第一章 绪论 1
一、红豆杉资源概述 1
(一)中国红豆杉 3
(二)云南红豆杉 4
(三)西藏红豆杉 6
(四)东北红豆杉 7
(五)南方红豆杉 8
(六)引入种——曼地亚红豆杉 10
二、红豆杉的开发利用价值 11
(一)药用价值 11
(二)其他应用价值 12
三、红豆杉中主要化学成分 13
(一)紫杉烷类化合物 13
(二)非紫杉烷类化合物 25
四、紫杉醇的生物合成 27
(一)萜类前体IPP的生物合成 27
(二)紫杉醇骨架及侧链的生物合成 29
五、紫杉醇的来源 31
(一)直接从天然红豆杉植物提取 31
(二)化学全合成法 31
(三)化学半合成法 33
(四)红豆杉组织、细胞及器官培养法 34
(五)微生物发酵法 38
(六)代谢工程法 42
(七)优良红豆杉人工大规模种植 43
六、红豆杉资源加工利用技术研究现状 45
(一)紫杉醇的初提工艺 46
(二)紫杉醇纯化工艺 49
七、研究背景与目的 53
八、主要研究内容 54
参考文献 54
第二章 南方红豆杉中紫杉烷类化合物分析检测方法的研究 64
一、引言 64
(一)高效液相色谱法 64
(二)薄层色谱法 66
(三)酶联免疫吸附法 67
(四)毛细管电泳法 68
(五)细胞生物学方法 68
(六)超临界流体色谱法 68
二、实验材料和仪器 69
(一)实验材料 69
(二)实验仪器 69
三、实验方法 70
(一)标准溶液的配制 70
(二)样品溶液的制备 70
四、结果与讨论 70
(一)色谱条件的优化 70
(二)方法学的确定 71
(三)样品溶液的测定 74
五、本章小结 75
参考文献 75
第三章 南方红豆杉中紫杉烷类活性成分含量动态变化规律研究 78
一、引言 78
二、实验材料和仪器 78
(一)实验材料 78
(二)实验仪器 79
三、实验方法 79
(一)样品溶液制备 79
(二)紫杉烷类化合物的HPLC检测条件 79
四、结果与讨论 80
(一)南方红豆杉叶和茎中紫杉烷类化合物的时间分布规律 80
(二)南方红豆杉新叶萌发期新老叶与茎中紫杉烷类化合物的分布规律 82
(三)不同贮存温度对南方红豆杉中紫杉烷类化合物含量的影响 83
五、本章小结 83
参考文献 84
第四章 南方红豆杉中紫杉烷类化合物含量高效诱导技术研究 85
一、引言 85
二、紫外照射对南方红豆杉中紫杉烷类化合物含量诱导的研究 86
(一)实验材料和仪器 87
(二)结果与讨论 88
(三)本节小结 92
三、氧气空化对南方红豆杉中紫杉烷类化合物含量诱导的研究 92
(一)实验材料和仪器 93
(二)实验方法 93
(三)结果与讨论 93
(四)本节小结 94
四、酸对南方红豆杉中紫杉烷类化合物含量诱导的研究 94
(一)实验材料和仪器 95
(二)实验方法 96
(三)结果与讨论 97
(四)本节小结 99
五、酶对南方红豆杉中紫杉烷类化合物含量诱导的研究 100
(一)实验材料和仪器 101
(二)实验方法 102
(三)结果与讨论 103
(四)本节小结 105
六、本章小结 106
参考文献 107
第五章 南方红豆杉中紫杉烷类化合物提取技术研究 109
一、引言 109
(一)常用提取方法 109
(二)常用提取溶剂选择 111
二、实验材料和仪器 112
(一)实验材料 112
(二)实验仪器 112
三、实验方法 113
(一)紫杉烷类化合物的HPLC分析 113
(二)不同提取方法的样品制备 113
四、结果与讨论 115
(一)提取方法的选择 115
(二)提取溶剂浓度的选择 116
(三)提取液固比的选择 117
(四)提取时间的选择 117
