第一章 绪论 1
第一节 组织化学发展的基础 1
一、细胞生物学发展与组织化学 1
二、生物化学发展与组织化学 1
三、免疫学发展与组织化学 2
四、分子生物学发展与组织化学 2
第二节 组织化学发展简史 2
一、组织化学的兴起 2
二、早期组织化学的发展 3
三、现代组织化学的发展 3
四、我国组织化学发展概况 4
第三节 组织化学技术分类与基本要求 5
一、组织化学技术分类 5
二、组织化学技术的基本要求 5
第二章 标本制备 6
第一节 取材 6
一、组织标本取材 6
二、细胞标本取材 7
第二节 固定 7
一、常用固定剂 7
二、固定方法 10
三、培养细胞常用固定剂和使用方法 11
四、组织固定后的洗涤 11
第三节 包埋 11
一、石蜡包埋 12
二、火棉胶包埋 13
三、树脂包埋 13
第四节 切片 13
一、石蜡切片 13
二、冷冻切片 14
三、振动切片 15
四、火棉胶切片 16
五、防脱片处理 16
第五节 非切片标本制备 16
一、细胞涂片标本 16
二、组织分离标本 17
三、组织磨片标本 18
四、整体封存标本 18
五、组织铺片标本 18
第六节 标本封固 18
一、封固剂 18
二、封固方法 19
第七节 组织芯片技术 20
一、组织芯片的制备 20
二、组织芯片结果分析 22
三、组织芯片的优点与问题 22
第八节 显微切割技术 23
一、显微切割方式 23
二、激光显微切割原理 23
三、显微切割的材料准备 25
四、激光显微切割技术的特点 25
第三章 常用组织学染色技术 27
第一节 苏木精-伊红染色 27
一、苏木精 27
二、伊红 29
三、苏木精-伊红染色方法 29
第二节 常用特殊染色方法 31
一、镀银染色 32
二、尼氏染色 35
三、Wright和Giemsa染色 37
四、铁苏木精染色 40
五、异染性染色 40
六、三色法染色 41
七、弹性纤维染色 43
第四章 光学显微镜技术 46
第一节 普通光学显微镜 46
一、普通光学显微镜的结构 46
二、光学显微镜照明技术 51
三、普通光学显微镜成像原理 52
四、普通光学显微镜的光学参数 53
五、普通光学显微镜操作方法 54
第二节 倒置显微镜 55
第三节 相差显微镜 56
一、相差显微镜的结构与成像原理 56
二、相差显微镜的操作方法 57
第四节 微分干涉相差显微镜 58
一、微分干涉相差显微镜的原理及结构 58
二、微分干涉相差显微镜的成像光路系统调整方法 59
三、注意事项 59
第五节 霍夫曼显微镜 59
一、霍夫曼显微镜的结构 60
二、霍夫曼显微镜成像原理 60
第六节 暗视野显微镜 60
一、暗视野显微镜的结构特点与成像原理 60
二、暗视野显微镜使用方法 61
第七节 荧光显微镜 61
一、荧光基础知识 61
二、荧光显微镜的结构和成像原理 64
三、荧光显微镜的操作方法和注意事项 66
四、全内反射荧光显微镜 67
五、超分辨率显微镜 68
第五章 电子显微镜技术 72
第一节 透射电子显微镜技术 72
一、透射电镜术的基本原理 72
二、超薄切片技术 73
三、观察与记录 80
四、冷冻超薄切片技术 81
五、冷冻断裂技术 83
第二节 扫描电子显微镜技术 84
一、扫描电镜术的基本原理 84
二、扫描电镜生物样品制备基本方法 85
三、特殊扫描电镜生物样品制备方法 88
第六章 组织化学技术 90
第一节 核酸组织化学技术 90
一、Feulgen反应 90
二、甲基绿-派洛宁染色 91
三、核酸荧光染色 92
第二节 碳水化合物组织化学技术 96
一、过碘酸-雪夫（PAS）反应 96
二、阿利新蓝染色法 97
第三节 脂类组织化学技术 98
一、物理显色法 99
二、化学显色法 100
第四节 酶组织化学技术 101
一、酶组织化学基本原理 101
二、常用酶显示方法 101
三、常用酶组织化学技术 102
四、酶组织化学染色注意事项 111
第五节 凝集素组织化学技术 112
一、凝集素的标记物 112
二、染色步骤 112
第六节 生物胺荧光组织化学技术 113
一、Falek-Hillarp甲醛诱发荧光法 113
二、乙醛酸诱发生物单胺荧光法 114
三、邻苯二醛显示组胺荧光法 115
