠道吸收重组腺相关病毒载体的机制 103
二、口服给药后重组腺相关病毒载体在体内的分布 103
三、口服重组腺相关病毒基因药物的生物药剂学 104
第四节 小结 105
参考文献 105
第六章 重组腺相关病毒载体的安全性 109
第一节 腺相关病毒载体与染色体整合的机制及其潜在安全性 109
一、定点整合与基因治疗 109
二、野生型腺相关病毒载体基因组与宿主染色体的整合机制 109
三、重组腺相关病毒载体基因组与宿主染色体的整合作用与安全风险 111
四、重组腺相关病毒载体基因组整合作用的解决策略 113
第二节 重组腺相关病毒载体的免疫反应 114
一、免疫反应概述 114
二、针对重组腺相关病毒载体的固有免疫反应 117
三、针对重组腺相关病毒载体的获得免疫反应 122
四、重组腺相关病毒载体的免疫耐受 125
五、克服重组腺相关病毒载体免疫原性的策略 127
参考文献 137
第七章 重组腺相关病毒载体药效学与临床研究 145
第一节 重组腺相关病毒载体在眼科疾病中的应用 145
一、影响重组腺相关病毒载体在眼科疾病中基因转导效率的因素 145
二、重组腺相关病毒载体在眼科疾病基因治疗中的应用 147
三、展望 149
第二节 重组腺相关病毒载体载体在肿瘤基因治疗中的应用 149
一、重组腺相关病毒载体介导的抗肿瘤血管生成 149
二、重组腺相关病毒载体介导的自杀基因治疗 149
三、重组腺相关病毒载体介导的RNA干扰 150
四、重组腺相关病毒载体介导的抗体药物和β干扰素 150
五、重组腺相关病毒载体介导的免疫治疗 150
六、重组腺相关病毒载体介导的联合治疗 150
七、存在的问题与展望 150
第三节 重组腺相关病毒载体在神经系统疾病的应用研究 151
一、重组腺相关病毒载体的神经系统应用特性 151
二、重组腺相关病毒载体对于神经系统疾病的基因治疗 152
三、重组腺相关病毒在帕金森病中的应用 153
四、重组腺相关病毒载体在阿尔茨海默病中的应用 153
五、重组腺相关病毒载体在癫痫病中的应用 154
六、重组腺相关病毒载体在肌萎缩侧索硬化中的应用 155
七、重组腺相关病毒载体在脊髓损伤中的应用 156
八、重组腺相关病毒载体在周围神经系统的应用 157
九、重组腺相关病毒载体在溶酶体贮积症引起的神经系统病变中的应用 157
第四节 重组腺相关病毒载体在血液系统疾病中的应用研究 158
一、血液系统及血友病 158
二、血友病的重组腺相关病毒载体基因治疗 158
三、展望 160
第五节 皮肤与肌肉系统疾病 160
一、重组腺相关病毒治疗肌肉系统疾病现状 160
二、重组腺相关病毒治疗皮肤系统疾病现状 162
三、存在问题与展望 163
第六节 重组腺相关病毒载体在关节炎中的应用研究 163
一、动物模型 163
二、治疗策略 164
三、以重组腺相关病毒载体为基础的治疗研究 166
四、增加表达 168
五、临床试验 168
七、未来运用重组腺相关病毒载体治疗关节炎的临床试验展望 169
第七节 重组腺相关病毒载体在器官纤维化中的应用研究 170
一、重组腺相关病毒载体与肝纤维化治疗研究 170
二、重组腺相关病毒载体与心肌纤维化治疗研究 170
第八节 重组腺相关病毒载体在干细胞领域的研究 171
第九节 重组腺相关病毒载体在糖尿病治疗中的应用 172
一、重组腺相关病毒载体用于1型糖尿病的治疗 173
二、重组腺相关病毒载体用于2型糖尿病的治疗 174
三、重组腺相关病毒载体用于糖尿病并发症的治疗 176
第十节 重组腺相关病毒载体在常见的呼吸系统疾病基因治疗中的应用 177
一、重组腺相关病毒载体靶向作用-肺泡 177
二、重组腺相关病毒载体靶向作用-治疗气道疾病 178
三、重组腺相关病毒载体靶向作用肺血管系统和胸膜 180
四、未来方向 180
第十一节 其他疾病 181
一、对肾脏疾病的研究 181
二、对心血管疾病的研究 182
三、对遗传代谢病的研究 183
参考文献 186
索引 198