第一部分 器官来源的干细胞第1章 神经干细胞的分离和特征描述 3
1．引言 3
2．试剂和仪器 5
3．方法 8
参考文献 17
第2章 神经干细胞及其操作 18
1．引言 19
2．成体干细胞的体内小生境 20
3．神经干细胞的体外操作 21
4．结论和预测 30
5．神经干细胞培养规程和生物学特性 31
6．啮齿类鼠科动物神经干细胞培养 32
7．人神经干细胞培养 34
8．ICC标志定义干细胞和分化产物 35
参考文献 36
第3章 视网膜干细胞 42
1．引言 43
2．材料和方法 48
3．总结 54
参考文献 54
第4章 牙髓干细胞 58
1．引言 58
2．牙髓干细胞的鉴定 60
3．牙髓干细胞的分离 61
4．牙髓干细胞的分化 62
参考文献 65
第5章 小鼠精原干细胞的培养和移植 69
1．引言 70
2．精原干细胞（SSC） 70
3．SSC移植 72
4．SSC培养 77
5．用siRNA转染培养的小鼠SSC 83
6．结果 85
参考文献 86
第6章 成体肺中的干细胞 90
1．引言 91
2．成体肺的解剖学和细胞多样性 92
3．成体肺的干细胞表型和小生境 93
4．体内肺损伤模型 97
5．用气管上皮移植片回植模型研究干细胞在近端气道内的增殖 101
6．利用体外克隆形成率对导气部上皮的干祖细胞进行特征描述 108
7．气道SMG干祖细胞的研究模型 111
参考文献 113
第7章 胰腺细胞及其祖细胞 118
1．引言 119
2．胰腺发育 119
3．出生后的β细胞起源 121
4．已经存在的β细胞 121
5．导管 122
6．腺泡 123
7．骨髓细胞 123
8．成体干细胞 124
9．β细胞分化 124
10．总结和展望 124
11．方法学：小鼠谱系追踪实验的设计 125
参考文献 127
第8章 来自生殖细胞的亚全能干细胞：衍化生成和维持培养 130
1．引言 131
2．生殖细胞的发育 132
3．EGC的衍化生成 133
4．EG培养物的特征描述 139
5．EB形成和分析 144
6．EB源细胞形成 144
参考文献 147
第9章 来自羊水和胎盘的亚全能干细胞 151
1．引言 152
2．发育生物学中的羊水和胎盘 152
3．一种新思路：将羊水和胎盘细胞用于治疗 153
4．祖细胞的分离和特征描述 153
5．羊水和胎盘源祖细胞的分化 154
6．结论 157
参考文献 158
第10章 脐带血中的造血干细胞和祖细胞 160
1．引言：脐带血移植 161
2．人类脐带血中造血祖细胞和干细胞以及EPC的评估方法 167
3．上述方法的应用 179
参考文献 181
第11章 骨髓造血干细胞：纯化与功能分析 188
1．引言 188
2．其他的HSC表面标志物：Tie-2、Endoglin和SLAM家族受体 189
3．HSC与SPKLS的荧光染料外向通量 190
4．不同纯化方法所得HSC的特性 192
5．通过Hoechst 33342染色分选HSC的方法（SP群） 192
参考文献 196
第12章 干细胞及其分化的微阵列分析 198
1．引言 199
2．微阵列技术简介 199
3．实验设计 201
4．结果验证 215
5．干细胞及其分化微阵列的应用实例 215
6．鉴定“干性” 215
7．分化 216
8．干细胞小生境 216
9．未来研究的方向 218
参考文献 218
第13章 利用成体干细胞的组织工程学 223
1．引言 223
2．生物材料 225
3．血管生成因子 227
4．用于组织工程的成体干细胞 228
5．结论 232
参考文献 232
第14章 利用间充质干细胞的组织工程学 236
1．MSC的定义和治疗潜力 237
2．MSC的分离和扩增 238
3．MSC的多谱系分化 241
4．基于MSC的临床移植疗法 247
5．结论 249
参考文献 250
第二部分 胚胎干细胞及其衍生物第15章 小鼠胚胎干细胞 257
1．历史回顾 258
2．影响小鼠ES细胞建系效率的因素 259
3．影响小鼠ES细胞参与形成嵌合胚胎的因素 260
4．小鼠ES细胞建系期间的关键事件 261
5．ES细胞系的冻存 264
6．特征描述 264
7．操作规程 265
参考文献 270
第16章 人类胚胎培养物 272
1．引言 273
2．人类胚胎发育 273
3．胚胎活组织检查 275
4．人类胚胎培养物 277
5．结果 281
参考文献 283
第17章 人类胚胎干细胞：衍化生成和维持培养 286
1．引言 287
2．hES细胞系的衍化生成 287
3．hES细胞的维持培养 291
4．结论 294
参考文献 295
第18章 人类胚胎干细胞：特征描述和评估 298
1．引言 298
2．未分化hESC的特征描述 299
3．结论 312
参考文献 313
第19章 人类胚胎干细胞：无饲养层培养 318
1．引言 318
2．hESC无饲养层培养法 322
参考文献 325
第20章 来自胚胎干细胞的神经干细胞、神经元和神经胶质细胞 328
1．引言 329
2．操作方法 329
3．小结 341
4．培养基和添加剂 341
参考文献 343
第21章 从胚胎干细胞到造血细胞的分化 345
1．引言 346
2．方法 354
参考文献 368
第22章 从胚胎干细胞到心肌心肌细胞的分化 374
1．引言 374
2．拟胚体形成 375
3．心肌细胞分化 383
4．心肌细胞富集 384
5．结论 385
参考文献 386
第23章 从小鼠胚胎干细胞到胰岛素-生成细胞的分化 388
1．引言 389
2．材料和方法 394
3．结果 401
4．小结 403
参考文献 404
第24章 胚胎干细胞中的转基因表达和RNA干扰 408
1．逆转录病毒表达载体和ESC 408
2．RNA干扰和ESC 410
3．siRNA表达载体设计 410
4．逆转录病毒生产 411
5．逆转录病毒和慢病毒基因转移到小鼠和人ESC中 412
6．小鼠和人ESC中的转基因表达和siRNA表达 413
7．生物技术应用与医学应用 417
参考文献 418
第25章 人类胚胎干细胞中慢病毒载体介导的基因递送 421
1．引言 422
2．设计基于HIV-1的载体用于转导hESC 425
3．重组病毒颗粒的产生 429
4．hESC的转导 431
5．转导效率的测量 433
6．表达高水平转基因的转导hESC的富集 433
7．病毒滴度的确定 435
参考文献 436
第26章 用重组酶系统改造胚胎干细胞 439
1．引言 440
2．位点特异性重组 440
3．设计用于位点特异性重组的底物 444
4．产生条件性基因突变 448
5．重组酶介导的盒式交换 453
6．分子开关 454
7．实验方法 456
参考文献 464
第27章 利用胚胎干细胞的组织工程学 470
1．引言 471
2．以hESC作为用于组织工程的细胞来源时的特别考虑 472
3．特定无动物条件下培养hESC 472
4．获得所需的细胞群体 472
5．选择合适的支架 473
6．放大一个可调控的生物过程 473
7．hESC来源的结缔组织前体在组织工程的应用 474
8．hESC在MEF饲养层上的维持培养 474
9．收集样品分析 479
参考文献 482