第七章 免疫组织化学技术 116
第一节 免疫组织化学技术概述 116
一、免疫组织化学技术的基本原理 116
二、免疫组织化学技术特点 118
三、免疫组织化学技术分类 118
四、免疫组织化学标本制备特点 119
五、抗原修复 121
六、免疫组织化学技术对照实验 122
第二节 免疫荧光组织化学技术 122
一、免疫荧光组织化学技术基本原理 122
二、免疫荧光组织化学基本方法 123
三、间接法免疫荧光单标染色操作步骤 123
四、免疫荧光染色标本的复染 124
五、非特异性荧光染色的抑制或消除 124
第三节 免疫酶组织化学技术 124
一、免疫酶组织化学基本原理 125
二、免疫酶组织化学基本方法 125
三、常用免疫酶组织化学技术操作步骤 127
四、免疫酶组织化学染色注意事项 128
第四节 亲和免疫组织化学技术 128
一、亲和免疫组织化学技术基本原理 128
二、亲和免疫组织化学技术基本方法 129
三、亲和免疫组织化学技术操作步骤 130
第五节 免疫金组织化学技术 131
一、免疫胶体金技术 131
二、蛋白A胶体金技术 132
三、免疫金银染色 132
四、光镜免疫胶体金技术操作步骤 133
第六节 应用与标本同种属第一抗体的免疫组织化学技术 135
一、第一抗体半抗原化法 135
二、未结合Fab片段预孵育阻断法 136
第七节 免疫组织化学增敏方法 136
一、多聚螯合物酶法 136
二、催化信号放大系统 138
第八节 双重或多重免疫组织化学染色技术 139
一、双重或多重免疫组织化学基本方法 139
二、常用双重免疫组织化学染色步骤 147
三、双重或多重免疫组织化学染色注意事项 150
第九节 免疫组织化学结果评价 151
一、免疫组织化学染色结果判断原则 151
二、非特异性染色 151
三、常见问题与处理方法 152
第八章 原位杂交组织化学技术 155
第一节 原位杂交组织化学基本原理 155
一、核酸化学组成与基本结构 155
二、DNA变性与复性 156
三、核酸分子杂交 157
四、核酸分子探针 157
五、原位杂交组织化学技术的基本类型 162
第二节 原位杂交组织化学技术的基本方法 163
一、标本制备 163
二、杂交前处理 164
三、杂交反应 165
四、杂交后处理 166
五、杂交体检测 166
第三节 荧光原位杂交技术 167
一、荧光原位杂交探针 167
二、荧光原位杂交技术类型 168
三、多色荧光原位杂交技术 168
第四节 原位PCR技术 169
一、原位PCR的基本原理 169
二、原位PCR技术类型 169
三、原位PCR技术特点 170
第五节 整胚原位杂交技术 170
第六节 双重和多重原位杂交技术 172
一、放射性核素和非放射性标记探针的双重标记原位杂交 172
二、非放射性标记探针的双重标记原位杂交 172
三、两种放射性核素标记探针的双重标记原位杂交 173
第七节 原位杂交结合免疫组织化学技术 173
一、原位杂交在先 173
二、免疫组织化学在先 174
第八节 电镜原位杂交技术 174
一、电镜原位杂交的特点 174
二、电镜原位杂交技术类型 175
第九节 原位杂交组织化学技术进展 175
一、原位启动标记技术 176
二、肽-核酸原位杂交技术 176
三、锁链探针原位杂交技术 177
第十节 常用原位杂交技术实验步骤 177
一、放射性核素标记DNA探针检测石蜡切片DNA 177
二、地高辛标记cRNA探针冷冻切片mRNA检测 178
三、染色体荧光原位杂交 179
四、原位逆转录PCR 180
第十一节 原位杂交组织化学结果评价 181
一、对照实验 181
二、常见问题与对策 182
第九章 电镜组织化学与免疫电镜技术 183
第一节 电镜酶细胞化学技术 183
一、电镜酶细胞化学基本原理 183
二、电镜酶细胞化学标本制备 183
三、电镜酶细胞化学结果观察 184
四、常用电镜酶细胞化学方法 184
第二节 免疫电镜技术 186
一、免疫电镜技术的特点 187
二、常用免疫电镜技术 189
第十章 神经束路示踪技术 201
第一节 轴质运输示踪技术 201
一、辣根过氧化物酶示踪法 202
二、植物凝集素示踪法 204
三、葡聚糖胺示踪法 205
