第一章 实验室管理和安全准则 1
一、实验室一般要求 1
二、生物技术实验室规则 1
三、生物技术实验室的安全管理与注意事项 2
四、实验室意外事故的紧急处理 4
第二章 生物技术实验常用仪器及操作规范 7
一、玻璃器皿 7
二、塑料制品 10
三、过滤装置 12
四、微量移液器及吸头 13
五、pH计 14
六、天平 14
七、离心机 15
八、恒温箱 16
九、振荡设备 19
十、超净工作台 20
十一、生物安全柜 20
十二、纯水仪 21
十三、灭菌设备 21
十四、紫外-可见分光光度计 24
十五、热循环仪 25
十六、电泳仪 26
十七、凝胶成像系统 28
十八、流式细胞仪 29
十九、超声细胞破碎仪 31
二十、制冰机 32
二十一、液氮罐 33
二十二、冰箱 33
二十三、真空离心浓缩仪 33
二十四、基因枪 34
二十五、新一代高通量测序技术 34
第三章 显微观察技术 36
一、普通光学显微镜 36
二、相差显微镜 39
三、倒置显微镜 40
四、荧光显微镜 40
五、激光扫描共聚焦显微镜 42
六、透射电子显微镜 44
七、扫描电子显微镜 46
实验一 细菌显微形态特征观察 48
实验二 丝状真菌显微形态特征观察 49
实验三 酵母菌显微形态特征观察 51
实验四 酵母细胞大小和数量的测定 53
第四章 缓冲液、培养基的配制及灭菌技术 58
一、溶液的配制 58
二、化学品和废弃缓冲液的处理 60
三、仪器 60
实验一 MS培养基的配制 60
实验二 LB培养基的配制 63
第五章 核酸分析技术 66
一、储存 66
二、纯化-除去核酸中的蛋白质 67
三、核酸的定量 67
四、浓缩沉淀 67
五、DNA酶切反应 68
六、DNA连接 69
七、电泳 70
八、聚合酶链式反应 71
实验一 碱裂解法提取质粒DNA 74
实验二 DNA的琼脂糖凝胶电泳 76
实验三 细菌基因组DNA的提取和鉴定 78
实验四 酿酒酵母总DNA的提取 80
实验五 植物基因组DNA提取 82
实验六 动物组织DNA的提取 83
实验七 采用Trizol溶液提取细菌总RNA 84
实验八 动物组织mRNA的提取 86
实验九 DNA的酶切 88
实验十 DNA的连接 89
实验十一 脉冲场凝胶电泳（PFGE） 91
实验十二 RNA琼脂糖变性胶电泳分析 94
实验十三 真菌ITS序列的PCR扩增 95
实验十四 菌落PCR 98
实验十五 DD-PCR技术 99
实验十六 实时定量PCR 103
实验十七 Southern印迹杂交 107
实验十八 Northern杂交技术 111
实验十九 原位杂交 114
第六章 蛋白分析技术 119
一、选择沉淀 119
二、蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 119
三、双向凝胶电泳 120
四、蛋白浓度检测 120
实验一 植物中叶片蛋白质的提取 120
实验二 动物组织蛋白质的提取 122
实验三 蛋白质的定量（BCA法） 124
实验四 蛋白质SDS-PAGE电泳 125
实验五 蛋白质双向电泳 129
实验六 Western Blotting 134
实验七 酶联免疫吸附实验 137
实验八 免疫组化实验 141
第七章 组织与细胞培养技术 144
一、动物组织培养 144
二、植物组织培养 145
实验一 哺乳动物细胞的原代培养 146
实验二 哺乳动物细胞的传代培养 148
实验三 哺乳动物细胞的冻存与复苏 149
实验四 哺乳动物细胞的融合 151
实验五 兔脾细胞悬液的制备 152
实验六 小鼠脾细胞培养实验 153
实验七 胡萝卜愈伤组织的培养 155
实验八 植物原生质体的制备 157
实验九 原生质体分离与融合 158
第八章 微生物培养 160
一、细菌培养 160
二、真核微生物的培养 160
实验一 药植土壤中根际微生物的分离与计数 160
实验二 细菌生长曲线的测定 162
实验三 酿酒酵母海藻酸钙的细胞固定化 164
第九章 转基因技术 166
一、细菌转基因 166
二、酵母菌转基因 167
三、植物转基因 167
四、动物转基因 169
实验一 CaCl2法制备感受态细胞 170
实验二 质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞 171
实验三 电转化法制备细菌感受态细胞 172
实验四 基因枪法转化油菜愈伤组织 174
实验五 农杆菌介导的植物遗传转化 177
实验六 逆转录病毒感染法制备转基因细胞 178
实验七 显微注射法制备转基因小鼠 182
第十章 诱变技术 192
实验一 大肠杆菌的紫外诱变 192
实验二 氨基酸营养缺陷型突变株的筛选 194
第十一章 生物活性物质的分离与检测 196
实验一 抗生素的微生物检定法 196
实验二 牛乳中酪蛋白的制备 198
实验三 γ-球蛋白的分离 199
实验四 大蒜SOD的分离提取与活力测定 201
实验五 滑菇多糖的提取制备和鉴定 202
实验六 凝血酶的制备 204
第十二章 综合实验 206
实验一 基因组DNA文库的构建 206
实验二 突变细胞基因差异表达的研究 209
附录 221
主要参考文献 240