(五)提取次数的选择 119
(六)工艺验证 119
五、本章小结 120
参考文献 120
第六章 大孔吸附树脂AB-8对南方红豆杉中10-DAB III和7-xyl-10-DAT的富集分离技术研究 122
一、引言 122
二、实验材料和仪器 123
(一)实验材料 123
(二)实验仪器 123
三、实验方法 124
(一)大孔吸附树脂的物理性质 124
(二)大孔吸附树脂的预处理 124
(三)树脂含水率的测定 125
(四)样品溶液的制备 125
(五)静态吸附与解吸实验 125
(六)AB-8、H1020、NKA-II树脂的吸附动力学曲线 126
(七)AB-8树脂的吸附等温线 126
(八)动态吸附、解吸实验 126
(九)树脂的吸附量和解吸率公式 126
四、结果与讨论 127
(一)静态吸附与解吸实验 127
(二)AB-8、H1020与NKA-II树脂的吸附动力学曲线 127
(三)AB-8树脂的吸附等温线 128
(四)动态吸附与解吸实验 132
五、本章小结 137
参考文献 137
第七章 南方红豆杉中紫杉烷类化合物的精制纯化技术研究 139
一、引言 139
(一)柱层析 139
(二)重结晶 141
二、实验材料和仪器 142
(一)实验材料 142
(二)实验仪器 142
三、实验方法 142
(一)正相柱层析中硅胶的预处理与硅胶柱的制备 142
(二)正相柱层析样品的制备与上样 143
(三)正相柱层析样品的洗脱 143
(四)反相柱层析中硅胶的预处理与硅胶柱的制备 143
(五)反相柱层析中样品的制备与上样 144
(六)反相柱层析中柱层析样品的洗脱 144
(七)10-DAB III的结晶与重结晶 144
四、结果与讨论 144
(一)正相柱层析对紫杉烷类化合物的分离纯化效果 144
(二)反相柱层析对紫杉烷类化合物的分离纯化效果 146
(三)10-DAB III的结晶与重结晶效果 147
五、本章小结 150
参考文献 150
第八章 南方红豆杉可再生资源高效加工利用技术中试试验 152
一、引言 152
二、南方红豆杉可再生资源匀浆空化-酶生物转化中试试验 152
(一)试验原材料与仪器设备 152
(二)中试工艺条件 154
(三)结果与讨论 154
三、负压空化提取-负压空化快速解析技术粗分离南方红豆杉中紫杉烷类化合物中试试验 155
(一)试验原材料与仪器设备 155
(二)中试工艺条件 159
(三)结果与讨论 160
四、大孔吸附树脂AB-8分离纯化南方红豆杉中7-xyl 10-DAT和10-DAB III的中试试验 161
(一)试验原材料与仪器设备 161
(二)中试工艺条件 161
(三)结果与讨论 162
五、连续中压柱层析技术分离纯化南方红豆杉中紫杉烷类化合物中试试验 162
(一)试验原材料与仪器设备 162
(二)中试工艺条件 163
(三)结果与讨论 165
六、本章小结 170
参考文献 171
第九章 南方红豆杉可再生资源高效加工利用技术的自主创新 172
一、建立了RP-HPLC同时快速分析检测南方红豆杉中紫杉烷类化合物的方法 172
二、首次建立了匀浆空化-酶生物转化技术高效诱导红豆杉中紫杉烷类化合物含量增量 172
三、首次建立了负压空化提取-负压空化快速解析技术粗分离紫杉烷类化合物 173
四、建立了应用大孔吸附树脂AB-8分离纯化7-xyl-10-DAT和10-DAB III的工艺条件 174
五、建立了连续中压正相、反相柱层析和重结晶技术分离纯化紫杉烷类化合物的工艺 174
六、结论与意义 175
第十章 中国发展红豆杉产业的主要对策 177