第一章 胸腺和法氏囊研究进展及展望 1
1 胸腺肽研究进展 1
1.1 胸腺五肽 2
1.2 胸腺素α1 4
1.3 胸腺素β4 6
2 法氏囊活性肽 8
2.1 法氏囊活性肽BP5 10
参考文献 13
第二章 法氏囊五肽在鸡体内免疫学活性研究 19
1 材料与方法 21
1.1 材料 21
1.2 方法 22
2 结果 25
2.1 HI抗体动态变化分析 25
2.2 细胞因子分析 25
2.3 淋巴细胞增殖能力分析 26
2.4 免疫保护力分析 27
3 讨论 27
小结 30
参考文献 31
第三章 法氏囊活性五肽BP5免疫调节机理的研究 35
1 材料与方法 36
1.1 材料 36
1.2 方法 37
2 结果 43
2.1 BP5显著提高了抗原特异性免疫反应 43
2.2 BP5显著提高了小鼠脾淋巴细胞的增殖能力 47
2.3 BP5能够直接增加B细胞增殖而间接增加T细胞的增殖 48
2.4 BP5诱导B细胞增殖是通过活性氧(ROS)介导的 48
2.5 BP5通过PKC、p38MAPK和NF-kB诱导B细胞增殖 50
3 讨论 50
小结 54
参考文献 55
第四章 重组融合肽TBP5的基因克隆、表达及其免疫佐剂特性 61
1 材料与方法 62
1.1 材料 62
1.2 方法 63
2 结果 67
2.1 重组融合肽TBP5原核表达载体的构建及表达 67
2.2 重组融合肽TBP5的体外活性测定 68
2.3 血清中抗体HI效价分析 69
2.4 血清中抗体HA效价分析 70
2.5 血清中IL-4和IFN-γ的测定 71
2.6 动物免疫保护试验结果 71
3 讨论 73
小结 77
参考文献 78
第五章 重组免疫融合肽Tα1-BP5的表达及其免疫佐剂特性 80
1 材料和方法 80
1.1 质粒、菌株、病毒株及实验动物 80
1.2 主要试剂 81
1.3 融合肽Tα1-BP5基因的合成及原核表达 81
1.4 rTα1-BP5的体外活性测定 82
1.5 动物分组与免疫 82
1.6 血清中HI抗体效价的测定 83
1.7 血清中抗体IgG亚型测定 83
1.8 血清中IL-4和IFN-γ的测定 83
1.9 小鼠的攻毒保护试验 83
1.10 数据分析 84
2 结果 84
2.1 融合肽Tα1-BP5基因的扩增及原核表达 84
2.2 rTα1-BP5的体外活性 85
2.3 免疫小鼠血清中的HI抗体效价 85
2.4 血清中IgG抗体亚型及其效价 86
2.5 免疫小鼠血清中IL-4和IFN-γ 87
2.6 小鼠的攻毒保护试验 88
3 讨论 89
小结 91
参考文献 92
第六章 重组融合肽Tβ4-BP5基因的克隆、表达及其免疫佐剂特性 94
1 材料与方法 95
1.1 材料 95
1.2 方法 96
2 结果 99
2.1 重组融合肽Tβ4-BP5基因的克隆与表达 99
2.2 血清中HI抗体效价分析 100
2.3 血清中抗原特异性IgG抗体效价分析 101
2.4 AIV中和抗体的检测 102
2.5 血清中Th1型和Th2型细胞因子的测定 103
2.6 动物免疫保护试验结果 104
3 讨论 105
小结 107
参考文献 108
第七章 猪口蹄疫重组免疫复合肽的制备及应用 110
1 材料与方法 111
1.1 材料 111
1.2 方法 111
2 结果 115
2.1 猪口蹄疫重组免疫复合肽基因的基因工程菌株构建 115
2.2 猪口蹄疫重组免疫复合肽的可溶性表达纯化 115
2.3 肠激酶酶切猪口蹄疫重组免疫复合肽及纯化 116
2.4 四甲基偶氮唑蓝法(MTT) 117
2.5 口蹄疫病毒抗体和抗体亚型检测 118
2.6 血清中IL-4和IFN-γ的测定 118
3 讨论 119
小结 120
参考文献 121
本书总结 123
附录 128