上篇 超微细胞化学的常用仪器和样品制备技术 3
第一章 绪论 3
第一节 细胞化学的定义和发展 3
一、细胞化学的定义 3
二、细胞化学的发展 3
第二节 超微细胞化学的研究内容 4
一、生物超微结构的定义 4
二、超微细胞化学的定义 5
三、超微细胞化学的研究内容 5
第三节 超微细胞化学在生命科学研究中的应用 6
一、生物科学 6
二、农林科学 6
三、医学科学 6
第二章 透射电子显微镜的结构原理和样品制备技术 7
第一节 透射电子显微镜的发展过程 7
一、从光学显微术到电子显微术 7
二、电子显微镜发展简史 8
三、电子显微镜的分类 10
四、电镜技术发展概况 11
第二节 透射电子显微镜的结构原理 12
一、透射电子显微镜的成像原理 12
二、提高生物样品反差的方法 17
三、透射电子显微镜的结构 18
第三节 透射电子显微镜样品制备与观察 23
一、取样 23
二、固定 24
三、脱水 27
四、渗透 28
五、包埋 28
六、切片 33
七、电子染色 40
八、透射电镜观察 43
第三章 扫描电子显微镜的结构原理和样品制备技术 44
第一节 扫描电子显微镜的结构原理 44
一、扫描电子显微镜的原理 44
二、扫描电子显微镜的结构 45
第二节 扫描电子显微镜样品的制备 48
一、常规制样方法 48
二、直接观察样品的制备方法 53
第三节 环境扫描电镜技术简介 55
一、环境扫描电镜概述 55
二、环境扫描电镜结构特点 55
三、环境扫描电镜在生命科学中的应用 56
第四章 新型的电子显微技术 58
第一节 分析电子显微镜技术 58
一、分析电子显微镜概述 58
二、分析电子显微镜X射线显微化学原理 60
三、分析电子显微镜样品制备步骤 61
四、分析电子显微镜的应用 62
第二节 冷冻电子显微镜技术 62
一、生物样品的快速冷冻 63
二、冷冻固定方法简介 63
三、冷冻置换 65
四、冷冻超薄切片技术 67
五、冷冻断裂和蚀刻技术 71
第三节 冷冻电子显微镜三维重构技术 73
一、冷冻电子显微镜三维重构技术发展过程 73
二、冷冻电子显微镜三维重构原理 75
三、几种常用的电子显微镜三维重构技术及其应用 76
第五章 其他相关仪器的结构原理和应用 81
第一节 扫描隧道显微镜 81
一、扫描隧道显微镜结构原理 81
二、扫描隧道显微镜的生物样品制备 82
三、扫描隧道显微镜在生命科学中的应用 83
第二节 原子力显微镜 85
一、原子力显微镜工作原理 85
二、原子力显微镜样品的制备 87
三、原子力显微镜在生命科学中的应用 88
第三节 激光共聚焦显微镜 91
一、激光共聚焦显微镜成像原理 91
二、激光共聚焦显微镜基本特征 92
三、激光扫描共聚焦显微镜图像模式 92
四、标本制备和图像采集 94
五、激光共聚焦显微镜在生命科学中的应用 96
下篇 超微细胞化学的原理和技术 105
第六章 生物大分子及离子的常规超微细胞化学技术 105
第一节 蛋白质超微细胞化学定位 105
一、结构蛋白的定位技术 105
二、功能蛋白 生物酶的定位原理和方法 106
第二节 主要生物酶的超微细胞化学定位 112
一、水解酶 112
二、氧化还原酶 116
三、其他酶类 119
四、细胞中一些重要细胞器的标志酶定位 121
第三节 核酸的超微细胞化学技术 123
一、乙酸双氧铀染色法 123
二、孚尔根-六亚甲四胺银染色法 123
三、孚尔根-席夫-乙醇铊染色法 124
四、乙酸双氧铀-EDTA染色法 124
五、核酸酶抽提定位法 125
第四节 糖类的超微细胞化学技术 126
一、过碘酸氧化法 126
二、静电结合法 127
三、凝集素显示细胞中糖类 129
四、淀粉酶消化法检测糖原 130
