1 肉质性状研究进展 1
1.1 肉质的相关指标及评定标准 1
1.1.1 肉色 1
1.1.2 pH 2
1.1.3 系水力 2
1.1.4 肌内脂肪 3
1.1.5 嫩度 3
1.1.6 典型异常肉 3
1.2 肉质的影响因素 4
1.2.1 品种对肉质的影响 4
1.2.2 主效基因对肉质的影响 5
1.2.3 肌纤维特性对肉质的影响 6
1.2.4 营养对肉质的影响 9
1.2.5 矿物质对肉质的影响 12
1.2.6 维生素对肉质的影响 15
1.2.7 饲养管理因素对肉质的影响 16
2 肉质性状候选基因研究进展 17
2.1 钙蛋白酶家族 18
2.1.1 μ-calpain和m-calpain 18
2.1.2 钙蛋白酶家族的其他成员 24
2.1.3 钙蛋白酶抑制蛋白 28
2.1.4 钙蛋白酶激活蛋白 30
2.1.5 钙蛋白酶家族在肉质嫩化中的作用 31
2.2 与肌纤维特性有关的候选基因 33
2.2.1 MyoD家族 33
2.2.2 myostatin基因 37
2.3 与能量代谢、脂肪沉积有关的候选基因 38
2.3.1 MCRs家族 38
2.3.2 ACSL4基因 40
2.3.3 LPL基因 41
2.3.4 FABP家族 42
2.3.5 ob基因及其产物 44
2.3.6 PPAR基因 46
2.4 与风味有关的候选基因——AMPD1基因 48
3 钙蛋白酶家族基因遗传分析 50
3.1 材料与方法 50
3.1.1 实验动物组织样 50
3.1.2 主要仪器设备 50
3.1.3 主要药品和酶 51
3.1.4 缓冲液及主要溶液的配制 51
3.1.5 耳组织样DNA的提取与检测 52
3.1.6 组织样总RNA的提取与检测 53
3.1.7 引物设计与合成 54
3.1.8 猪CAPN7、CAPN10 基因cDNA的克隆 59
3.1.9 猪CAPN1、CAPN3、CAPN7基因组DNA部分片段的克隆 65
3.1.10 半定量RT-PCR分析 66
3.1.11 竞争性RT-PCR分析 67
3.1.12 PCR-SSCP检测 67
3.1.13 PCR-RFLP分析 70
3.1.14 基因多态性统计方法 70
3.1.15 生物信息学分析 71
3.2 结果与分析 72
3.2.1 克隆与序列分析 72
3.2.2 表达特性分析 92
3.2.3 遗传多样性分析 104
3.3 讨论 116
3.3.1 克隆 116
3.3.2 CAPN基因的半定量RT-PCR分析 118
3.3.3 CAPN10两个变异剪接体的竞争性RT-PCR分析 121
3.3.4 野猪CAPN1、CAPN7、CAPN10基因的表达谱分析 122
3.3.5 猪CAPNs基因的SNP检测及种间分布规律 122
3.3.6 关于取样、RNA提取和反转录反应 126
3.4 结论 127
4 肉质性状其他5个候选基因遗传分析 129
4.1 材料与方法 129
4.1.1 实验动物组织样 129
4.1.2 主要仪器设备 129
4.1.3 主要药品和酶 129
4.1.4 缓冲液及主要溶液的配制 129
4.1.5 耳组织样DNA的提取与检测 129
4.1.6 总RNA的提取与检测 129
4.1.7 引物设计与合成 130
4.1.8 cDNA克隆 132
4.1.9 基因组DNA克隆 133
4.1.10 半定量RT-PCR分析 133
4.1.11 PCR-SSCP分析 133
4.1.12 PCR-RFLP分析 133
4.2 结果与分析 133
4.2.1 猪AMPD1基因的遗传分析 133
4.2.2 猪MC3R基因的遗传分析 142
4.2.3 猪MC4R基因的遗传分析 146
4.2.4 猪ACSL4基因的遗传分析 148
4.2.5 猪LPL基因的遗传分析 152
4.3 讨论 154
4.3.1 猪AMPD1基因的遗传分析 154
4.3.2 猪MCRs基因的多态性分析 155
4.3.3 猪ACSL4基因的多态性分析 156
4.3.4 猪LPL基因的多态性分析 157
4.4 结论 157
参考文献 159