四、霍乱毒素示踪法 206
五、荧光素示踪法 206
六、病毒示踪法 208
七、放射自显影示踪法 210
第二节 变性示踪技术 211
一、变性方法 211
二、变性神经元鉴定 212
第三节 电镜示踪技术 215
一、正常与变性神经成分的鉴定 215
二、电镜放射自显影示踪 216
三、HRP法电镜示踪 217
四、生物素化葡聚糖胺法电镜示踪 217
第四节 双重或多重神经束路示踪技术 218
一、双重或多重示踪的基本类型 218
二、双重或多重示踪注意事项 221
第十一章 激光扫描共聚焦显微镜术 223
第一节 激光扫描共聚焦显微镜技术的基本原理 223
一、激光扫描共聚焦显微镜的基本结构 223
二、激光扫描共聚焦显微镜的工作原理 225
三、激光扫描共聚焦显微镜的主要类型 225
四、激光扫描共聚焦显微镜图像采集和成像模式 228
第二节 激光扫描共聚焦显微镜实验技术 228
一、标本制备 228
二、荧光标记 229
三、结果判断与问题分析 231
四、激光扫描共聚焦显微镜操作方法 232
第三节 激光扫描共聚焦显微镜的主要应用 233
一、组织细胞化学成分的定性、定位和定量分析 233
二、生物结构的光学切片与三维重建 236
三、活细胞内离子和pH值动态测定 237
四、荧光漂白恢复技术 241
五、荧光能量共振转移技术 243
第十二章 流式细胞术 247
第一节 流式细胞仪 247
一、流式细胞仪的发展 247
二、流式细胞仪的基本结构 248
三、流式细胞仪的工作原理 251
第二节 流式细胞术样本制备 252
一、单细胞悬液制备 252
二、染色 254
第三节 流式细胞术数据处理与分析 255
一、数据采集 255
二、数据存储 256
三、数据分析 256
第四节 流式细胞术的应用 260
一、细胞表面标志物检测 260
二、细胞内蛋白质检测 261
三、DNA含量检测与细胞周期分析 263
四、细胞凋亡检测 265
五、细胞分选 267
第十三章 组织化学与细胞化学定量分析技术 268
第一节 显微图像分析技术 268
一、显微图像分析系统 268
二、显微图像分析原理 268
三、显微图像分析方法 269
四、图像分析软件在组织化学与细胞化学定量分析中的应用 271
五、显微图像分析注意事项 280
第二节 体视学 280
一、体视学的基本原理 281
二、常用体视学方法 287
第十四章 显微摄影技术 299
第一节 摄影基础 299
一、照相机镜头 299
二、感光胶片 302
三、反差 303
四、曝光控制 303
五、色温 304
六、滤色镜的应用 304
第二节 显微摄影基本方法 305
一、物镜和目镜的选用 305
二、光路合轴 306
三、光阑调节 306
四、感光片的选用 307
五、曝光补偿 307
六、显微摄影的基本步骤 308
七、特殊显微摄影技术 309
八、显微照片放大倍数的计算 309
第三节 数码显微摄影技术 310
一、数码摄影基础 310
二、数码显微摄影装置 313
三、数码显微摄影基本方法 313
第十五章 组织化学与细胞化学技术实验指导 316
实验一 组织标本石蜡切片和冷冻切片制备与HE染色 316
一、石蜡切片制备 316
二、冷冻切片标本制备 317
三、HE染色 318
实验二 DNA荧光组织化学染色 318
一、DNA的Hoechst 33258荧光组织化学染色 318
二、DNA的DAPI荧光组织化学染色 319
实验三 脂类的异丙醇油红O法染色 320
实验四 碱性磷酸酶和酸性磷酸酶组织化学染色 320
一、钙-钴法显示碱性磷酸酶 320
二、偶联-偶氮色素法显示酸性磷酸酶 321
实验五 胆碱酯酶Karnovsky-Roots法染色 321
实验六 一氧化氮合酶的还原型辅酶Ⅱ-黄递酶染色法 322
实验七 SABC法免疫组织化学染色与间接法双重免疫荧光染色 322
一、免疫组织化学SABC法染色 322
二、间接法双重免疫荧光染色 323
实验八 半抗原标记cRNA探针原位杂交组织化学染色 324
实验九 大鼠中缝大核向脊髓背角和延髓背角分支投射的双重荧光逆行示踪 326
附录一 组织化学与细胞化学染色常用试剂配制 327
附录二 原位杂交组织化学试剂配制 331