第五节 脂类的电镜细胞化学技术 130
一、保存脂类的包埋剂 130
二、保存胆固醇的毛地黄皂苷法 130
三、保存磷脂的铁氰化钾法 131
第六节 细胞中相关离子定位技术 131
一、阳离子的超微细胞化学定位 131
二、阴离子的超微细胞化学定位 133
三、自由基的超微细胞化学定位 133
第七章 免疫电镜细胞化学技术 136
第一节 免疫电镜细胞化学原理 136
一、免疫电镜细胞化学发展过程 136
二、免疫电镜细胞化学相关概念 136
三、免疫电镜细胞化学原理 139
第二节 免疫电镜细胞化学制样方法 142
一、样品的前期处理 142
二、样品包埋 143
第三节 胶体金标记免疫电镜技术 145
一、胶体金的性质 145
二、胶体金的制备 146
三、蛋白质-胶体金的制备 148
四、胶体金标记免疫电镜制样 151
第四节 酶标记免疫电镜技术 155
一、酶标记抗体方法 155
二、酶标记免疫电镜技术制样举例 157
第五节 铁蛋白标记免疫电镜技术 157
一、铁蛋白制备 157
二、铁蛋白和抗体的结合 158
三、铁蛋白标记抗体的纯化 159
四、铁蛋白标记抗体的应用 159
第六节 其他免疫电镜技术和发展 160
一、冷冻超薄切片免疫电镜技术 160
二、冷冻蚀刻免疫电镜技术 162
三、扫描免疫电镜技术 163
四、免疫细胞化学与图像分析简介 165
第八章 电镜放射自显影技术 167
第一节 电镜放射自显影技术的原理 167
一、放射性同位素 167
二、核射线 167
三、核乳胶 168
四、有关参数 168
五、电镜放射自显影基本原理 169
第二节 电镜放射自显影的样品制备 170
一、放射自显影样品制备过程和电镜观察 170
二、图像的分析 176
三、放射性防护 177
第三节 电镜放射自显影技术在生命科学中的应用 178
第九章 显微细胞化学概述 180
第一节 常规细胞化学技术 180
一、核酸的细胞定位 181
二、蛋白质的细胞定位 182
三、碳水化合物的细胞定位 183
四、脂类的细胞定位 184
五、无机物质的细胞定位 185
第二节 酶细胞化学 187
一、过氧化物酶 187
二、细胞色素氧化酶 188
三、琥珀酸脱氢酶 188
四、碱性磷酸酶 189
五、酸性磷酸酶 189
六、三磷酸腺苷酶 190
第三节 免疫细胞化学技术 190
一、免疫胶体金细胞化学 190
二、免疫胶体铁细胞化学 193
三、免疫酶细胞化学 193
四、免疫荧光细胞化学 195
第十章 超微和显微细胞化学在分子生物学中的应用 198
第一节 生物大分子展层技术 198
一、蛋白质大分子展层和电镜观察 198
二、核酸大分子展层和电镜观察 200
第二节 DNA及DNA结合蛋白的电子显微术 202
一、扫描电镜和扫描透射电镜下的DNA及DNA结合蛋白成像 202
二、透射电镜下的DNA及DNA结合蛋白成像 203
第三节 核酸和核蛋白复合物的快速印迹法 203
一、电镜载网的制备 203
二、样品制备及电泳 203
三、核蛋白复合物转移固定到载网上 204
四、载网旋转金属投影及电镜成像 204
第四节 电镜原位核酸分子杂交的原理与技术 205
一、电镜原位杂交的种类 206
二、电镜原位核酸分子杂交制样步骤概述 206
第五节 电镜原位核酸分子杂交技术的应用 209
一、应用生物素标记DNA探针电镜原位杂交技术 209
二、应用地高辛标记rRNA探针的电镜原位杂交技术 211
第六节 显微细胞化学在分子生物学中的应用 212
一、光镜水平的核酸分子原位杂交 212
二、原位PCR方法 218
参考文献 220
附录Ⅰ常用试剂的配制 225
附录Ⅱ缩略语对应表 232