绪论 5
一、学习目标 5
二、实验室规则 6
三、实验报告 6
第一章 量器的使用、校正与实验数据的处理 15
一、常用量器的使用规则 15
二、常用量器容量的校正 16
三、实验误差与数据处理 17
实验一 移液管和微量可调式移液器的使用、校正与数据处理 19
第二章 分光光度技术 29
一、光吸收的基本知识 29
二、光吸收的基本定律 30
三、吸光度的测量 31
四、定量分析方法 33
实验二 分光光度法测定未知溶液的浓度 33
第三章 层析技术 48
一、层析技术的基本原理、特点与分类 48
二、常用的层析方法 49
三、柱层析的基本装置和基本操作 51
实验三 Sephadex G-25凝胶层析 53
实验四 氨基酸的离子交换层析分离 54
第四章 电泳技术 76
一、电泳的基本原理 76
二、电泳的分类 78
三、常用的电泳技术 78
四、蛋白质与核酸的染色方法 81
实验五 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 81
实验六 血清蛋白质垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳 83
实验七 DNA的琼脂糖凝胶电泳 86
第五章 酶活力测定与酶法分析 101
一、酶活力测定 101
二、酶法分析 103
实验八 血清碱性磷酸酶活力的测定(磷酸苯二钠法) 105
实验九 血清葡萄糖浓度的测定(GOD-POD法) 107
实验十 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 109
第六章 临床常用生物化学检验 139
一、血清蛋白质含量的测定 139
实验十一 血清总蛋白的测定(双缩脲法) 139
实验十二 血清白蛋白的测定(溴甲酚绿法) 141
二、血清葡萄糖含量的测定 143
实验十三 血清葡萄糖的测定(邻甲苯胺法) 143
实验十四 口服葡萄糖耐量试验(OGTT) 145
实验十五 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响 146
三、血清脂类物质的测定 147
实验十六 血清三酰甘油的测定(GPO-PAP法) 148
实验十七 血清总胆固醇的测定(胆固醇氧化酶法) 149
实验十八 血浆高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-Ch)的测定 151
四、肝功能的相关检测 153
实验十九 血清谷丙转氨酶活力的测定(改良赖氏法) 153
实验二十 血清总胆红素和直接胆红素的测定(改良J-G法) 156
五、肾功能的相关检测 158
实验二十一 血清尿素的测定(脲酶比色法) 158
实验二十二 血清尿酸的测定(酶偶联法) 160
第七章 血清白蛋白的纯化与鉴定 172
实验二十三 盐析与葡聚糖凝胶G-25凝胶层析脱盐 173
实验二十四 DEAE-纤维素离子交换层析 175
实验二十五 蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝G-250染色法) 176
实验二十六 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 177
第八章 重组DNA的构建及其在大肠埃希菌中的诱导表达 200
实验二十七 人外周血白细胞DNA的提取 201
实验二十八 药用植物DNA的提取 202
实验二十九 目的基因的PCR扩增 203
实验三十 质粒DNA的小量快速提取(碱裂解法) 205
实验三十一 目的基因与载体的限制性双酶切 207
实验三十二 目的基因片段与载体的连接 208
实验三十三 大肠埃希菌感受态细胞的制备、转化与筛选 209
实验三十四 外源基因在大肠埃希菌中的诱导表达和SDS-PAGE检测 212
实验三十五 蛋白质印迹法检测表达蛋白 213
附录 常用生物化学仪器使用方法 216
Ⅰ 721E型分光光度计 216
Ⅱ HD-3型紫外检测仪 217
Ⅲ BSZ-100型自动部分收集器 218
Ⅳ LM17型记录仪 218
Ⅴ DYY-6C型电泳仪 219
Ⅵ Adventurer系列电子天平 220
Ⅶ H-1650型离心机 221
Ⅷ PTC-150型PCR仪 221
参考文献 223